脐带血全血与白膜造血细胞低温保存效果的对比研究

脐带血全血与白膜造血细胞低温保存效果的对比研究 脐带血全血与白膜造血细胞低温保存效果 的对比研究 第一军巨大学1994年第l4卷第l期 6.一脐带血全血与白膜造血细胞低温保存效果的对比研究 邢献志里旦 南方医院儿科}』, 提要用液氮作人脐带血垒血和白膜低温保存效果对比研究表明,垒血与白膜低温 保存效果基车相同,回收率四疆指标无显着差异.脐带血垒血 氍温保存可碱少遣血细胞的丢失和损伤,缩短操作过程,减少悖染机会.经被氮低 温保存的脐带血垒血可作为临床移檀或实验研究中造血细胞的来源. *键!!,塑堕;堡堡童 脐带血中含有丰富的造血细胞,低温保存的脐带血 可以作为一种造血细胞来源,供临床移植与实验研究 用.由于脐带血容量有限,为减少在分离过程中造血细 胞的丢失和损伤我们探讨了脐带血全血与离心有核细 胞层(白膜)低温保存效果的对比研究. 材料和 1.材料脐带血标本17份正常足月顺产的新生 儿脐带血.ACD抗凝,每份量约80,130ml.低温保护 剂采用联合保护剂.其组成成分为:12羟乙基淀粉 (HES)+10AB型血清+10二甲基亚砜(DMSO) +68RPMI1640液. 2.方法脐带血的收集与分离无菌条件下经脐 血管穿刺收集脐带血于含ACD(4:1)的血液保存袋中. 24h内将脐带血一分为二,一半不作任何处理,将全血 低温保存,另一半经2000r/min离心20min,吸出富含 白细胞的一层(白膜),白膜中含有少量红细胞不需处 理,直接置低温下保存.调整细胞浓度为10.0士3.1× 10/ml. 低温保存与复温将脐带血标本与联合保护剂按 1:1的比例边加边摇,充分混匀,于4"C冰箱或冰水中平 衡20min后,放入KRYO10Series(英国PLANER— BIOMED)程序降温仪中,用二步降温法,第一阶段+ 4?,一40"C,降温速度1?/rain,第二阶段一40?,一 80U,降温速度5~/min,程序结束后,取出样品放入液 氨中保存.保存时问平均为2.8士1.9个月.样品复温 时从液氮中取出后立即放入42"C水浴中摇动样品袋, 100s内复温完毕,速将复温的细胞悬液按逐步稀释 法…,用RPMI1640液洗去DMSO. 检测指标分别测定低温前后的有核细胞数 (Nc),单个核细胞数(MNC),台盼蓝拒染率(活力)及 粒一单造血祖细胞集落(CFu—GM)0产率.CFu—GM产 率计算按定量培养法【换算成CFu—GM的总数进行, (即低温后CFu—GM总数/低温前CFu—GM总数× 100). 统计方法:配对t检验. 结果 1.离心分离的白膜对脐带血NC的影响应用离 心分层法去除红细胞,分离和浓缩NC,结果导致NC不 同程度的丢失.9份脐带血离心前后平均NC分别为4. 52士2.24×10.和3.08士1.83×10.,其回收率平均为 68.1. 2.脐带血全血与白膜低温保存效果对比经液氮 低温保存脐带血白膜17例,保存时间1—5个月,CFu— GM的平均回收率为69.6左右.其中9倒按配对设 计同时作全血与白膜低温保存和复温,比较二者的低温 保存效果(见表). 表脐带血垒血与白膜低温保存效果比较 (回收率?S) 讨论 Broxmeyer等曾指出,脐带血造血细胞(CBHC) 与骨髓或外周血造血细胞物理性质不尽相同,用Ficoll 液分离cBHC的回收率仅有15.1,即使改变Ficoll液 的比重或用沉降法,溶血法,或直接离心法等也都不能 改善离心效果因此他们主张脐带血宜用全血作低温保 存.应用Percoll液或HES二次沉淀法可提高细胞 回收率至90—92,但同样不能避免丢失部分造血细胞. 实验中,我们曾用羧甲基淀粉沉降,Ficoll液分离法,盐酸 +氯化铵溶血法及直接离心法分离脐带血,均导致有核细 胞不同程度的损失.不同分离方法的回收率为5—78. 比较脐带血全血与白膜的低温保存效果,经配对t检验证 明,二者的回收率4项指标均无显着差异,说明脐带血全 血低温保存同样可以获得较高回收率,红细胞存在对造血 细胞低温保存无明显影响.由于单份脐带血容量有限,分 离过程中会导致造血细胞的丢失和损伤,全血低温保存效 第一军医大学1994年弟l4眷弟1期 果与传统的白膜保存无显着差异;文献报道及实践证明输 入低温保存含有红细胞的脐带血或骨髓对人体无明显不 良反应.