通脑心脉灵对动脉粥样硬化大鼠血脂、MDA的影响

现为增强回肠收缩幅度，但对收缩频率影 响很小。倪依东等 j报道槟榔水煎液及槟榔碱纯品水溶液对 离体胃肠标本的收缩运动均有明显的增强作用，主要表现在 张力的增加和振幅的变化。 据报道l_7~ ，槟榔随着加热时问的延长，槟榔碱有不同程 *通讯作者：李敬孝，Tel：13936165909 度的挥发，含量下降，炒黄低于生品，炒焦低于炒黄，炒炭含量 甚微。从本实验可以看出槟榔经不同方法炮制后对 胃肠运动 有明显的影响，生槟榔、炒黄槟榔、槟榔炭均不能促进 胃排空 和肠推进胃肠运动，而炒制程度较浅的焦槟榔、炒制程度较深 的焦槟榔可不同程度的促进胃肠运动以及胃液的分泌。这与 文献报道不一致，分析原因这可能与槟榔通过加热时间越长， 虽然主要物质槟榔碱含量减少，但有效成分在药物中的组成 配比发生变化或者产生其他有效物质有关。具体的机制还需 进一步研究。 参考文献： [1]刑建峰，封卫毅，侯家玉 ．小鼠胃排空及小肠推进试验方法的 探讨I-J]．北京中医药大学学报，2003，26(4)：50． E2]陈奇 ．中药药理研究 方法学 [M]．北 京：人 民卫生 出版社， 2006：438． [3]邹百仓 ．槟榔对实验大鼠胃平滑肌运动影响的研究[J]．湖南中医 杂志，2003，l9(2)：66~67． [4]邹百仓 ．槟榔对功能性消化不良模型大鼠胃运动的影响VJ]．中国 中西医结合消化杂志，2003，11(1)：6～8． [5]杜志敏 ．槟榔碱对离体肠自发性蠕动的影响EJ]．解放军医学高等 专科学校学报，1999，27(2)：86~87． [6]倪依东、王建 华、王汝俊 ．槟榔及槟榔 碱对 胃肠作用 的对 比 研究EJ]．中药药理与临床，2004，20(2)：11～l2． [7]张定佳 ．不同炮制方法对槟榔有效成分的影响[J]．中国中药杂 志，1990，15(12)：24． [8]张林丽．槟榔不同炮制品中槟榔碱含量的比较[J]．中药材，2002， 25(6)：404～405． (收稿 日期：201O—O1一O7) 2010年第31卷第3期 云 南 中 医 中 药 杂 志 53 加味)。用水提醇沉方法制成颗粒剂 ，由黑龙江 中医药大学附 属第二医院制剂室提供。 1．1．2 实验动物 雄性 Wistar大白鼠 6O只，体重 180～ 220 g，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。合格证号： 黑动字第 PO0102004。 1．1．3 实验仪器 电子天平(梅特勒一托利多仪器有限公 司，PL202--S型)，高速台式离心机(上海医用分析，TGI．16c 型)，分光光度计(上海第三分析仪器厂，VlS一723)，全自动生 化分析仪(法国，LISA 300plus) 1．2 实验方法 1．2．1 对血脂的测定 按照文献[1～4]介绍的方法进行除 空白组外各组给予高脂饲料喂养 12周，在造模开始前 3 d内 除空白组外其余各组每天同一时间灌胃给予维生素 D3，总剂 量为 5O万 IU／kg，4周后，禁食 12 h大鼠心脏取血，抽查各组 大鼠血清总胆固醇含量，观察主动脉形态学改变。高脂饲料 喂养各组大鼠与空白对照组大鼠比较有 明显差异后，各治疗 组分别开始灌胃用药。连续用药治疗8周，心脏采血 2．5mL， 置于抗凝试管中，3000 r／min离心 15 min，分离出血清，按测 定指标分装不同试管 中，采用全 自动生化分析仪测定血清总 胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDI 一C)含量。 