乳与乳制品中假蛋白质的测定

现代测量与实验室管理 2009年第 5期 　文章编号 : 1005 - 3387 (2009) 05 - 0019 - 20 乳与乳制品中假蛋白质的测定 　温铁岩 温冬梅 (吉林省四平市产品质量检验所 ,四平 　136000) 　 (宏宝莱集团有限公司 ,四平 　136000) 摘 　要 :本文利用三氯乙酸对样品进行沉淀蛋白质 ,在一定条件下将蛋白质氮与非蛋白质氮进行分离 ,然后用凯氏定氮 法进行分别定量 ,这一 ,对于乳与乳制品中真假蛋白的有效鉴别检测 ,在实际工作中具有很高的实用性。 关键词 :乳与乳制品 ;假蛋白 中图分类号 : O59112　　　　　　文献标识码 : A 0　引言 乳与乳制品是婴幼儿获得营养成份的主要来源 , 蛋白质含量越高 ,其营养成份就越高 ,可见乳与乳制品 中蛋白质的高低不仅代表乳与乳制品质量的好坏 ,也 直接影响着婴幼儿的身体健康。乳与乳制品中蛋白的 测定是按照 GB /T 5413. 1 - 1997《婴幼儿配方食品和 乳粉 蛋白质的测定》进行检验的 ,用此测定方法来测 蛋白质 ,只要乳与乳制品中氮含量增加 ,计算蛋白质的 结果就会明显提高。这样就促使不法分子为了牟取暴 利 ,降低成本 ,人为地在乳与乳制品中添加一些假蛋白 质成分的氮 ,如尿素、三聚氰胺等 ,来提高劣质乳与乳 制品中蛋白质含量 ,以达到该产品蛋白的值。 这样会给食用的婴幼儿身体健康带来严重的隐患 ,甚 至危机生命。因此 ,在测定乳与乳制品中蛋白质这一 指标时 ,通过对其中的蛋白质进行鉴别分析 ,分别测定 真蛋白质和假蛋白质 ,去劣存真 ,堵塞监管漏洞 ,让伪 劣产品无所循形 ,以保护婴幼儿身体健康 ,维护广大消 费者的经济利益。 利用三氯乙酸对样品进行沉淀蛋白 ,在一定条 件下将蛋白质氮与非蛋白质氮进行分离后 ,用凯氏 定氮法进行分别定量 ,然后再根据假蛋白质含量的 高低来确定该产品的真伪 ,这一方法 ,在实际工作中 具有很高的实用性。 1　实验部分 1. 1　仪器设备 超声清洗器 ;震荡器 ;离心机 ;定氮蒸馏装置。 1. 2　试剂 硫酸铜 (分析纯 ) ;硫酸钾 (分析纯 ) ;三氯乙酸 溶液 (1% ) ;硼酸溶液 ( 2% ) ;盐酸标准溶液 ( 0. 02 mol/L) ;氢氧化钠溶液 (40% ) ;混合指示剂 (0. 1% 甲基红乙醇溶液与 0. 5%溴甲酚绿乙醇溶液等体积 混合 ,阴凉处保存期三个月 )。 1. 3　实验步骤 1)样品处理 :取具有代表性的乳制品 (固体 )试 样 ,粉碎至通过孔径为 0. 45mm的标准筛 ,用四分法 缩减至 200g,装于密封容器中 ,防止试样成分的腐 化变质。液体或膏体粘液试样应注意取样的代表 性。可用干净的小玻璃容器直接称样。称取 1 g (精确 0. 0001)试样于 50mL具塞塑料离心管中 ,加 入 15mL三氯乙酸溶液 ,超声提取 10m in,再震荡提 取 10m in,以不低于 4000 r/m in离心 10m in,上清液 经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后 ,用三氯乙酸溶 液定容至 20mL。 2)消化 :移取 10mL 滤液于凯氏烧瓶中 ,加入 0. 4g硫酸铜和 6g硫酸钾与试样混合均匀 ,再缓缓 加入 20mL硫酸和几粒玻璃珠 ,瓶口放置玻璃漏斗 , 将凯氏烧瓶置于电炉上小火加热 ,待样品焦化、泡沫 消失 ,再加强火力 ( 360～410℃) ,至溶液呈现澄清 透明的草绿色后 ,再加热至少 2h。 3)将试样消煮液冷却 ,加蒸馏水 150mL,摇均 , 冷却 ,蒸馏装置冷凝管的末端应侵入 50 mL硼酸吸 收液和加 2滴混合指示剂的锥形瓶内 ,立即与蒸馏 装置相连 ,然后小心向凯氏烧瓶中加入 40%氢氧化 钠溶液 40 mL,边加热边摇动凯氏烧瓶 ,至瓶内液体 变为深蓝色 , 加热蒸馏 , 直至馏出液体积约为 150mL,先将吸收液取下 ,用蒸馏水冲洗冷凝管末 端 ,再停止加热。 4)将上述馏出液用 0. 02mol/L盐酸标准溶液滴 定硼酸吸收液 ,至蓝色变为灰红色即为终点。记录 盐酸标准溶液用量 ,同时做空白试验。 —91— 5)结果计算 : 假蛋白质 (% ) = (v1 - v0 ) ×c ×0. 0140 ×6. 38 m ×100 式中 , v1 为滴定试样时所耗盐酸标准滴定溶液 的体积 mL; v0 为滴定空白时所耗盐酸标准滴定溶液 的体积 mL; m 为样品质量 ; c为盐酸标准滴定溶液 的浓度 mol/L; 6. 38为氮换算成蛋白质的系数。 2　真假蛋白质检测结果的识别与讨论 1)对已知未添加任何非蛋白质氮成分的同一 种乳与乳制品 ,分别按照 GB /T 5413. 1 - 1997《婴 幼儿配方食品和乳粉 蛋白质的测定 》及上述试验方 法进行重复测定 ,结果见表 1: 　表 1 测定次数 1 2 3 4 5 GB /T 5413. 1 - 1997蛋白质 % 18. 24 18. 31 18. 26 18. 28 18. 32 本文 试验 方法 真蛋白 % 17. 26 17. 29 17. 22 17. 26 17. 30 假蛋白 % 1. 01 1. 03 1. 02 1. 01 1. 03 总蛋白 % 18. 27 18. 32 18. 24 18. 