口服液

龙胆泻肝口服液 据2010年《中国卫生统计提要》数据，心血管疾病导致的死亡人数已超过全国总死亡人数的40%，心血管疾病呈现高患病率，高致残率，高死亡率，高复发率。据国家卫生组织统计表明，目前我国心血管病患者已经超过2.7亿人，40岁以下的人群约有57%的人有不同程度的心血管疾病，心血管疾病致残率达51.9%，在人类疾病中位居第一。全球每年约有1700万人死于心血管疾病。 全球市场规模：在多数国家，心血管疾病的销售额占药物的百分比已由上世纪80年代的15%上升到目前的20%左右。据市场研究机构Kalorama infimation 公司的报告全球心血管处方销售额居所有药品销售大类名的首位，预计2010年随人口老龄化和新药类别引入，药物销售额超过130亿美元。 我国心血管药物的市场规模：我国每年死于心血管疾病的人约有260万，2009年我国心血管药物上医药行业药物领域市场份额为13.40%,并在不断扩大，我国卫生部的一项全国普查显示，我国成年人高血压发病率为18.8，即高血压患者约有1.6亿，在心血管疾病中占据的比例超过了50%。 西医一般用降压药物治疗高血压同，需要长期服用降压药，副作用较大。中医药治疗高血压可以保护心脑肾等器官并可减小副作用。 高血压中医称为风眩，中医认为风眩之病位虽在心脉，影响脑神，但其因常与肝肾阳亢阴虚有关。素体阳盛，肝胆上亢，上扰清窍，，发为风眩。风眩日久不愈，可影响及心，并可导致中风，内里病情危重。 《医方集解》记载龙胆泻肝汤清泻肝胆实火，清利肝经温热，可治疗风眩诸症。 处方：龙胆草（6g） 黄芩（9g） 栀子（9g） 泽泻（12g） 木通（6g） 当归（3g） 生地黄（9g） 柴胡（6g） 车前子（9g）生甘草（6g） [原书无用量] 龙胆草有效成分为龙胆苦苷，具有清温热，利肝胆，消炎等作用，可用水提法提取。 黄芩有效成分为黄芩酮类化合物，以黄芩苷的含量为最高，具有抗氧化，抗菌，增强免疫的作用，可用水提法处理。 栀子有效成分为环烯醚萜苷，有机酸，色素，主要为藏红花素等，栀子苷具有抗炎，解热，利胆和清泻作用，绿原酸是在机酸酯类成分，具有抗炎活性，藏红花素具有利胆，降血脂作用，可用水提法和醇提法混合提取。 泽泻主要含三萜，倍半萜，多糖等成分，其药效学表明，泽泻除了具有利尿消肿活性外，还有抗脂肪肝、降血脂、抗过敏等活性，可采用醇提法提取。 木通高主要含三萜，三萜皂苷，氨基酸，木通酸等，可采用醇提法并超声处理方法提取。 当归主要含挥发油，有机酸，多糖类，香豆素类，黄酮类等。可采用水蒸汽蒸馏法和水煎煮的提取方法。 生地黄主要含梓醇等环烯萜苷类，低聚糖，多糖，氨基酸等，可采用水提法提取。 柴胡主要含柴胡皂苷，挥发油等，可采用煎煮和蒸 馏提取。 车前子主要含车前子胶，黄酮类，多糖，环醚萜类，车前子苷等，可采用水提，醇提或浸渍提取。 剂形选择：本处方日服剂量为69g,宜制成口服液，口服液能综合提出中药的多种有效成分，保证制剂综合疗效，吸收快，奏效迅速，可大量生产，应用方便，经浓缩，服用量羊减少，加入矫味剂口感好，易为患者接受，质量稳定，携带、保存和服用方便，准确。 工艺设计与工艺路线拟定： 提取工艺研究： 1 由于龙胆草为处方中君药，采用L我（34）正交表，以出膏率和龙胆苦苷提取为指标，以浸泡时间，加水量，煎煮时间，煎煮次数为考察因素，进行正交实验，结果见表1-1 表1-1 煎煮液提取工艺因素水平 因素水平 A浸泡时间（min） B加水量(倍) C煎煮时间 D煎煮次数 1 0 4 1.0 1 2 30 5 2.0 2 3 60 6 3.0 3 表1-2 正交实验及结果 序号 浸泡时间（min） 加水量（倍） 煎煮时间（h） 煎煮次数 出膏率 评分 龙胆苦苷提取率 评分 综合分 1 0 4 1.0 1 16.09 .490 1.83 0.821 1.311 2 0 5 2.0 2 26.55 0.808 1.74 0.780 1.588 3 0 6 3.0 3 32.87 1 726 4 30 4 2.0 3 27.82 0 581 5 30 5 30. 