根据文献介绍的 FriedwaldC5]计算 出低密度脂蛋 白胆 固 醇(LDI 一C)，Friedwald公式：I DI 一C—TC+(HDL—C+ TG／2．2)。 1．2．2 对丙二醛 (MDA)含量的测定 心脏取血分离血浆 ， 采用硫代巴比妥酸(TBA)比色法检测 MDA含量。原理：过 氧化脂质降解产物 中的 MDA可与 TBA缩合 ，形成红色产 物，在 532nm处有最大吸收峰。按照下列公式计算 MDA浓 度：MDA含量(nmol／ml )一(测定管吸光度 一空 白管 吸光 度)÷(管吸光度一空 白管吸光度)×(10nmol／mI )×样 品稀释倍数。 1．3 数据处理 实验数据以均数±标准差( ±S)表示 ，组 间比较采用 t检验和方差分析方法。 2 实验结果与讨论 2．1 实验结果 2．1．1 通脑心脉灵对血脂的影响 见表 1。 表 1 各组大鼠TO、TG，HDL-0、LDL-C比较(mmol／I ，n--8， i s) 与正常组比较，#P<0．05，##P<0．01，###P<0．001；与模型组 比较 P<0．05， P<0．01 结果显示 ，模型组大鼠TC、TG、LDL-C明显升高，HDL-C 下降，与 空 白组 比较 差 异 有 显 著 性 意 义 (P< 0．01或 P<0．001)。与模型组比较，各治疗组血脂的各项指标都有变 化。通脑心脉灵低剂量组 TG、TC、LDL-C均值都降低，但无 统计学意义(P>0．05)；银杏叶对照组和通脑心脉灵高、中剂 量组 TG、TC、LDL-C降低明显，与模型组比较差异有显著性 意义(分别为 P<0．05、P<0．01)。治疗组中除通脑心脉灵低 剂量组之外，HDI，C均升高，与模型组比较差异有显著性意 义 (P<0．O1)。 2．1．2 通脑心脉灵对实验性动脉粥样硬化大 鼠血清 MDA 含量的影响 见表 2。 表 2 不同组别大鼠血清 MDA浓度的比较(n一8， 士S) 组别 MDA(nmol／mI ) 空白组 模型组 阳性对组 高剂量组 中剂量组 低剂量组 与 正 常 对 照 组 比较 ⋯ P< 0．001；与 模 型 对 照 组 比 较，##P<0．01 结果显示(见表 2)：实验 12周末结束时，模型组大鼠血清 MDA明显升高，与空白组 比较有明显差异(P<0．001)。与模 型组比较，银杏叶对照组和通脑心脉灵高、中剂量组血清 MDA降低明显，差异有显著性意义(P0．05)。 结论：本试验条件下，海枫藤水煎液未引起小鼠明显的急性毒 性反应，没有明显诱发小鼠骨髓细胞微核发生率增加。 关键词：海枫藤；急性毒性试验；微核试验 中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：1007--2349(2O1O)O3一O。54一O2 海枫藤(Marsdenia o cinalisTsiang et P．T．Li)全株可药 用，有舒经通络、散寒 、除湿、止痛等功效。海枫藤属于萝蘼科 牛奶菜属，主产于西南地区和台湾省 ，藤本植物ll1]。在彝族地 区特别是哈尼族地区常用于治疗风湿、关节炎等病症Ⅲ2_。有 关海枫藤毒性作用的研究国内尚未见报道，本实验以小鼠为 研究对象，通过经口急性毒性实验、骨髓红细胞微核实验对海 枫藤的急性毒性和致突变性进行初步探讨。 1 实验材料 1．1 受试药物 海枫藤水煎液，临床常用量为每日1O～15 g (3～5钱)，即 0．17～0．25 g／kg．bw，水煮内服。本实验所用 受试物按下法提取 ：取海枫藤茎叶干燥粉碎物 1000 g加水 1．