临床常用免疫学检查

null 临床常用免疫学检查 临床常用免疫学检查 临床常用免疫学检查包括临床常用免疫学检查包括一、血清免疫球蛋白检测 二、血清补体检测 三、细胞免疫检测 四、肿瘤标志物检测 五、自身抗体检测 六、感染免疫检测教学目的与要求：教学目的与要求： 了解掌握临床免疫学检查的主要、检测原理以及临床实际应用的重要意义重点与难点重点与难点各种抗体的特点 补体定义及CH50测定 流式细胞术的原理及淋巴细胞亚群测定的临床意义 肿瘤标志物及其特异性，AFP与CEA的特点，各种类型的特异性 自身抗体与自身免疫的关系及各类型自身抗体检测的及临床意义 Crp测定以及临床意义 临床常用免疫学检查包括临床常用免疫学检查包括一、血清免疫球蛋白检测 二、血清补体检测 三、细胞免疫检测 四、肿瘤标志物检测 五、自身抗体检测 六、感染免疫检测免疫球蛋白（Ig）免疫球蛋白（Ig）定义：是由浆细胞合成分泌的一组具有抗体活性的球蛋白，存在于机体的血液、体液、外分泌液和部分细胞的膜上。 检测：感染性疾病、免疫增值性疾病和免疫缺陷性疾病的诊断、鉴别诊断、疾病进展和预后。血清免疫球蛋白分类血清免疫球蛋白分类根据重链稳定区的分子结构和抗原特异性的不同，分为五类：IgG、IgA、IgM、IgD、IgEnull血清免疫球蛋白分类检测方法检测方法酶联免疫法（ELISA) 放射免疫（RIA) 荧光标记免疫(IFA) 化学发光法（CLIA) 免疫透射比浊、免疫散射比浊血清免疫球蛋白G检测血清免疫球蛋白G检测IgG人体内含量最多，占Ig的70％-80％ 再次免疫应答的主要抗体 对细菌、病毒和寄生虫都有抗体活性 唯一可通过胎盘的Ig 参考值参考值7.0—16.6 g/L临床意义--IgG 增高 临床意义--IgG 增高 多克隆性增高 见于各种慢性感染、慢性肝病、淋巴瘤、肺结核、链球菌感染以及自身免疫性疾病 单克隆性增高 仅见一种Ig增高，主要见于免疫增殖性疾病，如IgG分泌型多发性骨髓瘤临床意义--IgG 降低临床意义--IgG 降低见于各种先天性和获得性免疫缺陷病、联合免疫缺陷病、也见于重链病、轻链病、肾病综合症、病毒感染和免疫抑制剂患者免疫球蛋白A检测免疫球蛋白A检测两型：血清型IgA，分泌型IgA（SIgA）。 参考值参考值血清IgA 0.7～3.5 g/L， IgA占10％-15％。 SIgA 唾液0.3 g/L，泪液30~80 g/L，初乳5.06 g/L，粪便1.3 g/L临床意义临床意义IgA增高 见于IgA型MM，SLE,类风湿性关节炎，肝硬化，湿疹和肾脏疾病等 IgA降低 见于反复呼吸道感染，非IgA型MM，重链病，轻链病，原发和继发性免疫缺陷病和自身免疫性疾病免疫球蛋白M检测免疫球蛋白M检测IgM是五聚体，分子量最大的Ig 不能通过血管壁，不能通过胎盘 个体发育过程中最早合成的抗体，脐带血IgM增高提示胎儿宫内感染 体液免疫应答中IgM是最早产生的抗体 null参考值参考值参考值 0.5 ～2.6 g/L临床意义临床意义IgM增高 见于初期病毒性肝炎、肝硬化、类风湿关节炎、SLE等，原发性巨球蛋白血症时， IgM呈单克隆性明显增高 IgM降低 见于IgG型重链病， IgA型MM，先天性免疫缺陷病，使用免疫抑制剂，淋巴系统肿瘤和肾病综合症。免疫球蛋白E的检测免疫球蛋白E的检测IgE是血清中最少的一种Ig，占血清总Ig的0.002%。 是一种亲细胞抗体，介导Ⅰ型变态反应，与变态反应、寄生虫感染和皮肤过敏等有关。参考值参考值ELISA法为0.1 ～0.9m g/L临床意义临床意义IgE增高 见于IgE型MM、重链病、肝脏病、结节病、类风湿性关节炎，以及各种过敏性疾病和寄生虫感染等。 IgE降低 见于先天性和获得性丙种球蛋白缺乏症、恶性肿瘤、长期应用免疫抑制剂和共济失调性毛细血管扩展症等。血清M蛋白血清M蛋白M蛋白(M protein)或称单克隆免疫球蛋白，是一种单克隆B细胞增殖产生的具有相同结构和电泳迁移率的免疫球蛋白分子及其分子片段。 null【参考值】蛋白电泳法、免疫比浊法或免疫电泳法：正常人为阴性。 图1－4号为多发性骨髓瘤病人的血清蛋白电泳图谱null【临床意义】检测到M蛋白，提示单克隆免疫球蛋白增殖病。见于： ①多发性骨髓瘤：以IgG型最常见，其次为IgA型，IgD和IgE罕见，也有IgM型的报道。null 多发性骨髓瘤（multiple myeloma）是浆细胞异常增生的恶性肿瘤，也称浆细胞瘤（plasnocytoma），因其引起骨破坏而得名。患者常伴有贫血、肾功损害和免疫功能障碍。男性多发，男女比约为2:1，平均发病年龄是46.5岁。 null　多发性骨髓瘤患者骨破坏所致头颅肿物及眼球突出null②巨球蛋白血症(macroglobulinemia)：该病血液中存在大量单克隆IgM。 ③重链病：出现Ig重链 ④轻链病：出现单克隆游离轻链。 ⑤半分子病：系由一条重链和一条轻链组成的单克隆Ig片段。 ⑥恶性淋巴瘤：血液中可出现M蛋白。 ⑦良性M蛋白血症： 临床常用免疫学检查包括临床常用免疫学检查包括一、血清免疫球蛋白检测 二、血清补体检测 三、细胞免疫检测 四、肿瘤标志物检测 五、自身抗体检测 六、感染免疫检测补体（Complement）补体（Complement）补体是一组具有酶源活性的糖蛋白，由传统途径的九种成分C1(C1q/C1r/C1s）-C9，旁路途径的三种成分及其衍生物B/D/P/H/I等因子组成 参与机体的抗感染和免疫调节,介导病理反应补体的三条激活途径补体的三条激活途径总补体溶血活性检测(CH50)总补体溶血活性检测(CH50)原理:抗体致敏的绵羊红细胞(抗原抗体复合物)可激活血清中的补体C1,从而引起补体经典途径的连锁反应,导致绵羊红细胞膜上形成多分子的聚合物，绵羊红细胞溶解。