因此,为减少CBHC的丢失,使有限的造血细胞 尽可能多地输入受者体内,增加植入的机会,我们认为,应 用全血低温保存为宜. (1993年4月24日收高) 参考文献 1SchaeferUW.Preservationofbonero~RtTOWfortran目口1日ntBtn.b DirkW.V…ed.Bonemarrowtransplantation…NYorkl1985I324 2.唐佩民,橱天楹.造血细胞培养技术.西安:陕西科学技术出版社 1985F93 3.雷从民,李川晟,孟沛霖.骨髓造血细胞挣冻存话率评价方法的研究. 中华血藏学杂志1990F11(1Z)-636 4.BroxmeyerHE,DouglasGW,HangocG.?1,Humanumbicica[ cordblood抽apotentials仰eoftransplantablehematopoieticstem/ progenitorcells.Proc.NatlAcidSciUSA1989F86l3828 5.Charburr.PNewt伽I,SchaIJP.et?【_TheSepa~tloDfhumanc0rd bloodbydensitygradlentdoesn0tinduceama{0rlossofprogenitor cells.BoneMKrTowTra~plant.1992I9(Suppl1)l109. 6.张洪泉,博曾矩.沈柏均,荨.脐带血中造血细抱的分离与保存.中华血 蘸学杂志1992,13f4){180 注射硬化剂治疗巨大血清肿5例报告 通过量腔内注射硬化荆(5鱼肝油畦钠)治=簦巨大血清肿5例t现报道如下. 男3侧,女2侧.年龄25—48岁.血清砷成的原因}病灶切砖3例,创伤引起2侧.部位t大琏部2侧,臀部l侧,背部l侧,面部 l侧血清砷的大小10×5cm至35×20cm.硬化剩注射量4~12m1.注射2,5次,平均3.5次壶意,束发现皮肤坏死等副作用. 治疗毒法舟绍;无菌操作.于量腔最低赴穿刺抽出奎部积液,然后从原穿刺钟内,根据量腔大小注入5鱼肝油畦钠2—4m1,然后 局部加压包扎.每周l,2次,一般2,4次即可=簦合.束后注意观察局部和奎身反应,局部轻度肿旃反奎身可能伴有低热反应多在l一 2天内消退,可不作特殊处理. 5鱼肝油畦钠常用于血管瘤的硬化治疗,通过对血管内皮的肚坏,促使蛄蚌组织增生,血管闭塞.血清肿除有量腔外,量腔壁表 面纤堆化或向芽组织老化,从而使渗液增多,吸收不良,量壁不能相王拈连融合,通过量腔内注凡5鱼肝油畦钠可以使量腔表面组织 出现轻度支症反应,刺激肉芽生长反蛄蚌组织增生,在抽出积液,加压包扎的条件 下,量壁柑王拈连融合,从而闭塞. 治疗过程中需注意以下问1.注意无菌操作,必要时可适当使用抗生素预防感染.2.硬化剂必颁注入量腔内,避免注入皮内或 神经莘重要组织内,造成组织坏死.3.注凡硬化荆后一定要适当加压包扎,使量壁紧贴,便于其柑王粘连意合. (熊明根,司徒朴.珠江医院整形外科FI992年lo月22日收稿) 免疫组化染色中DAB显色剂配制的改良方法 在免疫组化染色中,显色荆在复合抽显示方面起着重要的作用.国内外对DAB的配制都强调用PBS或TBS,燕而用这些竣冲液 配制DAB时,难以溶解,需要过滤,造成实际上的不精确}再者DAB是一种致癌性轴质,每次都需要称取,增加接触次敷t造成极大麻 烦.我们对DAB原配制方法进行了改良,收到竹的效果,现枉告如下. 应用常规ABc法和负压ABc法进行免疫组化染色. DAB的配制方法{称取50mg的DAB,放凡50ml的小烧杯里,滴入敷滴蒌馆书,调成浆糊状t再慢慢地加凡蒸t胄水,迎加边搅拌, 总量为10ml.DAB完奎溶眸,不需过滤,用朝奋好的小塑料离心蕾(15m1)分装,每支100,150#1,然后速放于一30?低温冰箱中保 存,此试荆可保存l丰左右.每次使用时取出1支,用PBS稀释为l,15ml,再加入03H:O:5~10#1,即可使用,每张切片平均50#1 则可. 短改良法配制的DAB所显色的切片,与常规方法无明显差异. f蔡倥杰病理学教研室,1993年2月2目收稿)