1 20.23 0 453 6 30 6 1.0 2 25.86 0 787 7 60 4 3.0 2 26.44 0 499 8 60 5 1.0 3 27.13 0 596 9 60 6 2.0 1 18.97 0 308 K1 1.542 1.464 1.565 1.357 K2 1.607 1.546 1.492 1.625 K3 1.468 1.607 1.559 1.634 R 0.139 0.143 0.073 0.277 表1-3 实验结果的方差表 因素 离差平方和 自由度 均方 F值 P值 A 0.029 2 0.0145 2.900 0.05 B 0.031 2 0.0155 3.100 0.05 C 0.010 2 0.005 1.000 0.05 D 0.148 2 0.074 14.800 0.05 F0.05（2，2）＝19.000 根据表1-2分析数据结果可知：各因素对实验结果的影响大小依次为D,B,A,C;最佳提取工艺为A2B3C1D3，即浸泡30 min，加6倍于药材量的水，煎煮3次，每次1h。根据表1-3方差可知，浸泡时间，加水量，煎煮时间，煎煮次数对实验结果均无明显影响，综合考虑生产成本，提取效率，临床服用量，将最适工艺定为荮村浸泡30min，加6倍量水，煎煮2次，每次1h为最适工艺。 ②因处方中药物的有效成分为苷类及黄酮类，选择80%乙醇浸出物作评价指标，研究方法用正交试验[Lq(34)],筛选因素为提取用乙醇浓度，乙醇用量，提取次数，提取时间，各因素分设三个水平，结果见表2-1， 2-2 表2-1 醇提正交试验表头设计 水平 因 素 乙醇浓度（A） 乙醇用量（倍数）（B） 提取次数(C) 提取时间（n）(D) 1 70% 6 1 1 2 60% 9 2 1.5 3 50% 12 3 2 表2-2 醇提正交试验（一） 试验 因素 80%乙醇浸出物（%） A B C D 1 1 1 1 1 11.37 2 1 2 2 2 11.92 3 1 3 3 3 12.28 4 2 1 2 3 10.52 5 2 2 3 1 11.49 6 2 3 1 2 11.29 7 3 1 3 2 10.03 8 3 2 1 3 11.56 9 3 3 2 1 10.77 Ⅰ 35.35 31.92 34.22 33.63 Ⅱ 33.30 34.97 33.21 33.24 Ⅲ 32.36 34.34 33.80 33.36 Ⅰ 11.86 10.64 11.41 11.21 Ⅱ 11.10 11.66 11.07 11.08 Ⅲ 10.79 11.45 11.27 11.45 Ⅰ2 1265.2249 1018.8864 1171.0084 1130.9769 Ⅱ2 1108.8900 1222.9009 1102.9041 1104.8976 Ⅲ2 1047.1696 1179.2356 1142.4400 1180.6096 SS 1.8157 1.7285 0.116 0.2155 试验结果与原工艺不能吻合，再用君药龙胆的胡效成分—龙胆苦苷含量作评价指标。结果见表2-3 表2-3 醇提正交试验（二） 试验 因素 龙胆苦苷提取率（%） A B C D 1 1 1 1 1 9.86 2 1 2 2 2 11.97 3 1 3 3 3 12.16 4 2 1 2 3 6.29 5 2 2 3 1 9.28 6 2 3 1 2 10.67 7 3 1 3 2 6.89 8 3 2 1 3 6.99 9 3 3 2 1 7.87 Ⅰ 33.99 23.04 27.52 27.01 Ⅱ 26.24 28.24 26.13 29.53 Ⅲ 21.75 30.70 28.33 25.44 Ⅰ 11.33 7.68 9.17 9.00 Ⅱ 8.75 9.41 8.71 9.84 Ⅲ 7.25 10.23 9.44 8.48 Ⅰ2 1155.3201 530.8416 757.3504 729.5401 Ⅱ2 688.5376 797.4976 682.7164 872.0201 Ⅲ2 473.0625 942.4900 802.5881 641.1936 SS 25.5600 10.1964 0.8254 2.8382 从两个正交试验结果可见，本方应用12倍量70%乙醇提取3次，每次1.5h。溶媒用量9倍与12倍之间相差不在，从节约成本出发，可取9倍量，而溶媒70%乙醇其提取效果有显著差异，不可调为50%。