在分光光度计上542nm读取吸光度。溶解程度与样品中补体量正相关。 主要反应补体经典途径的综合水平。null++C一、溶细胞作用：靶细胞抗 体抗原抗体 复合物C1--C9靶细胞溶 解null C4细胞膜识 别 阶 段C3转化酶的形成C3转化酶的形成C4bMg++C4a C2活 化 阶 段C5转化酶的形成C5转化酶的形成C4bMg++C4a C2a C3 C4b2b3b 是C5 转化酶; 它导致膜攻击复合体(MAC)的形成活 化 阶 段nullC5nullC6膜攻击阶段MAC形成并插入到细胞内MAC形成并插入到细胞内C 9C 9C 9C 9C 9C 9C 9C 9C 9CH50CH50在50%溶血附近，“S”形曲线最陡，接近一条直线。在此范围内补体活性稍有变动，溶血程度就有明显变化，即是以50%溶血作为反应的终点比以100%溶血作为终点更为敏感，因而该试验被称为补体50%溶血试验（complement hemolysis 50%） ，即CH50试验。CH50测定的临床意义CH50测定的临床意义增高：见于急性炎症，组织损伤和某些恶性肿瘤。 减低：免疫复合物性疾病（如肾小球肾炎）、自身免疫性疾病活动期、感染性心内膜炎、病毒性肝炎、慢性肝病、肝硬化、重症营养不良和遗传性补体成分缺乏症等补体C3检测补体C3检测是一种由肝脏合成的β2-球蛋白。C3在补体系统各成分中含量最多，是经典途径和旁路途径的关键物质。它也是一种急性时相反应蛋白。 【参考值】 成人血清C3：O．8～1．5g／L。 null【临床意义】     (1)增高：常见于一些急性时相反应，如急性炎症、传染病早期、肿瘤、排异反应、急性组织损伤。     (2)减低：见于系统性红斑狼疮和类风湿性关节炎活动期、大多数肾小球肾炎(如链球菌感染后肾小球炎、狼疮性肾炎、基底膜增殖性肾小球肾炎)、慢性活动性肝炎、慢性肝病、肝硬化、肝坏死、先天性补体缺乏(如遗传性C3缺乏症)等。它们或是由于消耗或丢失过多或是由于合成能力降低造成。 临床常用免疫学检查包括临床常用免疫学检查包括一、血清免疫球蛋白检测 二、血清补体检测 三、细胞免疫检测 四、肿瘤标志物检测 五、自身抗体检测 六、感染免疫检测淋巴细胞淋巴细胞T、B、NK细胞 基于特异的面标志和功能，进一步分为若干亚群null检测方法 流式细胞仪术 流式细胞术(flow cytometry，FCM)是一种集细胞生物化学技术、单克隆抗体技术、激光技术、流体力学、电子技术、计算机技术、分子生物学、临床医学等理论于一体的现代分析技术；能够对细胞或微球的物理、生理、生化、免疫、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测，并在必要时进行分类收集的多参数检测细胞分析技术。 （p472）nullBD FACS Calibur 第十章第二节 流式细胞术及其应用一、流式细胞仪仪器结构一、流式细胞仪仪器结构液流系统 光学系统 激光光源 光收集系统 电子系统 光电转换 数据处理系统 细胞分选系统null样品流荧光信号激光束Sheath fluid样品流和鞘流1、液流系统null液流中心由单列匀速运动细胞组成的液柱null流动室Laser Flow Cell孔径50-200m 检测区离喷口200m 有分选功能 null激光光源激光光源单波长、高强度、高稳定性 多采用氩离子激光器或氦氖激光器 一般选配2-4根激光，488nm 、633nm和355nm、407nmUV激光 2、光学系统 nullPMTPMTPMTPMTDichroicFiltersBandpassFiltersLaser 1234Flow cell 激光、透镜组、光电倍增管等。null3、电子系统null（一）分选的基本原理4、细胞分选系统细胞分选系统细胞分选系统null二、基本工作原理nullnull前向散色光FSC三、散射光的测定null侧向散色光SSC信号检测--散色光信号检测--散色光FSC（小角散射)光它反应细胞的相对大小和截面积的大小 SSC (90度角散射光)代表细胞的颗粒度和精细结构的变化 荧光FL: 细胞被染上荧光部分数量的多少 全血细胞流式FSC-SSC图 利用前向角和 测向角散射光可 以把外周血白细 胞分成三群，淋 巴细胞、单核 细胞和粒细胞。null便于数据统计 不同的细胞群可以用不同的颜色标记 主要表达方式四、数据的显示和分析null 样品 培养细胞 新鲜组织 石蜡包埋单细胞 悬液 标记 荧光抗体检测表型测定细胞分选五、流式细胞术操作统计学 分析继续 培养null一、淋巴细胞及其亚群的分析 五、流式细胞的应用二、淋巴细胞功能分析三、白血病免疫分型四、肿瘤耐药基因分析五、在AIDS病检测中的分析六、自身免疫性疾病相关HLA 抗原分析T细胞分化抗原T细胞分化抗原T细胞表面特异的表面抗原，WHO统称其为白细胞分化抗原（cluster differentiation，CD) CD3+代表总T细胞、CD3+/CD4+T辅助细胞、CD3+/CD8+T抑制细胞。 应用这些细胞的单克隆抗体与T细胞表面抗原结合后，再与荧光标记二抗(兔或羊抗鼠IgG)反应，在流式细胞仪中计数CD阳性细胞的百分率。 