铁蛋白(Ferritin)

铁蛋白(Ferritin) 批内:《 10% 批间:《15% 9. 计时器. 铁蛋白(Ferritin) 3 灵敏度:1.0 ng/ml. 化学发光免疫测定 的收集与准备 发光量和抗体活性曲线 图1目录号:CLIA-019 1. 取早晨空腹静脉血，取血的样本应避免添加剂及凝胶 4 特异性 用途: 用化学发光免疫测定(CLIA)法对人血清中的铁蛋白浓保存5天; 2. 离心除去红细胞，收集血清，在2-8:C可 交叉反应 度进行测定 发3. 在-20:C最长保存30天，避免反复冻溶。 肝铁蛋白 100% 光4. 当进行双份重复测试时，最少用0.100 ml的稀释样临床意义 量 脾铁蛋白 100% 本。 人心脏铁蛋白 <1.0% 检测循环血清中的铁蛋白水平是查看人体内铁离子储存量的较好试剂准备: 血色素 <0.1% 的方法。铁的储存量直接可通过放血定量测定，对铁离子吸收的 研究，肝的活组织检查和骨髓显微检查等方法确定。贫血和血色1. 洗液 沉着病均与体内缺乏和储藏过多铁量有关。此时常用总铁结合力 将浓缩洗液用去离子水稀释至1000 ml.在室温(20-上海长岛生物技术有限公司 Ferritin(IU/ml) (TIBC)测定作为辅助手段。然而血清铁蛋白是更简单敏感的方27:C)下可保存60天. 地址:上海市奉贤区庄行工业园区航南支路288号 例1 法。 邮编:201415 2. 工作底物溶液 标本号 孔号 每孔发光量平均发光量抗体活性电话:(021)57466000 8008205300 血液中铁蛋白的浓度很低，正常血浆铁离子含量大约1,。血浆将等量的溶液A和溶液B混合于另一容器中，60分钟内(RLU) (RLU) (IU/ml) 铁蛋白与体内储存处于平衡，但它会随铁离子储存量改变。在贫传真:(021)57468066 用完。例如，每2个八孔条准备1 ml溶液A和1 ml溶液标准品A1 406 413 0 血和铁缺失的最早期即有血浆铁蛋白浓度降低。这远早于血色素网址:www.chang-dao.com B，并混合(丢弃未使用完的溶液，不要使用看上去已经A B1 421 浓度、红血球大小和TIBC的变化。因此血清铁蛋白的检测可作E-mail:sales@chang-dao.com 变蓝的工作底物溶液)。 为铁离子缺乏的早期指标。同时大量的慢性条件会导致血清铁蛋 标准品C1 2744 2832 10 操作步骤 白水平的升高，包括慢性感染、慢性炎症如类风湿性关节炎、心B 在进行所有的测试前,把所有的试剂, 血清标准品置于室温(20-D1 2921 脏疾病和其它一些恶性肿瘤尤其是淋巴瘤，白血病，乳腺癌和成27:C). 神经细胞瘤等。有这些病症的患者总伴随铁离子缺乏，但血清铁标准品E1 12931 12664 50 蛋白水平会正常。在肝炎或毒性肝损伤的患者中可检测到循环铁C 1. 合理安排微孔板中标准品、病人样本及重复样本的布局.将所F1 12397 蛋白水平升高，是由于铁蛋白从损伤的肝细胞中释放出来。另有没有使用的微孔条放回铝箔袋中,封口后保存于2-8:C 外，也可在血色沉着病和含铁血黄素沉着症中发现血清铁蛋白的标准品G1 25944 26384 150 2. 各吸25 µl 标准品及样品到相应的孔中. D 增多。 H1 26824 3. 加入0.1 00 ml生物素化Ferritin抗体到每个孔中. 临床医生也用循环铁蛋白水平来作疾病的辅助诊断。它可用于缺标准品A2 53935 57086 400 4. 轻摇微孔板20-30秒,混合后盖上塑料盖. 铁性贫血和其它原因引起贫血的鉴别诊断。早在贫血前铁离子的E 5. 在室温下孵育30分钟. 储备已近枯竭。在妊娠和做血液透析的病人，可采用这个非侵袭B2 60238 性方法检测铁离子的储备情况。对献血者经常输血者以及铁离子6. 弃去微孔板中的溶液.在吸水纸上拍干孔中的水. 标准品C2 106907 108920 800 置换治疗者，也要定期监测血清铁。 F 7. 加300 µl洗液，然后倒出(吸或移出)，重复2遍，一共洗D2 110934 原理: 涤3次。如果用洗瓶清洗，应挤压瓶身，使洗液填满每一个病人样G2 30957 32255 202 孔，特别注意避免气泡。 