故本方应用9倍量70%乙醇提取3次，每次1.5h。 分离纯化工艺研究： 水提液试用不同转速高速离心法纯化，结果见表3-1 表3-1 水提液除杂试验 药液用量（ml） 除杂方法 浸膏率 龙胆苦苷提取率（%） 50 12000转/min 16.01 10.33 50 14000转/min 15.49 10.80 50 16000转/min 15.21 9.62 从结果可知，最佳转速选用14000转/min。 浓缩工艺研究： 浓缩液以温度，相对密度，龙胆苦苷提取率为考察因素，结果如表4-1 表4-1 浓缩液浓缩试验 组别 温度（℃） 相对密度 龙胆苦苷提取率 1 40 1.11 10.11 2 50 1.18 10.66 3 60 1.23 9.92 4 70 1.30 9.61 由实验结果可知，最佳浓缩工艺为60℃浓缩至相对密度1.23。 龙胆苦苷口服液制备： 质量草案 龙胆泻肝口服液 Longdan Xiegan Kufuye 【处方】龙胆草（1998g） 黄芩（2997g） 栀子（2997g） 泽泻（3996g） 木通（1998g） 当归（999g） 生地黄（2997g） 柴胡（1998g） 车前子（2997g）生甘草（1998g） 【制法】（见龙胆苦苷口服液制备流程） 【性状】本品为深棕色液体，有少量沉淀；气清香，味苦。 【鉴别】(1)取本品10ml，置水浴浓缩至干，加甲醇10ml，使溶解，滤过，滤液蒸干，加甲醇2ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。另取龙胆苦苷对照品，加甲醇制成每1ml中含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录 Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层色板上，以乙酸乙酯—甲醇—水(20:2:1)为展开剂，展开2次，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，显相同颜色的荧光斑点。 (2)取本品1ml，加50%甲醇2ml，超声处理40分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取桅子苷对照品，加乙醇制成每1ml含4mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录 Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯—丙酮—甲酸—水(5:5:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点;再喷以10%硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 (3)取本品1ml，加乙酸乙酯—甲醇（3:1）的混合溶液30ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，取上清液作为供试品溶液。取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml中含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录 Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯—乙酸乙酯—甲酸（10:3:1:2）为展开剂，预饱和30分钟，展开，取出，晾干，置紫外灯（365nm）下检。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 【检查】相对密度 应不低于1.07(中国药典2010年版一部附录 Ⅶ A)。 pH值 应为4.5～6.5(中国药典2010年版一部附录 Ⅶ G)。 总固体 精密量取本品20ml置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴上蒸干，在105℃干燥3小时， 总固体不得少于18.0％。 其他 应符合合剂项下有关的各项(中国药典2010年版一部附录 Ⅰ J)。 