参考值参考值流式： CD3+ 61％-85％ CD3+CD4+ (Th) 28-58％ CD3+CD8+ (Ts) 19-48％ Th/ Ts 0.9-2.0临床意义临床意义CD3+减低 自身免疫性疾病，如SLE,类风湿性关节炎。 SLE SLE 全身性红斑狼疮其名可回溯于十九世纪，发现患者面部赤红的病症像狼咬过的伤痕，而拉丁文中狼为LUPUS狼疮，以后有位皮肤科医师观察到患者鼻梁和两颊有明显的红斑，其英文为ERYTHEMATOSUS红斑， nullSLE 之后，发现这种疾病不仅影响皮肤，亦影响全身各个器官，再加上SYSTEMIC全身性从此正名为SYSTEMIC LUPUS ERYTHEMATOSUS，全身性红斑狼疮，简称为SLE。 SLESLE一种累及多系统、多器官的，具有多种自身抗体的自身免疫性疾病。 死亡主要原因：肾脏损害，狼疮脑病，感染 网络小说 《第一次亲密接触》痞子蔡 轻舞飞扬 临床意义临床意义CD3 + CD4+减低 恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷、艾滋病、免疫抑制剂使用 CD3+CD8+减低 自身免疫性疾病、变态反应性疾病 Th/ Ts 比值 增高：自免、病毒感染、变态反应 减低：艾滋病（小于0.5），恶性肿瘤进行期和复发时 B细胞分化抗原B细胞分化抗原B细胞受抗原刺激后可分化成产生抗体的浆细胞，是体内唯一能产生抗体的细胞。 应用CD19、CD20和CD22等单克隆抗体分别与B细胞表面抗原结合，采用流式技术进行检测，分别求出CD19、CD20和CD22等细胞阳性的百分率和B淋巴细胞数。临床意义临床意义流式 CD19+ ：11.74±3.37% 升高：急、慢性性淋巴细胞白血病和Burkitt淋巴瘤 降低：无丙种球蛋白血症、使用化疗或免疫抑制剂临床常用免疫学检查包括临床常用免疫学检查包括一、血清免疫球蛋白检测 二、血清补体检测 三、细胞免疫检测 四、肿瘤标志物检测 五、自身抗体检测 六、感染免疫检测 肿瘤标志物 肿瘤标志物 肿瘤标志物（tumor marker、TM）： 　 在肿瘤发生和发展过程中，由肿瘤细胞所产生或机体在肿瘤细胞刺激下产生的，与肿瘤存在相关的物质，存在于血液、细胞、组织液、体液中。null 2008年我国卫生事业发展统计公报 卫生部统计信息中心 肿瘤的发展与诊断肿瘤的发展与诊断10-100 g榛子大小针头大小免疫学方法早期亚临床阶段晚期1 mg1 µg1kg1 g高灵敏度的肿瘤标志物的测定对肿瘤的早期诊断和治疗设计是十分重要的手段 世界卫生组织（WHO）指出：若能早期诊断并及时治疗，90%～95%的肿瘤是可以治愈的。一般肿瘤细胞在癌前病变时，会产生表达肿瘤异常蛋白质，多数肿瘤从癌前病变发展到0.5 cm 以上的占位性病变需要 5 y～10 y的时间。如果能够在这段时间内运用肿瘤标志物检测技术，早期检测到患者血液中肿瘤所表达的异常蛋白质，就可以早期发现、早期诊断，并获得早期治疗的良好效果。null恶性肿瘤增长的检测Tumor mass 1µg10³ 1mg1061g109 10-100g1010-11 1kg1012肿瘤增长Tumor cellsLead time世界卫生组织（WHO）指出：若能早期诊断并及时治疗，90%～95%的肿瘤是可以治愈的。 肿瘤标志物免疫分析肿瘤标志物免疫分析理想的肿瘤标志物 肿瘤患者血液中含量明显增高； 与肿瘤组织的定位有关； 肿瘤标志物的含量与肿瘤的大小分期有关； 肿瘤标志物的含量与肿瘤的生长、消退或转移、复发有关； 假阴性率与假阳性率低。 现实的肿瘤标志物 灵敏度有限； 特异性有限； 存在正常异常交错； 存在不稳定性 与临床表现存在差异TM分类TM分类蛋白质类，如AFP、CEA和PSA等。 糖脂类，如CA19-9和CA-50等 酶类，如PAP、NSE和AFU等。 激素，如HCG、雌激素受体等 其它 肿瘤标志物，如核酸、多胺等。null肿瘤标志物检测方法化学发光免疫分析系统化学发光免疫分析系统null临床常用肿瘤标志物1.蛋白质类肿瘤标志物检测1.蛋白质类肿瘤标志物检测甲胎蛋白（α-fetoprotein，AFP）甲胎蛋白（α-fetoprotein，AFP）在胎儿发育早期,由肝脏和卵黄囊合成，出生后一年内降至正常水平。 细胞恶变后又重新具有分泌AFP的能力。 对诊断肝细胞癌及滋养细胞恶性肿瘤有重要的临床价值。 参考值参考值血清 < 25μg/L 临床意义临床意义　原发性肝癌患者血清中AFP的含量明显升高，常>300μg/L。 　病毒性肝炎与肝硬化患者血清中AFP可增高，但常300μg/L。 　生殖器胚胎性肿瘤、胃癌、胰腺癌患者血清中AFP可升高。 　妊娠时AFP可升高，峰值低于400μg/L，若异常升高应考虑胎儿神经管缺损畸形。 癌胚抗原（carcinoembryonic antigen、CEA）癌胚抗原（carcinoembryonic antigen、CEA）早期胎儿的胃肠道及某些组织均有合成CEA的能力 胎儿出生后血清 CEA的含量极低参考值参考值血清 < 5μg/L 临床意义临床意义升高主要见于胰腺癌、结肠癌、直肠癌、乳腺癌、胃癌等消化系统肿瘤。 血清CEA连续随访检测，可用于恶性肿瘤治疗后的疗效观察及预后判断。病情好转时，CEA浓度下降，病情加重时可升高。 肠道憩室炎，直肠息肉，结肠炎，肝硬化，肝炎和肺部疾病也有不同程度的升高。 