超数排卵处理沼泽型水牛血清E2和P4浓度变化研究

超数排卵处理沼泽型水牛血清E2和P4浓度变化研究 超数排卵处理沼泽型水牛血清E2和P4浓度 变化研究 强瑷?ReproductionandPhysiology2007年繁43粲17瀚 超数排卵处理沼泽型水牛血清E2和P4 浓度变化研究 蒋钦杨,韦英明,蒋和生,韦精卫,张诗新 (1.广西大学动物科学技术学院,广西南宁530004;2.广西金光乳业公司,广西南宁530041) 摘要:研究利用3种不同的方法超数排卵处理沼泽型水牛,比较研究不同方法处理时水牛血清雌二醇(E),孕酮 (P)浓度变化规律.结果明:进口Folltropin~-V,国产FSH和PMSG超数排卵处理沼泽型水牛,血清E浓度峰 值分别出现在氯前列烯醇(PGc)处理后的48h[(142.45?94.66)pg/mL],72h[(87.78?29.62)pg/mL],48h [(126.38?92.33)pg/mL];血液中P浓度最低值分别出现在PGc处理后的48h[(O.76?O.21)pg/mL],24hi(1.18? 0.12)pg/mL]和144hi(O.82?O.06)pg/mL]. 关键词:超数排卵;雌二醇;孕酮;水牛 中图分类号:$823.3文献标识码:A文章编 号:0258—7033(2007)17—0016—04 据FAO统计,2005年我国水牛存栏2274.5万头, 广西有419.7万头水牛,其中主要是沼泽型水牛,选育 程度相对较低?,体形矮小,生产性能低,多以役用为主, 经济价值相对较低.对沼泽型水牛的乳,肉用型方向品 种改良,提高本地水牛饲养的经济效益,是我区乃至全 国水牛养殖业发展的必由之路.在水牛同期发情和人工 授精方面已经开展了大量的研究工作旧.但水牛的繁殖 能力较差,发情表现不明显,配种受胎率较低,利用人工 授精技术进行品种改良速度较慢.超数排卵和胚胎移植 是牛品种改良较为有效的,经济的,快速的技术手段. 水牛的超数排卵技术在国外已经有大量的研 究[3-5】,但有关超排处理后水牛性激素水平变化规律 的研究报道较少.Ullah等_6J报道了FSH超数排卵处 理尼里一拉菲水牛的血清E和P4水平变化情况, Beg等_7.8J报道了超数排卵的摩拉水牛血清E,P4浓 度变化情况.而国内尚没有此方面的研究报道. 在本试验中,研究了3种不同方法超数排卵处理 本地(沼泽型)水牛后,血清中E和P4浓度变化的情 况,以求寻找超排水牛的血清性激素水平变化规律,以 便从理论上更好解释不同处理方法的效果差异,为筛 选最佳的水牛超数排卵方案提供理论依据. 1材料与方法 1.1试验水牛及药品选用15头无生殖系统缺陷, 收稿日期:2006—12—14;修回日期:2007—05—16 基金项目:广西科学自然基金(桂科自0640014) 作者简介:蒋钦杨(1981一),男,广西全州人,在读博士 通讯作者 嘲中耄敷象志 无繁殖方面疾病的成年沼泽型母水牛作为试验水牛, 分为3组,每组5头.Folhropin~-V,10mr,/瓶,加拿大; 国产FSH,10mg/瓶,中科院北京动物研究所;PMSG, 1000IU/支,吉林军需大学兽医研究所;CIDR(牛欢.), 氟孕酮250mg/个,浙江台州东牧动物药业有限公司; LHRH—A(促黄体素释放激素),25支,宁波市激素 制品有限公司;PGc(氯前列烯醇),0.2mCS~,宁波市激素制 品有限公司;HcG(人绒毛膜促陛腺激素),1000IU庋,宁 波市激素制品有限公司;EB(苯甲酸雌二醇),4mg/支, 南京动物激素厂. 1.2超数排卵在发情的第8-9天(发情当天为第0 天)开始超数排卵处理;组1在超排处理开始前1d肌 肉注射EB6mr,/头,Folhropin~-V15mr,/头,递减法连续 4d(3,3,2,2mg;1.5,1.5mg;1,1mg)肌肉注射;组2:国 产FSH25mr,/头,递减法连续5d(4,4mg;3,3mg;2.5, 2.5mg;2.2mg;1,1mg)肌肉注射.