【含量测定】照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录 Ⅵ D)测定。 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合娃胶为填充剂，甲醇—水(3:7)为流动相，检测波长240nm。理论板数按龙服苦苷峰计算应不低于3000。 对照品溶液的制备 精密称取龙胆苦苷对照品适量，加60％甲醇水溶液稀释制成每1ml中含0.2mg的溶液。供试品溶液的制备 精密量取本品5ml，加于已处理好的氧化铝柱上(中性氧化铝6g，φ2cm×20cm，湿法装柱)，用水洗脱，弃去初流出液约3ml，至黄色带近柱底收集续流出液置25ml量瓶中，至接近刻度时停止收集，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。 测定法 分别精密量取对照品溶液2、4、6、8、10μl及供试品溶液10μl，注入液相色谱仪， 记录色谱图，按外标法计算，即得。 本品每1ml含龙胆苦苷(C16H20O9)，不得少于0.03mg。 【功能与主治】清肝胆，利湿热。用于肝胆湿热，头晕目赤，耳鸣耳聋，肋痛口苦，尿赤涩痛，湿热带下。 【用法与用量】口服，一次10ml，一日3次。 【规格】每支10ml 【贮藏】避光，密封保存。 质量标准草案起草说明 【名称】本方来源于《医方集解》，由龙胆，泽泻等组成。按规定，在命名时除了剂型相应的变动外，名称的其他部分必需沿袭原名，故命名为“龙胆泻肝口服液”。 【处方】本品由龙胆，栀了，黄芩等10味中药组成，具有泻肝胆实火，清下焦湿热之效。本方治证，是由肝胆实火，肝经湿热循经上扰下注所致。上扰则头巅耳目作痛，或听力失聪；旁及两胁则为痛且口苦；下注则循足厥阴肝经所络阴器而为肿痛、阴痒。湿热下注膀胱则为淋痛等症。故方用龙胆草大苦大寒，上泻肝胆实火，下清下焦湿热，为本方泻火除湿两擅其功的君药。黄芩、栀子具有苦寒泻火之功，在本方配伍龙胆草，为臣药。泽泻、木通、车前子清热利湿，使湿热从水道排除。肝主藏血，肝经有热，本易耗伤阴血，加用苦寒燥湿，再耗其阴，故用生地、当归滋阴养血，以使标本兼顾。方用柴胡，是为引诸药入肝胆而设，甘草有调和诸药之效。综观全方，是泻中有补，利中有滋，以使火降热清，湿浊分清，循经所发诸证乃克相应而愈。 本方以龙胆为君，配合黄芩、山栀泻肝胆实火；木通、车前、泽泻清热利湿，用生地、当归防其火盛伤阴，再用甘草和中解毒，柴胡引经疏气。 【制法】 ⑴原料荮的提取工艺是：用9倍量70%乙醇提取3次，每次1.5h，再将药渣浸泡30min，加6倍量水，煎煮2次，每次1h，合并水提液和醇提液。 ⑵分离纯化工艺研究：离心选用14000转/min进行纯化。 ⑶浓缩工艺研究：60℃浓缩至相对密度1.23。 【性状】根据中试产品的性状进行客观的描述。 【鉴别】 ⑴药品与试剂 龙胆苦苷（批号：747—9102）、桅子苷（批号：0728—200005）黄芩苷（批号：100049—200308），泽泻对照药材（批号：0902—9806），龙胆对照药材（批号：0752—3854）均购自中国药品生物制品检定所；3批中试产品批号分别为：05118、05119、051120，05121，05122，05123由江苏七零七天然制药有限公司生产并提供， 硅胶G由青岛海洋化工厂生产，批号：20101012；其他试剂均为分析纯。 ⑵方法与结果 1） 龙胆的鉴别 龙胆主要含龙胆苦苷，参照《中国药典》（2010版一部）龙胆的薄层色谱鉴别。以中国药品生物制品检定所提供的龙胆苦苷对照品为对照，以乙酸乙酯—甲醇—水（20:2:1）为展开剂能得到较好的分离效果，缺龙胆的阴性样品没有干扰。结果见图1。 图1 2） 栀子的鉴别 栀子主要含桅子苷，参照《中国药典》（2010版一部）栀子的薄层色谱鉴别。以中国药品生物制品检定所提供的栀子苷对照品为对照，以乙酸乙酯—丙酮—甲酸—水(5:5:1:1)为展开剂能得到较好的分离效果，缺栀子的阴性样品没有干扰。结果见图2。 图2 3） 泽泻的鉴别 取本品2ml，加甲醇50ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml溶解，以乙酸乙酯提取三次（20ml,15ml,15ml）合并提取液，水浴蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液。