抽烟前列腺特异性抗原（PSA)前列腺特异性抗原（PSA)前列腺分泌的单链糖蛋白 存在于前列腺管道的上皮细胞，前列腺癌时血清水平明显升高 总PSA (t-PSA）中，80％结合形式，20％游离（ f-PSA) 参考值： t-PSA<4.0μg/L、 f-PSA<0.8μg/L、 f-PSA /t-PSA>0.25临床意义临床意义前列腺癌是60-90％患者血清t-PSA明显升高 前列腺炎、增生，轻度升高， t-PSA 4.0-10.0μg/L t-PSA 4.0-10.0μg/L ， f-PSA /t-PSA 的比值对诊断更有价值，f-PSA /t-PSA﹤0.1时提示前列腺癌2.糖脂类肿瘤标志物检测2.糖脂类肿瘤标志物检测肿瘤细胞内糖基化过程发生变异，从而导致细胞分泌性或细胞膜上的糖蛋白或糖脂中的糖基序列发生改变，形成了一种和正常糖蛋白不同的特殊抗原，可利用单克隆抗体技术检测这些抗原，结果诞生了糖蛋白类抗原。 作为新一代的肿瘤标记物，远较酶和激素类标记物敏感、特异。 CA125CA125糖蛋白性肿瘤相关抗原，存在于上皮性卵巢组织及患者血清中CA-125在卵巢诊断中的应用CA-125在卵巢诊断中的应用80～90％的卵巢上皮癌中CA-125可明显升高 子宫内膜癌、透明细胞癌、输卵管癌及未分化卵巢癌患者中CA-125含量也可明显升高 粘液性卵巢癌患者的阳性率则较低 CA-125在卵巢包块良恶性的鉴别上特别有价值，敏感度为78％、特异性95％、阳性预测价值82％、阴性预测价值91 ％ 。 CA-125和CEA联合测定，计算两者比值，可提高卵巢癌检出的敏感性和特异性。 其他应用其他应用非卵巢癌类的恶性肿瘤，如胰腺、肝、胃、肠、子宫、和乳腺癌症患者中CA-125的阳性率可分别高达73％、70％、53％、27％、22％和20％。 然而CA-125血清浓度轻微上升还可见于1％健康妇女，3～6％的良性卵巢疾患或非肿瘤患者，包括孕期起始3个月、行经期、子宫内膜异位、子宫纤维变性、子宫肌瘤、良性卵巢瘤、急性输卵管炎、急性胰腺炎、肝病、胸腹膜和心包感染等。应注意排除 。二、CA19-9 二、CA19-9 为唾液酸化的Ⅰ型乳糖系岩藻五糖，有六个糖基组成 正常在胰腺导管、胆道、胃、肠、子宫内膜和涎腺上皮细胞中均有表达CA19-9的应用CA19-9的应用CA19-9的器官特异性不强 在各种腺癌特别是消化系统的恶性肿瘤如： 71～93％胰腺癌、67％肝胆管癌、40～50％胃癌、30～50％肝癌、30％直肠癌和15％乳腺癌的CA19-9都有升高 在急性胰腺炎、胆汁淤积性胆管炎、胆道结石和肝脏疾患中CA19-9也有可能升高，但很少超过120kU/L，往往是呈“一过性”升高。CA19-9在胰腺癌中的应用CA19-9在胰腺癌中的应用CA19-9在胰腺癌中的阳性率最高，常被认为是针对胰腺癌的一种肿瘤标记物。 早期胰腺癌CA19-9敏感性较低， T1期为60.7％、T2期为78.4％ 检测胰腺癌的治疗效果及术后复发情况 CA15-3 CA15-3 分子量约为40 000的糖蛋白 是抗原决定簇、糖和多肽组成的糖蛋白 临床意义 :临床意义 :CA15-3作为乳腺癌的主要标记物 23％的原发性乳腺癌和69％转移性乳腺癌可有 CA15-3的升高 乳腺癌的Ⅰ期和Ⅱ期，仅有10～20％的病人有升高，所以不能用于乳腺癌的早期诊断 主要用于乳腺癌病人的治疗监测和预后判断。 乳腺癌患者血清CA15-3浓度比原来水平升高预示病情进展、肿瘤复发、转移，其浓度升高比临床症状出现或影像学检查的发现时间早。 对晚期病人，当CA15-3>100 kU/L 时，肯定有转移，敏感性高于CEA、TPA。 80％的胰腺癌、71％的肺癌、68％的乳腺癌、64％的卵巢癌、63％的直肠癌、28％的肝癌中也可见到CA15-3的升高 5.5％的正常人、一些良性肝病和良性乳腺病（16％）也可见有 CA15-3的升高 其它重要的肿瘤标志物 其它重要的肿瘤标志物 名称 生化特性 相关肿瘤 CA15-3 糖蛋白 乳腺癌、肺癌、肾癌、卵巢癌、结肠癌 CA125 糖蛋白 卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌、肺癌 CA72-4 糖蛋白 胃癌、结肠癌、胰腺癌、非小细胞性肺癌 SCC 糖蛋白 子宫颈癌、肺鳞癌、头颈部鳞癌 TPA 蛋白质 膀胱癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌 肿瘤标志物的合理选用肿瘤标志物的合理选用 同一种肿瘤可含多种标志物，而一种标志物可出现在多种肿瘤。选择特异标志物或最佳组合有利于提高肿瘤诊断的阳性率。动态检测有利于良性和恶性肿瘤的鉴别，也有利于复发、转移和预后判断。 胃癌：CEA+CA199 乳腺癌：CA153+CEA+CA199 卵巢癌：CA125+CA724+TPS+AFP 临床常用免疫学检查包括临床常用免疫学检查包括一、血清免疫球蛋白检测 二、血清补体检测 三、细胞免疫检测 四、肿瘤标志物检测 五、自身抗体检测 六、感染免疫检测自身免疫病检测自身免疫病检测正常情况下，机体免疫系统对自身抗原物质不产生免疫应答或只产生极微弱的免疫应答 自身免疫性疾病是指机体免疫功能紊乱时,针对自身组织抗原产生自身抗体或致敏淋巴细胞,并导致组织损伤而引起的疾病.如SLE、RA、MCTD等。 自身免疫性疾病主要免疫学特征为血清或其它体液中出现高滴度的自身抗体和致敏淋巴细胞,因此通过对自身抗体的检测辅助自身免疫性疾病的诊断.