CLIA测定Ferritin时，采用双抗体夹心法。先将Ferritin标准品，品1 稀释的病人样本分别放入微孔。再加入生物素化的单克隆抗体H2 33554 8. 加0.100 ml (100 µl) HRP酶标记Ferritin抗体到每个孔中. (铁蛋白特异)，形成抗原抗体免疫复合物。由于链亲和素与生9. 轻轻振荡微孔板20,30s使其混匀，盖上盖。 病人样A3 11415 12010 40 物素的高亲和性，生物素化的铁蛋白抗体和铁蛋白抗原复合物便品2 沉积在链亲和素包被的孔中。再加入另一标记酶的铁蛋白特异抗10. 室温下反应30分钟 B3 12605 体，此抗体结合到已固定于孔的铁蛋白上，通过酶的活性，作用11. 洗涤弃去孔内成分，并用吸水纸吸干水分。 *例1 及图1中的数据仅仅是示例,不可作为测量时标准曲线的参于底物而发出光量，由此测出发光值(RLU)。 考值. 12. 重复步骤7 利用已知Ferritin活性的标准品，可以画出酶及抗体活性的定量13. 向所有孔中加100 µl工作底物。请按照加反应物的顺序依注意事项 对应曲线。从该曲线中， 根据病人样本中测出的发光值，即可次加完所有孔以避免由于反应时间不同造成的孔间差。 1. 每个孔的反应时间对结果的重复性很重要;样品的吸取不找到对应的Ferritin活性值(ng/ml)。 14. 室温下避光反应5分钟 应超过10分钟,以防止测量失败;洗涤不完全可能导致重材料(附产品清单): 复性差或者是不真实的结果; 15. 在微孔板化学发光仪中读取RLU值, 结果可以在加入底物A. 铁蛋白(Ferritin)标准品 ，1ml/瓶 2. 如果使用超过1块微孔板,强烈要求分别重复测量标准曲工作液的30分钟内读取. 线;不可使用高血脂,溶血或者是严重污染的样本; 共6瓶，浓度分别为0 (A), 10 (B), 50 (C), 150 (D),400 (E) 3. 请使用同一个批号的产品,不可混用不同批号的试剂 和 800 (F) ng/ml。 结果计算 4. 如果使用计算机来分析检验结果，标准品的预期值浓度和B. 生物素化的单克隆鼠抗Ferritin抗体，13 ml/瓶 需要建立一个铁蛋白浓度的标准曲线来帮助计算未知样本的铁蛋给定浓度的误差不能超过10, 白浓度. C. Ferritin示踪试剂，13 ml/瓶 5. 如果病人的样本中铁蛋白浓度高于800 ng/ml 应该先用去铁正常血清稀释(如1:10)后再次测定.，然后将得到 D. 亲和素包被微孔板 -- 96 孔 1. 下从化学发光仪中读取的数据，如例1。 的测量值乘以稀释倍数来得到真实值 E. 浓缩洗液 ，20 ml 2. 计算所有重复样本的平均值，在相应的铁蛋白浓度线性图中6. 血清铁蛋白含有20-25%的铁:铁蛋白的浓度是反映正常F. 工作底物溶液 A(含鲁米诺)，7 ml/瓶 绘出标准品相对应点。 人及缺铁者中铁储备的一个好指标。铁蛋白浓度<10 G. 工作底物溶液 B(含过氧化氢) ，7 ml/瓶 ng/ml 暗示贫血，其水平超过250 ng/ml时表明有些肝病3. 按照绘出的点作一条相关线性曲线。 引起的血色沉着病。禁食、急性白血病、炎症性疾病、过4. 确定每个测得的RLU值所对应的标准曲线上的点,在该点所注意 1: 保存于2-8:C，不要使用已经过期的试剂. 量嗜酒以及其它一些肝相关炎症均会引起的血清铁蛋白水对应的横坐标来确定相应的未知样本的铁蛋白浓度。下例中2: 已经开封的试剂最多可以在2-8:C下保存60天. 平升高。 标准曲线交叉点处，RLU值为12010，铁蛋白浓度40 3: 以上的所有试剂仅供一块96孔微孔板使用. ng/ml(见图1)。 附加材料 [试剂盒中未提供]: 技术参数 1. 25 µl的移液器，误差小于1.5, 1正常参考值范围 2. 0.100 ml及0.300 ml移液器，误差小于1.5, 3. 洗板机或洗瓶. 男性 16-220 ng/ml 4. 微孔板化学发光仪. 女性 10-124 ng/ml 5. 用于稀释的试管 建议每个实验室根据实际情况建立正常和异常人群参考范围，6. 吸水纸. 参考值范围根据当地人口，实验室，技术和方法的特异性来建7. 孵育步骤中用到的孵育盒或合适塑料盖. 立。 8. 真空洗液器，用于冲洗微孔. 2 精确度