另取泽泻对照药材2g,加甲醇20 ml 使溶解，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为对照药材溶液，吸取上述两种溶液各8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯—乙酸乙酯—甲酸（10:2:0.7）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置，显相同紫红色的斑点。结果见图3。 图3 4） 当归的鉴别 当归含挥发油。以中国药品生物制品检定所提供的当归药材为对照药材，参照《中国药典》（2010版一部）当归的薄层色谱鉴别。，用正已烷－醋酸已酯（9:1）为展开剂，在紫外灯（365nm）下检视出当归的药材的荧光斑点，但当归的阴性样品有干扰，故检识挥发油用心鉴别当归不能成立。 此外，对方中黄芩、木通、生地黄、柴胡、车前子、甘草进行了薄层色谱鉴别研究，均因阴性干扰，未能成功。 【检查】 ⑴砷盐：依据《中国药典》和《药品注册#管理办法#》的规定，对本品的砷盐进行了考察，方法如下： 取本品5ml，蒸干，先用小火烧灼使炭化，再500~600℃炽灼至完全炭化，加盐酸4ml，水15ml，依法检查（《中国药典》2010年版一部附录 Ⅸ F）结果均低于2ppm，无必要列入标准正文，考察结果见表5-1 ⑵重金属：依据《中国药典》和《药品注册管理办法》的规定，对本品的砷盐进行了考察，方法如下： 取本品5ml,蒸干，缓缓炽灼到完全炭化，放冷，另硫酸1ml，使湿润，用低温加热到硫酸除尽后，加硝酸0.5ml，蒸干，至氧化氨除尽后，放冷，在500~600℃炽灼使完全炭化，放冷，加盐酸2ml，置水浴上蒸干后，加水15ml，滴加氨试液至酚酞指示液显中性，再加醋酸盐缓冲液（PH3.5）2ml,微热溶解后，移置纳氏比色管中，加水稀释成25ml；另取配制供试品溶液的试剂，置瓷皿中，蒸干后，加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml,与水15ml，微热溶解后，移置纳氏比色管中加标准铅溶液一定量，再用水稀释成25ml，依法检查（《中国药典》2010版一部附录 Ⅸ E），即得。考察结果均低于20ppm，无必要列入标准正文。考察结果见表5-1 表5-1 重金属、砷盐检查结果 检查项目 批号 05118 05119 051120 重金属 ＜20ppm ＜20ppm ＜20ppm 砷盐 ＜2ppm ＜2ppm ＜2ppm ⑶装量差异：依据《中国药典》（2010版一部附录 Ι J）合剂通则进行检查，结果见表5-2，均符合规定。 表5-2 装量差异检查结果表 批号 每支装药量 05118 9.93 9.91 9.93 9.95 9.94 X=9.932 限度±5% 即9.500~10.50 05119 9.56 9.76 9.77 9.89 9.76 X=9.748 限度±5% 即9.500~10.50 05120 9.86 9.66 9.87 9.86 9.75 X=9.80 限度±5% 即9.500~10.50 【含量测定】龙胆为为本方的君药，龙胆苦苷为龙胆的特征性有效成分，，故选择龙胆苦苷作为控制本品质量的指标成分，龙胆中龙胆苦苷的测定，已报道的有高效液相色谱法，薄层扫描法，高效毛细管电泳法。本标准参照有关文献，建立高效液相色谱法测定本品中龙胆苦苷含量的方法，具有分离效果好、灵敏、准确等优点。 ⑴仪器与材料： ①仪器：日立－L－2000高效液相色谱仪，Diamonsil C18 （5μ 250×4.6nm）色谱柱，306泵，715数据处理软件系统，MD-119－紫外－可见检测器。 ②试剂：甲醇为色谱试剂（一级），水为重蒸水，其它试剂均为分析纯，3批中试产品批号分别为：05118、05119、051120，由江苏七零七天然制药有限公司生产并提供。 ③对照品：龙胆苦苷为中国药品生物制品检定所提供（747—9102供含量测定用），在选定色谱条件分离后，按归一化法计算含量为99.345%。使用前置干燥器中至恒重。