类风湿因子 (rehumatoid factor ,RF)类风湿因子 (rehumatoid factor ,RF)RF是变性IgG刺激机体产生的一种自身抗体，是一种以变性IgG的作为靶抗原的自身抗体。 RF主要为IgM型抗体, 但也有 IgG, IgA IgD、IgE型抗体。 存在于类风湿性关节炎患者的血清和关节液内。检测方法与参考值检测方法与参考值乳胶致敏凝集实验：<1:10为阴性。 酶连免疫吸附实验（ELISA）：阴性。 速率散射比浊法：<30KIU/L 临床意义临床意义类风湿性关节炎患者RF的阳性率为52%-92%，平均为70%。 RF的量或滴度与疾病的严重程度不平行，但与疾病的活动性有关。 IgG型与患者的滑膜炎、血管炎和关节外症状有关，IgM型与IgA型的效价与骨质破坏有关。 RF的特异性不强，在其他结缔组织病也有一定的阳性率，如SLE、硬皮病和皮肌炎、干燥综合征、慢性活动性肝炎等患者等。不过RF的含量相对较低，且持续时间较短。 抗核抗体 (antinuclear antibody,ANA)抗核抗体 (antinuclear antibody,ANA)经典ANA：是一类以细胞核成分为靶抗原的自身抗体的总称。 广义ANA：整个细胞成分，包括细胞核和细胞浆。 无器官与种属的特异性。主要是IgG. 检测方法：间接免疫荧光法（IIF)核仁型核仁型核仁型：抗核小体抗体，多见于硬皮病、皮肌炎及类分关等均质型均质型均质型：抗DNP或抗组蛋白抗体，也可是多种自身抗体高度密集的形态表现。 多见于活动期SLE、药物性狼疮等。边缘型边缘型是抗dsDNA或抗脱氧 核糖核蛋白的形态学 反应。高滴度周边型核 荧光多见于SLE。颗粒型颗粒型：抗ENA抗体。抗ENA抗体临床意义临床意义未经治疗的系统性红斑狼疮（SLE）的ANA阳性率在90%以上，因此ANA对SLE的诊断具有较高的灵敏度。 ANA滴度或量与SLE的活动性平行，因此ANA是判断SLE活动与否的指标之一。 其它自身免疫病ANA也可阳性，如全身性硬皮病的阳性率为约为85~95%，类风湿关节炎约为20%。可提取核抗原 (Extractable nuclear antigen ,ENA)多肽抗体谱可提取核抗原 (Extractable nuclear antigen ,ENA)多肽抗体谱ENA又称盐水可溶性抗原或磷酸盐可浸出抗原，是指在盐水中或磷酸盐可溶解的核抗原。 ENA多肽抗体谱是针对核内ENA的一类自身抗体，约有10余种，主要为抗核糖核蛋白(RNP)抗体和抗Sm抗体，其它还有抗SS-A抗体、抗SS-B抗体、抗Scl-70抗体、抗JO-1抗体等。 不同的自身免疫病可产生不同的抗ENA抗体。通过检测抗ENA抗体的类型及其组合，可综合诊断自身免疫病的类型。检测方法检测方法 免疫印迹技术（最常用） 免疫印迹技术（最常用）免疫印迹技术（最常用）先将ENA混合抗原作凝胶电泳，分离开不同的区带，然后把这些区带转印到硝酸纤维膜上，加入待检血清，最后用酶标抗体使相应的抗原带显色，在硝酸纤维膜上呈现特异性显色条带。参照各种已知阳性血清在膜上留下的显色区带的位置特征及显色区带对应的蛋白多肽抗原的分子特征，即可检测和识别多种自身抗体。 null 动物胸腺提取ENA SDS-PAGE 电转移至硝酸纤微膜 加标本 加酶标抗体 判断结果 null null临床意义临床意义抗RNP抗体阳性见于多种风湿性疾病，如MCTD、SLE、系统性硬化病、皮肌炎等，以MCTD的阳性率最高，约为95-100%，且抗体的滴度亦高，故此抗体对MCTD有较高的诊断价值。 抗JO-1抗体阳性对多发性肌炎与皮肌炎的诊断有一定的价值。临床意义临床意义抗Sm抗体主要见于SLE及其重叠综合征，在SLE的非活动期亦可检出，是SLE的特异性标志抗体之一，阳性率约为30-40%，而其它疾病鲜见阳性。若联合检测抗ds-DNA和抗Sm抗体可提高SLE诊断的准确性。 抗Rib抗体阳性主要见于SLE，为SLE的又一标志抗体，临床意义临床意义抗SS-A、抗SS-B抗体阳性多见于干燥综合征及合并SLE的干燥综合征，偶见MCTD，因此抗SS-A、抗SS-B抗体为干燥综合征的标志抗体。 抗Scl-70抗体为进行性全身硬化的标志抗体。特异地出现于该病患者的血清中，阳性多伴有肺纤维化，局限性硬皮病该抗体常阴性。抗脱氧核糖核酸抗体 （anti-DNA antibody）抗脱氧核糖核酸抗体 （anti-DNA antibody）抗DNA抗体分为： （1）抗双链 DNA（double stranded DNA, ds-DNA）抗体； （2）抗单链DNA （single stranded DNA, ss-DNA）抗体； （3）抗Z-DNA抗体检测方法与参考值检测方法与参考值 检测抗ds—DNA抗体最特异和最敏感的方法是用马疫锥虫或绿蝇短膜虫作为抗原基质进行间接免疫荧光测定。临床意义临床意义   1．抗ds—DNA抗体阳性 见于活动期SLE，阳性率70％～90％。本试验特异性较高，但敏感性较低。     2．抗ss—DNA抗体阳性 见于SLE(阳性率70％～95％)，尤其是合并有狼疮性肾炎。还可见于一些重叠结缔组织病、药物诱导的狼疮和慢性活动行肝炎等，但不具特异性。 抗ss-DNA抗体的临床意义抗ss-DNA抗体的临床意义抗ss-DNA抗体阳性：SLE尤其合并狼疮肾炎的SLE，但无特异性。 