非福尔马林醇性固定液在组织标本固定中的应用

非福尔马林醇性固定液在组织标本固定中的应用 非福尔马林醇性固定液在组织标本固定中 的应用 JournalofQiqiharMedicalCollege,2008,Vo1.29,N.12 非福尔马林醇性固定液在组织标本固定中的应用 沈海燕谢敏浩赵菁戴军 中性福尔马林是常规病理制片中最常用的组织固定液, 因其具有较强刺激性,毒性,腐蚀性且易挥发,危害着病理工 作者的人体健康,并造成环境污染,这是长期困扰病理工作者 的一大难题?.本文采用的新型固定液,完全不含福尔马林, 是一种商品化的醇性复方固定液.我们就新型非福尔马林醇 性固定液应用于临床病理以来,对组织固定和抗原保存进行 了多方面的研究,结果明,效果甚佳,现将实验结果做一总 结. 1与 1.1材料我院2005,2007年的4825例手术标本;新型组 织固定液(意大利Milestone公司产品,应用液配制:原液与 95酒精按25:75稀释);免疫组织化学染色的抗体及配套 试剂(福州迈新生物技术开发有限公司);全自动组织脱水机. 1.2方法新鲜组织直接固定于稀释好的固定液中(固定液 的量约是标本的5倍以上),大块组织预先切开固定,放置24 小时后取材,全自动组织脱水机中进行脱水,透明,浸蜡,处理 过程如下: (1)新型组织固定液2小时(新鲜标本4小时) (2)95乙醇1小时 (3)无水乙醇1小时 (4)无水乙醇1小时 (5)无水乙醇1小时3O分 (6)二甲苯2()分 (7)二甲苯20分 (8)二甲苯20分 (9)石蜡1小时2O分 (10)石蜡1小时20分 (11)石蜡1小时2O分 次日上午8:00进行包埋,切片,经HE染色后镜检.在 4825例送检标本中,我们对其中的420例进行了免疫组织化 学染色,方法步骤如下:1)石蜡切片脱蜡和水化后,每张切片 作者单位:江苏省原子医学研究所附属医院病理科(无锡) 邮编214063收稿日期2008—03—03 加5Oul3过氧化氢,室温下孵育1O分钟,用PBS(PH7.4) 冲洗三次,每次3分钟;2)每张切片加5Ol的第一抗体,室温 下孵育6O分钟,3)PBS冲洗三次,每次3分钟,每张切片加 5Ol即用型试剂,室温下孵育1O分钟,PBS冲洗三次,每次3 分钟;4)除去PBS液,每张切片加5O"l新鲜配制的DAB溶 液,镜下观察3,5分钟;5)自来水冲洗,苏木素复染,自来水 冲洗返蓝,经过梯度酒精脱水干燥,二甲苯透明,中性树胶封 固,送镜检观察. 2结果 2.1新型组织固定液固定的标本与用中性福尔马林固定的 标本相比,更接近新鲜组织标本的自然状态,固定后色泽变化 轻微,也不出现福尔马林固定后的明显硬化现象,为显着特 点.但因标本较软,取材时刀具需锋利,如初次使用不太适 应,可以在该固定液中加入2浓度的冰醋酸,适当提高标本 固定后的硬度,并能够缩短标本固定时间. 2.2新型组织固定液固定的标本与用中性福尔马林固定的 标本制片相比,组织切片染色鲜艳,细胞结构清晰,同时因为 标本收缩率较小,组织细胞间裂隙等人工现象比福尔马林固 定的标本大为减少.由于长期以来习惯中性福尔马林固定, 使用初期可能需要有个适应过程. 2.3对中性福尔马林固定的标本需要抗原预修复程序才能 使用的抗体,而直接用新型组织固定液固定的标本.无需抗原 预修复程序,免疫组化结果背景清晰.阳性,阴性细胞对比明 显见图1,图2. 圈1HE 3讨论与体会 一戆'3.1甲醛溶液易挥发,具有高刺激性,毒性和腐蚀性国内 胶囊内容物6份,每份约12.5mg,加对照品贮备液2ml,各加 内标溶液稀释置刻度,摇匀.按上述2.1项色谱条件定含量, 计算回收率,平均回收率为99.8,RSD=1.22. 2.4样品含量测定取供试品溶液和对照品溶液各3"l,注 入气相色谱仪,按照上述色谱条件进行测定,内标法计算样品 含量,结果供试品中角鲨烯平均含量99.8.通过检测供试 品装量,计算出每粒供试品中角鲨烯平均含量为0.1404g. 3讨论 3.1本实验采用气相色谱内标法对角鲨烯含量进行测定,并 进行了方法学考察.实验结果表明本方法分离度高,方法可 行,结果准确,可有效地控制角鲨烯软胶囊的质量. 3.2本实验方法也为含角鲨烯成分的药品及保健品质量标 准建立提供参考. ?参考文献 [I]顾觉奋,牛佳.角鲨烯合成酶抑制剂降血脂作用及机制的研究进 展EJ].药学进展,2007.37(1):15—2O [2]许瑞波,刘玮炜.角鲨烯的制备及应用进展__J].