27 18. 33 由表 1可以看出 ,用两种方法检测出的蛋白质 含量有很好的一致性 ,由于乳与乳制品中氮元素不 完全是蛋白质 ,还有一些非蛋白质成分氮 ,如生物碱 氮、游离氨氮等。因此 ,总蛋白质含量是测出的真蛋 白质含量和假蛋白质含量两者之和。 2)回收率的测定。在上述已测定过真假蛋白的 乳与乳制品中加入 1%、2%、3%、4%的尿素 ,分别相 当于假蛋白含量为 2. 92%、5. 85%、8. 77%、11. 66% , 每一个浓度样品平行测定 5次 ,每次平均测定数据减 去乳与乳制品本身含的假蛋白的平均值 1. 02%即为 检测值 ,其回收率 97. 6% - 100. 2% ,见表 2: 　表 2 测定次数 1 2 3 4 加入量 % 2. 92 5. 85 8. 77 11. 66 检测量 % 2. 85 5. 82 8. 79 11. 62 回收率 % 97. 6 99. 5 100. 2 99. 7 3)氨基酸是蛋白质的主要组成部分 ,因此 ,在测 定含有氨基酸乳与乳制品中的真蛋白质时 ,可按上述 试验方法先测出乳与乳制品中真蛋白质含量 ,用三氯 乙酸对样品进行沉淀蛋白质的方法测出假蛋白质含 量 ,再利用甲醛值法测出总氨基酸态氮的值乘以系数 6. 38的结果来验证准确性。从总蛋白质中将其假蛋 白质剔除 ,则为乳与乳制品中实际蛋白含量。 3　结论 利用三氯乙酸对样品进行提取 ,在一定条件下 将蛋白质氮与非蛋白质氮进行分离 ,然后用凯氏定 氮法进行分别定量 ,并采用 GB /T 5413. 1 - 1997《 婴幼儿配方食品和乳粉 蛋白质的测定 》进行对照试 验。表明该分析方法在测定乳与乳制品中真假蛋白 含量时 ,准确度高 ,回收率好 ,准确、简单易行 ,适用 强。在日常监督管理中 ,执法部门可根据真、假蛋白 质含量的高低 ,来确定乳与乳制品的质量 ,实施有效 监管 ,是具有重要的、可操作的实际意义的。 参考文献 : [ 1 ]　邢文卫、田景君编. 分析化学第二版. 北京 :化学工业 出版社. [ 2 ] 　乳与乳制品中三聚氰胺的检测方法. GB /T22388 - 2008 [ 3 ]　GB /T 5413. 1 - 1997《婴幼儿配方食品和乳粉 蛋白质 的测定 》 (上接第 16页 ) [ 8 ]　Zhang L H, Yu J H, Dong L L, et al. Study on the ex2 traction, isolation and determ ination of total alkaloids in sorbaria sorbiforid[ J ]. J Harbin Med Univ (哈尔滨医科 大学学报 ) , 2002, l6 (5) [ 9 ]　Zhang L L,W ang Z R, Huang C Q, et al. Extraction and separation of koum ine from Gelsem ium alkaloids [ J ]. J FirstM ilMed Univ(第一军医大学学报 ) , 2004, 24 (9) [ 10 ]　Long D Q, D ing Z Q, Xie M J. Study on extraction of to2 tal alkaloids in morphaphallus konjak by acidity alcohol circumfluence[ J ]. Food Sci(食品科学 ) , 2003, 24 (7) [ 11 ]　Xu X H,W ang Z T, Yu G D, et al. Study on alkaloid components of Corydalisy anhusuo [ J ]. J Chin Pharm Univ(中国药科大学学报 ) 2002, 33 (6) [ 12 ]　Chen X, Ye W F, Sun L F. Study on essential oil compo2 nents from A rtem isia selengensis Turcz. Stem s and leaves [ J ]. Physical and chem ical tests———Chem istry part (理 化检验 -化学分册 ) , 2004, 40 (11) [ 13 ]　Han C R, Zhu G Y, Chen G Y, et al. Study on alkaloid components from A rtabotrys hainanensis R. E. Fries [ J ]. Chin J Chin MatMed (中国中药杂志 ) , 2005, 11 [ 14 ]　Zhu H, X IAO Jb, ZOU Df, et al. Isolation, Purification and Identification of Ap igenin - 7 - O - β - D - glucu2 ronide in Marchantia Convoluta th Silica Column - Chro2 matography, RP - HPLC and LC - ESI - MS [ J ]. Nat Prod Res Dev(天然产物研究与开发 ) , 2005, 1 (17) —02—