组1,2试验水牛在促 卵泡素处理的倒数第2天肌肉注射PGc0.8mr,/头,分 上,下午2次注射,并在最后1次注射促卵泡素的同时 注射LHRH—A3100头,24h后开始人工授精,输精 2,3次,间隔12h;组3:试验水牛在发情的第9天放置 CIDR,在0,4,6d(CIDR放置当天为0d)分别肌肉注 射EB4mr,/头,7d后取出CIDR并同时肌肉注射 PMSG3000IU/头,24h后肌肉注射PGc0.8mr,/头, PGc注射后的48h开始人工授精2,3次,间隔12h, 在第1次人工授精的同时肌肉注射HCG5000IU/头. 1.3血液采集组1:试验水牛在一1,0,1,2,3,4,5,6, 8和1Od(首次注射Folltropin~-V为0d),每天08:30颈 静脉采集血液10mU头;组2:试验水牛在一1,0,1,2, 2007笨簧43卷舞{7 3,4,5,6,7,9和11d(首次注射国产FSH为0d),每天 08:30颈静脉采集血液10mL/头;组3:试验水牛在5, 一 3,一1,0,1,2,3,4,5,7和9d(注射PMSG当天为0d),每 天08:30颈静脉采集血液10mI/头.血液收集置于放有冰 袋的泡沫盒内,1h内送回实验室离L,tl~血清. 1.4血清收集与保存采集的血液4?,3500r/min, 离心10min,收集血清分装到1.5mL离心管,放到_20? 冰箱保存. 1.5血清E和P4浓度测定使用美国进口的Abbod AXSYMTMSYSTEM~,1]设备和配套试剂盒,采用MEIA 法(microparticleenzymeimmunoassay,微粒子酶免分析 法)测定试验水牛血清样品中E和P4浓度. 2结果 2.1EB+Folhropin~-V超数排卵处理的沼泽型水牛E 和P4浓度变化情况由图1可知,在Folltropin~-V超 排处理开始的前1d肌肉注射了外源的苯甲酸雌二醇 (EB),血液中E的浓度达(506.01~213.87)pg/mL,随后 血液中E浓度迅速降低,第2天试验水牛血液中E浓 度为(127.15~86.75)pg/mL,肌肉注射PGc后,E水平逐 渐上升,48h后到达一个高点(142.45~94.66)pg/mL,随 后血液中E浓度逐渐降低. 血液中P4在Folhropin~-V处理的前3d都处在一 个较高的水平,第2天试验水牛血液中P4浓度为 (4.19~0.69)ng/mL,肌肉注射PGc处理后,血液P4水 平急剧降低,48h后降到最低点(0.76~0.21)ng/mL,随 后血液中P4浓度逐渐升高,第10天(胚胎回收当天)达 到(3.69~1.67)ng/mL. 5 4.5 4 3.5 3 25 2 1.5 1 O.5 O 10123456810 处理时问,d 图1Folltropin~V超排沼泽型水牛血清E:和P|浓度变化曲线 2.2国产FSH超数排卵处理沼泽型水牛的血清E和 P4浓度变化情况由图2可知,在国产FSH超数排卵 处理沼泽型水牛的第2天出现一个E浓度高峰 (71.37~15.46)pg/mL;PGc处理的当天试验水牛血液中 E2浓度为(53.83~32.04)pg/mL,PGc处理后血液中E2水 ReproductionandPhysiology?繁 平逐渐上升,72h后达到最高点(87.78~29.62)pg/mL;随 后血液中E浓度逐步降低. 在国产FSH超排处理开始的前1d,试验沼泽 型水牛血液中的P4浓度为(3.46?0.38)ng/mL,处理后P4 水平不断上升,第4天达到最高点(7.34~0.28)ng/mL; 肌肉注射PGc后,血液中P4浓度急剧降低,24h后降 为f1.18~0.12)ng/mL;随后血液中P4水平逐渐升高,(即 回收胚胎当天)回升到(8.13+4.45)ng/mL. 处理时间,d 图2国产FSH超排沼泽型水牛血滑E2和P|浓度变化曲线 2.3cIDR+EB+PMsG超数排卵处理沼泽型水牛的E 和P4浓度变化情况由图3可知,cIDR+EB+PMsG超 数排卵处理沼泽型水牛,血液中E浓度呈下降的趋 势,PGc处理后24h,血液中E浓度降低为(99.24土 80.04)pg/mL,48h又上升到(126.38~92.33)pg/mL,随后 E浓度缓慢降低. 试验水牛血液中P4浓度在PMSG处理后的24h 上升到最高点(15.58?3.70)ng/mL;肌肉注射PGc处理后, 血液中P浓度急厂F降,48h后降为(1.12__+0.01)n/CmL,144h 降为(0.82~0.06)ng/mL;第9天(胚胎回收当天)血液 中P4浓度稍微上升到(1.35~0.88)ng/mL. 14 ; 4 2 O PMSG … 一一 一 L ,一 处理时间,d 350 300 25O 20H0 150 100 5O O 图3PMSG超排沼泽型水牛血清E2和P|浓度变化曲线 3讨论 3.1组1,EB+Folltropin~-V(分4d)超数排卵处理沼 泽型水牛,血液中E的浓度呈下降趋势.