龙胆苦苷对照品的色谱图见图（略） ⑵色谱条件： 色谱柱：Diamonsil ODS柱（5μ 250×4.6nm），ODS预柱。 流动相：甲醇甲醇—水(3:7)。 流速：1.0ml/min；柱温：35℃；检测波长：240nm；灵敏度：0.05AUFS。 在选定条件下，龙胆苦苷和样品中其它组分色谱峰可基线分离，龙胆苦苷与其相邻色谱峰的分离度大于1.5；按龙胆苦苷峰计算，理论板数（N）为4000以上，拖尾因子（T）为1.04，同时取阴性供试品溶液进样，结果表明，阴性供试品在龙胆苦苷色谱峰位置处无相应峰出峰。样品及阴性供试品的高效液相色谱图（略）。 ⑶线性范围的考察：精密量取龙胆苦苷对照品溶液（0.0396mg/ml），2、4、6、8、10、12μl进样，记录色说图，测定其峰面积，结果见表6-1.并以峰面积值（A）对进样量（C）进行回归，得标准曲线方程方法。 表6-1 龙胆苦苷对照品测定结果 进样量（μg） 0.0792 0.1584 0.2376 0.3168 0.396 0.4752 峰面积 55071 107072 159404 216174 264125 316530 A=26217.48571C-2873.6,r=0.998 并以峰面积（A）对进样量（C）作图，得一直线。 以上结果表明，在0.0792~0.4752μg范围内，龙胆苦苷峰面积与进样量有良好的线性关系。 ⑷供试品溶液制备： ①提取时间的考察：精密量取本品（批号05118）5.0ml，蒸干，置50ml 量瓶中，加甲醇40ml，分别超声处理不同时间，放冷后用甲醇定容，滤过，取续滤液进样，测定其含量，结果见表7-1。 表7-1 不同超声处理时间的比较（n＝3） 超声时间（min） 20 30 40 50 60 龙胆苦苷含量（mg/ml） 1.51 1.76 7.77 1.78 1.78 以上结果表明，超声处理30分钟，含量不再增加，为了保证提取完全，故确定超声处理时间为40分钟。 ②提取方法的考察：精密量取本品（批号05118）5.0ml，蒸干，置50ml 量瓶中，加甲醇40ml，分别用不同的取方法提取40分钟，提取液放冷后用甲醇定容，滤过，取续滤液进样，测定其含量，结果见表7-2。 表7-2 不同提取方法比较（n＝3） 提取方法 超声 回流 振摇 龙胆苦苷含量（mg/ml） 1.78 1.78 1.75 以上结果表明 ，超声处理和回流提取含量高，同时超声简便，故确定提取方法为超声提取。 ③提取方法的考察：精密量取本品（批号05118）5.0ml，蒸干，置50ml 量瓶中，加甲醇40ml，用超声提取40分钟，提取液放冷后用提取溶剂定容，滤过，取续滤液进样，测定其含量，结果见表7-3。 表7-3 不同溶剂提取的比较（n＝3） 提取溶剂 50%甲醇 70%甲醇 甲醇 乙醇 龙胆苦苷含量（mg/ml） 1.65 1.77 1.78 1.78 以上结果表明，70%甲醇、甲醇、乙醇三种溶剂的所测定含量差不多，但用甲醇所提取的供试品溶液，杂质少，故采用甲醇为样品供试液的提取溶剂。 ⑸精密度试验：精密吸取上述对照品溶液5μl和供试品溶液10μl，重复进样5次，龙胆苦苷峰面积值的RSD＜2%，结果见表8-1。 表8-1 精密试验结果 试验次数 对照品峰面积 X 样品峰面积 X 1 134067 133497 110278 109384 2 133292 109033 3 133641 110345 4 133465 109409 5 133321 107857 RSD=0.27% RSD=0.93% 试验表明，精密度良好。 ⑹稳定性试验：取样品供试液（批号 05118）分别于0小时、4小时及8小时分别进样10μl，测得样品中龙胆苦苷峰面积值的RSD＜2%，结果见表8-2。 表8-2 稳定性试验结果（n=2） 测定时间 峰面积 X RSD(%) 0小时 109384 110420 1.30 4小时 112067 8小时 109811 试验结果表明，样品供试液在8小时内稳定性良好。 ⑺重现性试验：按拟定的含量测定方法，对同一批样品（ 批号 05118）分别制备样品供试液，测得峰面积值并计算含量，RSD＜2%，结果见表8-3。 