2I 浸泡过夜后文火煎煮沸 1 h，用 3层无菌纱布滤过；药渣 再煮提 2次，每次加水 1 I ，大火煮开，文火煮沸 1 h。合并煮 提液，浓缩至 250 mI ，即得棕褐色浸膏，每 mI 相当于生药 4 g，置4℃冰箱保存，备用。实验时充分振摇、混匀受试药物 原液(4 g／mL)，取浓度为 4 g／mL的原药液，用纯化水稀释成 不同浓度供小鼠灌胃用。 1．2 动物 SPF级 ICR小鼠，3～4周，体重 18～26 g，雌雄 兼用，由昆明医学院实验动物中心提供，生产许可证号：SCXK (滇)2005--0008。 1．3 仪器 日本产 CH～2型 Olympus普通显微镜；电子分 析天平：AI 104，梅特勒一托利多仪器(上海)有限公司；JJ2ooo 型电子天平，常熟双杰测试仪器厂。 1．4 药品及试剂 注射用环磷酰胺(CP)，白色粉末 ，纯度 99 ，200 mg／瓶，室温保存，批号：06081621，江苏恒瑞医药股 份有限公司生产；甲醇 ，天津化学试剂三厂生产，批号 060303； 小牛血清，杭州四季青生产 ，批号：071005；Gimesa染液，自制。 2 方法 2．1 小鼠急性毒性实验 参照《中药、天然药物急性毒性研 究技术指导原则》口]设计实验。选取健康、成年，禁食 8h后体 重 18~22g的小鼠 40只，雌雄各半，按性别和体重随机分为 2 组 ：空白对照组；海枫藤水煎液 160 g／kg剂量组，每组 20只， 雌雄分笼，1O只／笼。按最大给药量法进行试验，灌胃容量为 40 mL／kg，灌胃后约 1h给予饲料和水 。给药后每天观察小鼠 的一般反应(表观行为、动作、呼吸、毛色、姿势等)和死亡情 况 ，连续观察 14 d。 2．2 微核实验 参照《药物遗传毒性研究技术指导原则》设 计实验[ 。购回的小鼠先适应环境，观察 1～2 d，无异常后开 始实验。选取健康、成年，体重 22～26 g小鼠60只，全雄，按 体重随机将小鼠分为 6组，纯水对照、环磷酰胺阳性对照、海 枫藤水煎液 10．0、20．0、40．0 g、80．0 g生药／kg．bw 4个剂量 组。灌胃容量为 20 mI ／kg，连续灌胃给药 7 d，阳性对照环磷 酰胺按0．04 g／kg．bw腹腔注射给予。除环磷酰胺阳性对照 病变减轻的作用，与模型组比有明显差异，其作用机制可能不 完全相同。以往的研究主要从调节脂类代谢方面来分析解释 此类中药的降血脂及防治 AS的机理。然而从本实验的研究 结果看，通脑心脉灵除了有调节脂类代谢即使 TC、TG下降， HDI 一C升高的作用外，尚对抗脂质过氧化的作用，起到了防 治动脉粥样硬化发生、发展的作用。 参考文献： [1]吴开云，高摄渊，袁融，等．维生素 D诱发大鼠动脉粥样硬化的实 验研究_J]．解剖学报，1996，27(2)：133～135． [2]温进坤，韩 梅，杜玮南，等 ．一种快速建 大鼠动脉粥样硬化模型 的实验方法『J]．中国老年学杂志，2001，21(1)：50~52． E3]杨鹏远，芮耀诚 ．动脉粥样硬化大鼠实验模型的建立[J]．第二军 医大学学报，2003，24(7)：802~804． [4]杨军珂，郭延松 ．一种大鼠动脉粥样硬化斑块模型的建立[J]．中 国心血管杂志，2004，9(5)：353~356． [5]I erman A Burnett JC．Infect and altered endothelium in regulation of vasomotion[J]．circulation，1992，86(6)：12～19． (收稿 日期 ：2009—1O一1O)