猫爪草中有机酸成分的提取与分析

猫爪草中有机酸成分的提取与分析 猫爪草中有机酸成分的提取与分析 作者: 池玉梅 吴晓 张爱华 于生【摘要】 目的 分析 不同提取法提取的猫爪草有机酸部位的成分。 方法 采用离子交换法提取分离水提液和醇提液中的有机酸，以10%硫酸甲醇溶液为甲酯化试剂进行甲酯化，用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术分析。结果 均检出有46个色谱峰;分别识别了其中31个有机酸(占总峰面积98%以上)。结论 有机酸成分分布有差异，水提液中多元酸居多，醇提液中以一元酸为主，首次检出含有辛二酸、壬二酸、癸二酸、柠檬酸等多种多元酸。 【关键词】 猫爪草 离子交换法 气相色谱-质谱联用;有机酸 Analyzing organic acids in the Radix Ranunculi Ternati 【Abstract】 Objective To analyze the ponents of organic acids in the Radix Ranunculi Ternati from different methods. Methods With using 10%H2SO4-CH3OH as methyl esterification solvent, the analysis for organic acids were carried by using GC-MS . Results 46 ponents were determined. And 31 pounds, which were above 98% of the total peak areas were identified. Conclusion The re are a lot of organic acids , eg octanedioic acid, nonanedioic acid, decanedioic acid and citricacid et. 【Key words】 Radix Ranunculi Ternati; ion-exchanging; GC-MS; organic acid 中药材猫爪草(Radix Ranunculi Ternati.)为毛茛科植物小毛茛(Ranunculus ternatus Thunb.)的块根，主产于长江中下游地区。性甘、辛，微温，具有清热解毒、消肿散结的功效,1，2,;本课题组在 研究 中发现，猫爪草水提液和醇提液的pH值均在3.5左右，采用不同的方法提取分离了有机酸部位，并进行了药效试验，试验结果提示猫爪草的有机酸部位为其抗结核和抗肿瘤的有效部位，本文采用甲酯化有机酸部位，气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术分析，结合NIST2017标准谱库，分别分析水提液和醇提液采用离子交换法提取分离的有机酸，以其为研究中药材猫爪草中有机酸成分与药效的相关性，为猫爪草资源的开发和质量评价提供研究基础。 1 仪器与试剂 1.1 仪器 美国Agilent GC -MS 5975B 型气相色谱,质谱联用仪(配有NIST2017标准谱库)。 1.2 试药 药材购于南京药材公司，产地河南信阳。甲醇(色谱纯)，95%乙醇(医用)，浓硫酸、氯仿、乙醚、无水硫酸钠、氯化钠、氢氧化钠、盐酸均为分析纯。D301弱碱型阴离子交换树脂(预处理: 阴离子交换树脂浸泡于水中，漂去异物，反复数次，待浸泡充分后装柱，以4,5倍柱体积的0.5mol/L NaOH溶液交换，蒸馏水洗涤至中性，以4,5倍体积的0.5mol/L HCl溶液交换，蒸馏水洗涤至中性，备用)。 1.3 甲酯化试剂 在冰水浴中，将10ml 浓H2SO4 缓慢倒入90ml CH3OH 中，搅匀，待冷，即得‎‎。 2 方法与结果 2.1 有机酸部位提取 药材分别以水和70%乙醇提取，提取液分别经处理好的弱碱型阴离子交换树脂吸附后，氨水洗脱，浓缩后用酸性乙醇溶出，去乙醇即得。提取流程见1。 2.2 有机酸部位甲酯化 取O 1、O2 各0.1g，置10ml具塞试管中，加10,硫酸甲醇溶液2ml，摇匀，36?条件下放置24h后，加1ml饱和NaCl，5ml乙醚-氯仿(2: 1)，混旋5min，离心，取上清液，加适量无水硫酸钠，干燥，即得。 2.3 有机酸部位试样空白 取O 1、O2各0.1g，置10ml具塞试管中，加2ml甲醇，摇匀，36?条件下放置24h后，加1ml饱和NaCl溶液，5ml乙醚-氯仿(2: 1)，混旋5min，离心，取上清液，加适量无水硫酸钠，干燥，即得。 图1 有机酸部位提取流程图2.4 GC-MS分析条件。2.4.1 色谱条件 DB-5 MS 毛细柱(30.0m ×250μm × 0.25μm);氦气(99.999,) 为载气，流速 1.5ml/min;柱前压2.48PSI;进样口温度220?;分流进样(分流比10:1);程序升温: 初始温度50? 5?/min150?10?/min220?，维持5min。 2.4.2 质谱条件 电离方式; 电子 能量70eV;离子源温度230?;四级杆温度150?;电子倍增管电压1200V;溶剂延迟5min。 2.5 GC-MS 分析 结果 取“2.2”和“2.3”项下的各溶液0.6μl分别按“2.4”项下的条件进 行GC-MS分析，结果显示O 1、O2的试样空白中均未检测到色谱峰，有机酸部位样品O 1、O2的总离子流色谱见图 2、图3，均检出有46个色谱峰，经NIST2017标准谱库检索，分别识别了 31个有机酸，约占总峰面积的98.92%和98.35%，其中16个为二元酸，2个为三元酸，结果见表1。 图2 O1的总离子流色谱图 图3 O2的总离子流色谱图表1 有机酸检索结果注: No 12、 19、 20、2 3、2 4、2 5、35没有检索出来 3 讨论 有报道GC-MS分析超临界流体CO2萃取技术提取猫爪草脂肪酸成分,3,和石油醚(60?,90?)、乙醚回流提取脂肪酸及有机酸成分,4,，但仅检测出一些饱和和不饱和脂肪酸。本论文采用离子交换法分别提取猫爪草醇提液和水提液中有机酸成分，结果显示，不同提取 方法 所得有机酸成分的分布有一定差异，其中醇提液中以一元饱和和不饱和脂肪酸为主，以面积归一化法占87.4%，而水提液中则以多元酸居多，占92.5%，并首次检出猫爪草中含有辛二酸、壬二酸、癸二酸、柠檬酸等多种多元酸。【 参考 文献 】 1 Chinese Phamacopoa-one(中华人民共和国药典.一部).Beijing: Chemical Industry Publishers(北京: 化学 工业 出版社)，2017，223 . 2 Chinese Herbs-3(中华本草-3).Shang hai.Shanghai Science and Technology Publishers(上海: 上海 科学 技术出版社)，1999，544. 3 王爱武，袁久荣，李磊，等(猫爪草脂肪酸成分的超临界流体萃取及GC-MS分析(中药材，2017，29 (5): 485. 4 陈军，姚成，夏黎明,等(猫爪草中的脂肪酸及有机酸的GC-MS分析(光谱学与光谱分析，2017，26(8): 1550.