其他的自身免疫病如药物诱导的红斑狼疮、MCTD和慢性活动性肝炎可出现较高的阳性率。 与ANA比较，抗ss-DNA抗体的检测不能提供更进一步的信息。 临床常用免疫学检查包括临床常用免疫学检查包括一、血清免疫球蛋白检测 二、血清补体检测 三、细胞免疫检测 四、肿瘤标志物检测 五、自身抗体检测 六、感染免疫检测null1. 细菌感染免疫检测（一）抗链球菌溶血素“O”测定（一）抗链球菌溶血素“O”测定溶血素“O”是A族溶血性链球菌的具有溶血活性的蛋白质，具有抗原性 抗链球菌溶血素“O”（Anti-streptolysin、ASO）是以链球菌溶血素“O”为靶抗原的抗体。 参考值参考值 方法 正常参考值 乳胶凝集法 ＜ 500 U 免疫比浊法 ＜ 200 U 临床意义 临床意义 阳性表示病人近期内有A群溶血性链球菌感染，常见于活动性风湿热、风湿性关节炎、风湿性心肌炎、急性肾小球肾炎、急性上呼吸道感染、皮肤和软组织的感染等。 (二)伤寒和副伤寒沙门菌免疫测定 (二)伤寒和副伤寒沙门菌免疫测定 伤寒沙门菌感染后，菌体“o”抗原和鞭毛“H”抗原可刺激人体产生相应抗体；副伤寒杆菌分甲、乙和丙三型各自的菌体抗原和鞭毛抗原也可产生相应的抗体。 null肥 达 试 验 概念：用已知伤寒沙门菌O抗原和H抗原，以及甲型副伤寒、乙型、丙型副伤寒沙门菌H抗原的诊断菌液，与受检者血清作试管或微孔板凝集试验，测定有无相应抗体及其效价的试验。辅助诊断肠热症。 参考值：直接凝集法：伤寒H1：80及H>1：160者有诊断意义； 若动态观察，持续超过参考值或较原效价升高4倍以上更有价值。 O、H均升高：提示伤寒可能性大，多数患者在病程第2周出现阳性。 O不高、H升高，可能是预防接种或是非特异性回忆反应。 O升高、H不高，则可能是感染早期或与伤寒沙门菌抗原有交叉反应的其他沙门菌感染。 2. 病毒感染免疫检测2. 病毒感染免疫检测TORCHTORCHT =Toxop asma，弓形虫 O=other(syphilis),其它病毒 R= Rubella Virus，风疹病毒 C= Cytomegalo virus，巨细胞病毒 H= Herpes simplex，单纯疱疹病毒， 因此命名为TORCH检查 为妇产科产前的常规检查项目TORCH检测的意义 TORCH检测的意义 由于成人TORCH感染的临床症状不明显，无法自我感觉到是否受到感染，因此孕前及孕早期诊断对优生优育十分重要。 目前，国际上公认的最方便、最先进的早期诊断方法是检测人体血清中的特异性IgM、IgG抗体，以判断受到感染的情况。 世界上许多发达国家已经将TORCH列为孕期常规检查项目，在优生优育方面发挥着重要作用。在国内，随着科学技术的发展和人民生活水平的提高，人们对优生优育的认识逐步提高，TORCH检测越来越受到重视。 null造成孕妇流产、死胎，出生后有严重的智力障碍，生活不能自理，造成极大的精神及经济负担。临床意义临床意义 TORCH感染后，患者特异性抗体IgM、IgG可迅速升高，IgM出现早，可持续6-12周，而IgG出现晚，但可维持终生。因此，我们常把IgG阳性看作是既往感染，而IgM阳性则做为初次感染的诊断指标。 1、IgG阳性IgM阴性 　　曾经感染过这种病毒，或接种过疫苗，并且已产生免疫力，胎宝宝感染的可能性很小。 2、 IgG阴性IgM阴性 　　表明孕妇为易感人群。妊娠期最好重复IgG检查，观察是否阳转。 3、 IgG阳性IgM阳性 　　表明孕妇可能为原发性感染或再感染。可借IgG亲和试验加以鉴别。 4、IgG阴性IgM阳性 　　近期感染过，或为急性感染；也可能是其它干扰因素造成的IgM假阳性。需2周后复查，如IgG阳转，为急性感染，否则判断为假阳性。(五)轮状病毒抗体和RNA测定 (五)轮状病毒抗体和RNA测定  普通轮状病毒主要侵犯婴幼儿，成人腹泻轮状病毒则可引起青壮年胃肠炎的暴发 【参考值】RNA阴性(PCR法)； 抗原阴性(胶乳凝集试验或ELISA法) IgM和IgG阴性(金标免疫斑点法或ELISA法)。 【I临床意义】婴幼儿腹泻约有50％是由轮状病毒所致，常呈IgM阳性，提示现症感染；。IgG阳性提示既往感染；PCR检测轮状病毒RNA具特异性。 第九章 第四节 病毒性肝炎 血清标志物检测第九章 第四节 病毒性肝炎 血清标志物检测病毒性肝炎的病原体主要为肝炎病毒。 目前已明确的肝炎病毒有七型：HAV、HBV、HCV、HDV、HEV、HGV以及TTV等。 病毒性肝炎血清标志物包括：肝炎病毒本身、组成该病毒的成分以及抗病毒抗体等。一、甲型肝炎病毒标志物检测一、甲型肝炎病毒标志物检测甲型肝炎病毒（Hepatitis A virus、HAV）是一种微小核糖核酸病毒，无包膜，核心为单股正链RNA。 HAV可分为4个基因型，但只有一个血清型，只形成一个抗原抗体系统。 HAV为甲型病毒性肝炎的病原体，主要通过粪口途径传播。 临床表现为急性黄疸肝炎。 null 标志物名称 检测方法 参考值 HAVAg ELISA 阴性 抗HAV-IgM ELISA 阴性 抗HAV-IgG ELISA 阴性 抗HAV-IgA ELISA 阴性 HAV-RNA RT- PCR 阴性 标志物名称 检测方法 参考值 HAVAg ELISA 阴性 抗HAV-IgM ELISA 阴性 抗HAV-IgG ELISA 阴性 抗HAV-IgA ELISA 阴性 HAV-RNA RT- PCR 阴性 检测方法与参考值null临床意义临床意义抗HAV - IgM在HAV感染后1-2周内出现，早期诊断甲肝的特异指标。 