山东医药,2005, 45(35):69—70 齐齐哈尔医学院2008年第29卷第12期 外医学研究表明,人体皮肤直接接触甲醛时,会引发过敏反 应,皮肤炎症或湿疹,长期吸人有害气体可引起慢性呼吸道疾 病和肿瘤的发生…,2004年6月15日世界卫生组织正式宣 布甲醛为致癌物质.意大利Milestone公司生产的新型组织 固定液,产品已通过欧洲2001年/59/CE无毒产品论证 管理条例,是一种不含福尔马林,无毒,无味,无色的新型组织 固定液. 3.2组织标本固定效果甚佳在组织切片过程中(厚度一般 在3,5ffm),未发现组织标本有变脆,变硬现象.我们对制 片难度较大的标本,如子宫,乳腺,皮肤等也进行了观察对比, 结果经新型固定液固定的组织,做出的片子较为完好,其观察 效果较中性福尔马林固定的标本更为清晰(图1),有助于临 床病理诊断,也为病理科脱离甲醛污染,保护医务人员的健康 提供了一条新的途径. 3.3对抗原的保存较好用中性福尔马林固定的标本做免 疫组化染色时,有些抗原需进行修复处理,处理过程中如掌握 不当会导致过染及假阳性的出现_2],我们经反复多次实验 证实,使用新型固定液固定的标本无需进行组织抗原的修复 处理,且染色结果背景清晰(图2),结果明确,有助于提高诊 断率,防止医疗差错的发生;并缩短了免疫组化操作时间,且 避免了因微波或高温高压修复处理过程中易出现的脱片现 象. 综上所述,应用已通过欧洲2001年/59/CE无毒产品标 准论证管理条例的无毒,无味,无色不含福尔马林的新型组织 固定液,解决了长期以来甲醛的刺激性,毒性和腐蚀性危害病 理工作者人体健康的难题,减少了甲醛对环境的污染,净化了 医院环境;研究结果表明,新型组织固定液固定的标本与用中 性福尔马林固定的标本相比,HE染色组织形态无明显差异, 而且对提高免疫组化染色质量具有现实意义.众所周知,不 同固定液的固定结果都略有差异,换用固定液可能要有一个 适应过程,但是从保护环境和改善医务人员工作环境的角度 考虑,改用新型组织固定液是大势所趋. 参考文献 [1]张瑾.甲醛毒性的研究进展[J].职业与健康,2006,22(23): 2O41—2044 [2]周小鸽,王鹏,陆鸣,等.加热抗原修复对内源性生物素蛋白结合 物的影响及其对策EJ].中华病理学杂志,2002.31(6):491—496 [3]骆新兰,蔡秀玲,刘艳辉.不同的抗原修复条件对免疫组织化学 染色结果的影响EJ].中华病理学杂志,2005,34(1):52—54 卵巢妊娠1例报告 周秀宇 1病例资料 患者,孙某,26岁,已婚,GP因月经期伴严重的腹痛和腰 痛于2007年12月31日人院.患者既往身体分健康,月经 规律,本次月经周期和月经量均正常但伴有腹痛和腰痛,两天 前腹痛突然加重. 人院查体:T37.6度,P106次/分,R20次/分,Bp:lOO/ 60mmHg无贫血外观,神志清楚,查体合作,腹软肝脾未触 及,右下腹压痛(++)反跳痛(+)妇科检查:外阴经产式阴道 有血液流,宫颈1度糜烂,有抬举痛,子宫前位常大,右附件区 压痛(++)未触及包块,左侧附件区正常,后穹窿饱满,穿刺 抽出不凝血. 辅助检查:B超报告:右附件区有一1.3cm无回声光团, 节育环下移,盆腔后方见3.3cm×2.6cm不规则无回声暗 区.尿HCG(+)血常规:HB135g/[,RBC4.3×1o/[,WBC 1.17×10/[. 人院诊断:右侧输卵管妊娠破裂. 人院后在连续硬膜外麻醉下行剖腹探查术,术中见盆腔 作者单位:黑龙江省拜泉县拜泉卫生院 邮编161700收稿日期2008—04—3O ? 短篇报道? 有血性液体,探查见左附件正常,右侧输卵管正常,伞端无活 动性出血,右侧卵巢略增大,表面呈淡红色,边缘有一直径约 一 厘米的破口,有活动性出血,未见完整孕囊,行卵巢部分切 .病理诊断:出血,坏死并见少许滋养细 除术保留1/3皮质 胞. 术后诊断:右卵巢妊娠. 2讨论 卵巢妊娠是一种比较罕见的异位妊娠,占异位妊娠的 0.36,2.76其误诊率极高,仅仅依据急性腹痛盆腔包块, 早孕征象及阴道流血等卵巢妊娠的临床表现诊断卵巢妊娠几 乎不可能,这因为卵巢妊娠破裂时间早于输卵管妊娠且停经 史不明显,但与输卵管妊娠相比无明显的特异性,只有术后仔 细的病理检查才难诊断卵巢妊娠. 近年来卵巢妊娠发病率呈上升趋势,目前普遍认为卵巢 妊娠发病原因可能于育龄妇女广泛使用宫内节育器有关,本 例患者也是使用了宫内节育器. 参考文献 [1]沙玉成,丛林.卵巢妊娠的诊断进展[J].中国实用妇科与产科杂 志.2006,16(4):207