表8-3 样品重现性试验（n=2） 试验号 样品体积(ml) 峰面积值 含量（mg/ml） RSD(%) 1 9.93 118270 1.77 0.94 2 9.91 115479 1.81 3 9.93 121454 1.78 4 9.95 130037 1.79 5 9.94 125882 1.77 ⑻回收率试验：取已知含量的样品（ 批号 05118）约5ml，分别加入对照品溶液（0.396mg/ml）1ml、2ml、3ml，按上述样品制备方法和色谱条件，制备加样回收供试品溶液并注入高效液相色谱仪，以下列公式计算回收率，结果见表8-3。 表8-3 回收率试验结果（n=2） 编号 样品体积（ml） 龙胆苦苷量（mg） 加入龙胆苦苷(mg) 测得量(mg) 回收率（%） 1 4.51 0.4330 0.396 0.8318 100.70 2 4.42 0.4439 0.396 0.8398 99.86 3 4.33 0.4227 0.792 1.1825 95.94 4 4.63 0.4728 0.792 1.2462 97.65 5 4.45 0.4071 1.188 1.5947 99.97 6 4.34 0.4465 1.188 1.6186 98.63 X=99.78 试验结果表明：回收率在95%~100%之间，加样回收良好。 ⑼样品测定：分别精密吸取对照品溶液（0.0396mg/ml）5μl与样品供试溶液适量，按上述色谱条件测定，结果见表8-4。 表8-4 样品中龙且苦苷含量测定结果（n=2） 批号 龙胆苦苷含量（mg/ml） RSD（%） 05118 1.774 0.97 05119 2.449 1.45 05120 2.156 0.38 05121 1.205 0.67 05122 1.236 1.78 05123 1.213 0.54 根据上述试验结果，考虑到药材的来源，以及生产、贮藏等因素，每支装10ml，故暂定本品每支含龙胆苦苷不得少于0.5mg。 ⑽龙胆药材的含量测定：精密称取药材粉未0.5 ,置50ml量瓶中，加甲醇40ml 超声处理30分钟，放冷后，加甲醇到刻度，滤过，取续滤液作为药材供试品溶液，照正文所述色谱条件，取龙胆苦苷对照品溶液5μl和药材供试品溶液适量，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按峰面积值用外标法计算含量，即得。 暂定龙胆药材含龙胆苦苷(C16H20O9)不得少于1%，方可用于本制剂投料。 药材含量测定采用高效液相色谱法，是基于与制剂相同的测定条件，消除因测定方法不同带来的误差，同时可更好地控制产品质量，《中国药典》中龙胆药材的测定方法采用薄层—紫外分光光度法。为此，我们对三批药材采用两种测定方法分别进行测定，结果如表8-5。 表8-5 三批药材的含量测定结果（n=3） 批号 高效液相色谱法含量（%） RSD(%) 药典法薄层色谱—UV含量（%） RSD(%) 1 1.167 1.67 1.055 1.89 2 1.747 0.99 1.685 1.23 3 1.678 1.52 1.590 1.78 根据测定结果，考虑到药材产地、加工炮制、贮藏等因素和《中国药典》中含量限度规定，暂定含量不得少于0.5%。 【功能与主治】本品功能与主治，与药典收载的“龙胆泻肝丸（大蜜丸）”的功能与主治一致。即：清肝胆，利湿热。用于肝胆湿热，头晕目赤，耳鸣耳聋，肋痛口苦，尿赤涩痛，湿热带下。 【用法与用量】依据龙胆泻肝丸（大蜜丸）用量折算而得。每支相当于龙胆泻肝丸（大蜜丸）4粒,故用法与用量为：口服，一次10ml，一日3次。 【规格】依据制剂工艺的研究及有关规定的要求，确定每支10ml。 【贮藏】依据制剂工艺的研究及有关规定的要求确定为避光，密封保存。 成品 灭菌略特 分装 配液 浓缩液 合并 水提液 水提 醇提液 药渣� 药材 醇提 成 品 灭菌 分装（每支100ml） 浓缩液 合并60℃浓缩至相对密度1.23 板框压滤 离心（14000转/min）30min 水提液 加6倍量水，浸泡30min煎煮2次，每次1h 醇提液 药渣 9倍量70%乙醇提取3次，每次1.5h 药材饮片 _1351777641.unknown _1351779461.unknown _1352019774.unknown _1351777419.unknown