抗HAV - IgG是一种保护性抗体，出现于恢复期并长期存在。阳性表示过去曾受过HAV感染，可用于甲肝的流行病学调查。 HAV Ag和HAV-RNA是HAV感染直接的证据，尤以HAV-RNA阳性对早期诊断价值较大。null 乙型肝炎实验室检查目的 1. 明确乙型肝炎诊断 2. 了解和研究乙型肝炎的流行病学调查 3. 估价病情和主动免疫的效果，观察疗效，判断预后 4. 排除HBsAg（+）的献血员（选择健康供血者） 乙型肝炎病毒标志物检测 乙型肝炎病毒标志物检测乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）为嗜肝DNA病毒，在电镜下可见大球形颗粒、小球形颗粒和管型颗粒。 完整的HBV颗粒为大球形颗粒，又称 Dane颗粒，直径42nm，分为包膜与核心两部分，包膜HBsAg，核心部分含有环状双股DNA、DNA聚合酶、HBcAg和HBeAg等，是病毒复制的主体。nullnullnullnull乙肝抗原： 1963年美国肿瘤研究所B.S.BIumberg在澳大利亚首先发现，称为“澳抗”又称肝炎相关抗原。 乙肝病毒： 1970年英国Dane在电镜下首先观察到乙肝病毒颗粒，是直径42nm的双层外壳的病毒颗粒，称为Dane氏颗粒，后来又有人发现26nm的核心颗粒。 e抗原： 1972年瑞典人Magnius发现与乙肝有关的第三 种抗原。e抗原为一种可溶性抗原。在HBV核心的表层null机体感染HBV后产生相应的免疫反应，形成多种不同的抗原抗体系统 表面抗原抗体系统 (HBsAg，抗HBs) 核心抗原抗体系统 (HBcAg，抗HBc) e 抗原抗体系统 (HBeAg，抗HBe) HBV为乙型病毒性肝炎的病原体，血液为其主要的传播途径。null检测方法与参考值临床意义（1）临床意义（1）HBsAg： 1 .乙型肝炎具有传染性的标志之一，阳性常见于急性、慢性乙型肝炎，慢活肝。 2. 肝硬化、肝癌患者中有相当百分比的病人阳性，此现象说明肝硬化、肝癌患者有传染乙肝的危险，还说明了乙肝，肝硬化，肝癌发展演变的内在联系。乙肝是肝癌的病因之一。 3. 血液病患者，反复输血检出率高。 4. 乙肝携带者：男性>女性，我国携带者约6%，这种人虽然没有临床症状,体检肝功能正常或有轻微损害，有时ALT升高，血中抗-HBS（-），具有一定的传染性,不应作为供血者。可持续数周、数年这种人将来可能发生慢性活动性肝炎、迁延性肝炎、肝硬化和肝癌值得注意。 null抗-HBs阳性表示：①既往曾感染过HBV，现已恢复；②接种乙肝疫苗后；③被动性获得抗-HBs抗体 HBeAg： HBeAg阳性表明: 患有乙型肝炎，是病毒复制活跃，传染性强的指标，且HBeAg持续阳性的乙型肝炎，易转变为慢性肝炎,肝硬化。 HBeAg (+) ,HBsAg(+)的孕妇所生的新生儿，母婴垂直传播的机会很高，达90%值得重视。 抗-HBe阳性意味着 HBV部分被清除或抑制，复制减少，传染性降低.但慢性肝炎,肝硬化阳性率高 e抗体和e抗原一般不同时存在，e抗原消失，e抗体产生。e抗体（+）说明患者曾出现过HBeAg，但对e抗体（+）者不可视为HBV复制平息。null抗-HBc IgM ： 是诊断急性乙型肝炎和判断病毒复制活跃的指标，并提示病人血液有强传染性。抗-HBc IgM阳性也可见于慢性活动性肝炎。 抗-HBc IgG ： 高滴度表明机体正感染HBV；而低滴度抗-HBc IgG则是既往感染过HBV的指标，具有流行病学的意义。(非保护性抗体) nullHBV DNA： 是HBV感染最直接，最灵敏和最特异的检测指标，且血清中HBV DNA的水平可作为治疗方案与疗效观察的指标。HBV DNA定量检测 null循环数. 扩增子数 (靶序列拷贝数) 1 2 2 4 3 8 4 16 5 32 6 64 20 1,048,576 30 1,073,741,824(10亿)目的基因扩增乙型肝炎病毒血清标志物的综合评价 乙型肝炎病毒血清标志物的综合评价 (1) (2) (3) (4) (5) ＋ － ＋ － ＋ 急性或慢性乙型肝炎，高传染性 ＋ － － － ＋ 急性、慢性乙型肝炎或慢性HBsAg携带者 ＋ － － ＋ ＋ 急性乙肝趋向恢复或慢性乙肝，弱传染性 － ＋ － － ＋ 急性HBV感染康复期或有既往感染史，有 免疫力 － － － ＋ ＋ 乙肝恢复期，弱传染性 － － － － ＋ 急性HBV感染“窗口期”， 或既往曾感染过 乙肝 － ＋ － － － 接种HBV疫苗或HBV感染后康复 － ＋ － ＋ ＋ 急性乙肝康复期，开始产生免疫力 － － － － － 无HBV感染 nullHBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-HBe 抗-HBc + + + + + + + + + + - 丙型肝炎病毒标志物丙型肝炎病毒标志物丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV） 由核心和包膜组成。核心含有单链正股RNA，包膜由结构蛋白和非结构蛋白区域组成。 血液为其主要传播途径。 病情虽较乙型肝炎轻，但更易转为慢性。检测方法与参考值检测方法与参考值 标志物 检测方法 参考值 抗-HCV ELISA 阴性 抗-HCV IgM ELISA 阴性 抗-HCV IgG ELISA 阴性 HCV-RNA RT-PCR 阴性 临床意义（1）临床意义（1）名称 临床意义 抗-HCV： 一种非保护性抗体，阳性是诊断 HCV感染的重要依据。 