使用外源雌 激素(EB)预处理试验水牛,可大量提高其血液中E浓 度,高达(506.01~213.87)pg/mL;EB处理结束后,血液 蠡教系恕囝 PE}}一 O 一.{一 OOOOO 18642O ,一 一 ,, PE}}, 一_l}兰一 鲫姗枷姗瑚0 鞭蒜瑗?ReproductionandPhysi@ogy 中E浓度快速下降,4d后降为(127.15~86.75)pg/mL; 肌肉注射氯前列烯醇(PGc),溶解水牛卵巢上的黄体, 解除体内较高浓度的孕激素对卵泡发育的抑制作用, 促使卵泡快速生长发育,从而提高血液中E的水平, 使处理水牛出现发情表现.PGc处理后,试验水牛血液 中E浓度逐步上升,48h后达到一个峰值(142.45-+ 94.66)pg,mL;排卵后,E浓度又缓慢降低.在PGc处理 前,组1试验沼泽型水牛体内P4处在一个较高的水平 (?3.54_--ff).35)ng/mL;PGc处理当天P4浓度为(4.19-+ 0.69)ng/mL;处理后卵巢上黄体溶解,试验水牛的血液 P4浓度急剧降低,24h降为(0.88~0.07)ng/mL,48h变为 (0.76~0.21)ng/mL;排卵后新黄体的形成,使得血液P4 浓度逐步上升,PGc处理后的第9天(处理当天为第 1天),P4水平回升到(3.69~1.67)ng/mL. 3.2组2,国产FSH分5d递减法超数排卵处理沼泽 型水牛,由于没有使用外源雌激素预处理,血液中E浓 度处在一个相对较低的水平(?71.37-+15.46)pg/mL, PGc处理当天E2浓度为(53.84-+32.04)pg/mL;PGc处 理后,卵巢上黄体溶解,试验水牛体内P4水平降低,抑 制解除,卵泡生长发育,E分泌量增加,血液中E浓度 提高.PGc处理后72h,试验水牛体内E浓度上升到 (87.78~29.62)pg/mL;此后,由于优势卵泡的排卵,E分 泌量减少,血液中E浓度又缓慢降低.在组2中,国产 FSH超数排卵处理沼泽型水牛,可促使其血液P4水平 不断上升,由处理前1d的(3.46-+0.38)ng/mL增加到 PGc处理当天(第3天)的(7.34-+0.28)n~mL;肌肉注射 PGc后,试验水牛体内P4浓度急剧减少,24h降到最 低点(1.18~0.12)ng/mL;随后,由于新黄体的形成,卵巢 孕酮分泌量增加,血液中P4浓度缓慢升高,胚胎回收 第11天上升到(8.13~4.45)ng/mL. 3.3组3,cIDR+EB+PMSG超数排卵处理沼泽型水 牛,虽然使用了外源雌激素,但试验水牛体内E浓度仍 是不断降低的,由前5d(287.08-+173.47)p~mL下降到第2 天的(99.24~80.04)pg/mL;PGc处理后的48h出现一个小 的高峰(126.38-+92.33)pg/mL;排卵后,血液中E水平有 缓慢较低.组3试验水牛放置了含有氟孕酮的阴道栓 (CIDR),PMSG处理前血液中P4水平一直较高(? 12.56-+1.84)ng/mL;撤出CIDR,肌肉注射PMSG可升高 血液中P4的浓度;PGc处理当天P4浓度为(15.58-+ 3.70)ng/mL,处理后试验水牛体内P4水平迅速降低,48h 降为(1.12_-4-0.01)ng/mL,并仍处于缓慢下降的趋势. 囝中鸯教袈志 2007年辩43卷麓17期 研究表明,Folltropin~-V,FSH超数排卵处理水牛 的效果好于PMSGI9,101.本试验研究中,Folhropin.V, FSH超排的水牛在PGc处理后血液E浓度随即开始 上升,而PMSG超排的水牛PGc处理后血液E:浓度时 先降后升,而且升高不明显,这PMSG处理水牛的 卵泡发育数量比Folhropin.一V,FSH少.此外,Foil— tropin.V,FSH超排的水牛PGc处理后血液P4浓度在 24,48h降到最低点,然后就逐步升高,这符合早期胚 胎发育的需要;而PMSG处理的水牛注射PGc后,血 液中P4浓度持续5,6d处于下降趋势,P4水平低,这不 利于早期胚胎的发育,影响了PMSG超排水牛后胚胎 的质量. 参考文献: [1]韦英明,蒋如明,凌泽继.不同同期发情方法对水牛发情和受胎 效果的影响[J】.中国畜牧杂志,2006,42(1):35—36. 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Keywords:superovulation;E2;P4;bufal0 中鸯教东是《》