抗-HCV IgM ： 是丙型肝炎活动和具有传染性的 指标，常见于急性HCV感染。 抗-HCV IgG ： 阳性表明体内有HCV感染。 临床意义（2）临床意义（2）HCV-RNA ： 阳性提示 HCV复制活跃,传染性强，而且血清中HCV-RNA 水平可作为治疗的选择以及疗效观察的指标。 3.性传播性疾病的免疫学检验城市牛皮藓3.性传播性疾病的免疫学检验3.性传播性疾病的免疫学检验3.性传播性疾病的免疫学检验性传播性疾病（sexually transmitted disease, STD）：是指通过各种性接触而传播的疾病，简称性病（venereal disease） null正规医疗机构是性病患者的正确选择null衣原体null淋球菌null梅毒螺旋体抗体的检测 梅毒螺旋体抗体的检测 梅毒（syphilis）是由梅毒螺旋体(treponema pallidum，TP) 引起的一种危害性严重的性传播性疾病,早期主要侵犯皮肤与黏膜，晚期可侵犯全身各组织器官，特别易侵犯心脏与神经系统。 机体感染梅毒螺旋体，可产生梅毒螺旋体的特异性抗体与非特异性抗体（抗类脂质抗原的抗体）过筛实验—非特异性抗体的检测过筛实验—非特异性抗体的检测不加热血清反应素（unheated serum reagin, USR）试验 快速血浆反应素（rapid plasma reagin, RPR）试验 null确诊实验—特异性抗体的检测确诊实验—特异性抗体的检测梅毒螺旋体抗体血凝试验（ treponema pallidum hemagglutination assay,TPHA） 荧光密螺旋体抗体吸附（fluorescent treponemal antibody absorption,FTA-ABS）试验 梅毒螺旋体制动（treponema pallidum immobilizing,TPI）试验 null 过筛实验的临床意义 过筛实验的临床意义梅毒的筛选及流行病学调查。梅毒患者的阳性率约为70-95%，特别是二期梅毒，阳性率可高达100%。 其它疾病，如麻风，SLE，硬皮病，结核，雅司病等也有一定的阳性率。 梅毒疗效的检测：患者经过有效治疗后，抗体血清滴度下降。 确诊实验的临床意义确诊实验的临床意义对梅毒进行确诊。人免疫缺陷病毒（HIV）抗体检测人免疫缺陷病毒（HIV）抗体检测人免疫缺陷病毒 （human immunodeficiency virus,HIV）是艾滋病（acquired immunodeficiency syndrome,AIDS）的病原体， 可分为HIV-1和HIV-2型 HIV为单链RNA病毒 nullnullnull中国爱滋病村里的病人null爱滋病家庭遗孤null患者常表现CD4+ 淋巴细胞减少、细胞免疫功能严重缺损、继发感染等。血清中常可产生抗HIV的抗体。 金标法检测HIV金标法检测HIVnull AIDS于1981年6月美国首先报道 1985~1988年 传入期 86年4例血友病 1989~1993年 慢速扩散期 89年云南146例吸毒者 1994~至今 倍速增长期 有偿供血 94年：502 95年：1515 96年：1933HIV的检测HIV的检测　筛选试验可选择： 1．酶联免疫吸附试验（ELISA） 2．荧光免疫试验（FIA） ３．放射免疫试验（radio immunoassay,RIA） 　 确认试验可选择： 蛋白印迹（western blot,WB）法， RT-PCR检测HIV-RNA。临床意义临床意义筛选试验阳性的患者，加以确认试验阳性，若伴有临床症状，可诊断为艾滋病 筛选试验阳性的患者，加以确认试验阳性，若无临床症状，则为HIV感染者 性传播性疾病的高危人群 性传播性疾病的高危人群 性滥交者，性病患者的配偶或性伴侣 吸毒人员 经常接受输血或血液制品者 其它感染 null 中国也在行动null人人关爱爱滋病人临床常用免疫学检查包括临床常用免疫学检查包括一、血清免疫球蛋白检测 二、血清补体检测 三、细胞免疫检测 四、肿瘤标志物检测 五、自身抗体检测 六、感染免疫检测 七、其他免疫检测C反应蛋白测定C反应蛋白测定C-reactive protein、CRP）是一种急性时相反应蛋白 由肝脏合成，能与肺炎双球菌C多糖结合 能结合细菌、真菌及原虫体内的多糖 具有激活补体，促进吞噬和免疫调理作用。 参考值参考值 免疫比浊法: 新生儿＜0.6mg/L 婴 儿＜1.6mg/L 成 人＜8.0mg/L 临床意义临床意义急性时相反应极灵敏的指标。 CRP升高： 见于化脓性感染、组织坏死(心肌梗死、严重创伤、大手术、烧伤等)、恶性肿瘤、结缔组织病、器官移植急性排斥等 细菌性感染和病毒性感染的鉴别诊断指标，细菌性感染CRP升高，病毒性感染CRP不升高。 鉴别风湿热活动期和稳定期：前者CRP明显升高，而治疗好转后，CRP逐渐降至正常。 鉴别器质性和功能性疾病：前者升高，后者 不升高。 总 结总 结各种抗体的特点 补体定义及CH50测定 流式细胞术的原理及淋巴细胞亚群测定 肿瘤标志物及其特异性，AFP与CEA的特点，各种类型的特异性 自身抗体与自身免疫的关系及各类型自身抗体检测的方法及临床意义 AS0，肥达试验，TORCH检查的临床意义 CRP测定的临床意义。 null性传播疾病(STD) 通