苦瓜提取液的抗氧化_抑菌和降血糖活性

傅明辉 陈健汉 庄东红 汕头大学生物系 广东 !"!#$% 苦瓜提取液的抗氧化、抑菌和降血糖活性 苦瓜（&’(’)*+,- ,.-)-/0+-1 2）为葫芦科苦瓜属植 物、性味苦寒，具有清热解凉、滋养强壮、降血糖等功 效 3 " 4。近年来，随着该植物抗肿瘤抗病毒等药理活性 的发现，国内外对苦瓜的成分及功能的研究方兴未艾 3 5，% 4。本文对二个品种的苦瓜（早丰 %号，滨城苦瓜）的 果肉和瓜籽分别进行提取，并对它们的提取液的抗氧 化、抑菌和降血糖活性进行研究。 " 材料与仪器 "1 " 材料 "1 "1 " 样本 早丰 %号苦瓜（市农科所提供），滨城苦瓜（市售， 市农科所鉴定）。 "1 "1 5 药品 三氯乙酸（广州试剂站）、硫代巴比妥酸（上海试 剂二厂）、四氧嘧啶（北京市西中化工厂）、葡萄糖测定 试剂盒（上海市医学化验所）。 "1 "1 % 实验动物及菌种 昆明小鼠由汕大医学院实验动物中心提供；6 7菌 （金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、枯草杆菌）、6 8菌 （大肠杆菌、变形杆菌、产气杆菌）以上菌株由汕大医 学院微生物教研室提供；黑腐菌、软腐菌由汕大遗传 室提供。 "1 5 仪器 无菌操作台、95"分光光度计、26:"$ 8 ;医用冷 冻离心机、高压灭菌锅、粉碎机。 5 实验方法 51 " 样品提取液的制备 苦瓜取瓜肉，称重，捣碎，挤汁过滤，滤渣用 9#< 乙醇浸泡，=>.后再挤汁过滤，将两次滤液合并，回收 乙醇，浓缩至一定浓度的提取液。苦瓜籽则用粉碎机 粉碎后，用 9#<乙醇浸泡 =>.后，过滤，回收乙醇后， 用蒸馏水配成一定浓度的提取液。 51 5 样品成分的初步分析 51 51 " 样品含糖量 苯酚硫酸法，采用甘露糖作曲线 3 = 4。 51 51 5样品的蛋白质含量测定 采用 ?)-*@’)*法 3 ! 4测定。 51 51 %样品的黄酮含量测定 参照文献 3 $ 4的方法。 51 %抗氧化实验 按照文献 3 9 4的方法，测定提取液对小鼠肝匀浆脂 质过氧化的抑制作用。 51 =抑菌实验 试管稀释法 3 > 4。 51 !降血糖实验 腹腔注射四氧嘧啶致高血糖后，皮下注射样品 液，眼眶取血，葡萄糖氧化酶法测定血糖含量 3 % 4。 % 结果与讨论 %1 " 样品成分的初步分析 摘 要 本文对苦瓜果肉及籽的提取液的抗氧化、抑菌和降血糖活性进行了探讨，发现苦瓜果肉及籽的提取液均具有 明显的抗氧化活性，对常见多种细菌具有良好的抑制作用，其果肉 &AB为 ""## C 5!##(D E (F，苦瓜籽的 &AB为 9! C "!#(D E (F。提取液的降血糖活性并不明显。 关键词 苦瓜提取液 抗氧化 抑菌 降血糖 !"#$%&’$ G.+H I-IJ) H0K*+J* 0.J -/0+ 8 ’L+*-0+’/M -/0+N+’H+H -/* NF’’* HKD-) F’OJ)+/D ’@ 0.J JL0)-,0H ’@ 0.J @)K+0 @FJH. -/* HJJ*H @)’(&’(’)*+,- ,.-)-/0+-1 A0 O-H @’K/* 0.-0 0.J -/0+ 8 ’L+*-0+’/ -,0+P+0Q ’@ 0O’ JL0)-,0H O-H PJ)Q ’NP+’KH1 RFF 0.)JJ JL0)-,0H,’KF* +/.+N+0 0.J D)’O+/D’@(-/QS+/*H’@ ,’((’/N-,0J)+-1 G.J&AB’@ @FJH. ’@ @)K+0O-H""## C 5!##(D E (F -/* 0.J &AB ’@ HJJ*H O-H 9! C "!#(D E (F1 RFF JL0)-,0H .-* /’ ’NP+’KH -,0+’/ ’/ 0.J F’OJ)+/D ’@ NF’’* HKD-)1 ()* +,%-# R/0+ 8 ’L+*-0+’/ R/0+N+’H+H :J*K,0+’/ NF’’* ,’/,J/0)-0+’/ TL0)-,0H ’@ @FJH. ’@ @)K+0 -/* HJJ*H @)’(&’U (’)*+,- ,.-)-/0+- &+/+(K( +/.+N+0’)Q ,’/,J/0)-0+’/ V&ABW 5##"，X’F1 55，Y’1 =>> 《食品科学》 !营养卫生 表 ! 滨城苦瓜抑菌活性测定结果 !"#（$% & $’） 白色葡萄球菌 ( ( ) ) 变形杆菌 ( ) ) ) 产气杆菌 ) ) ) ) 枯草杆菌 ) ) ) ) 黑腐菌 ( ) ) ) 软腐菌 ) ) ) ) 大肠杆菌 ( ) ) ) 金黄色葡萄球菌 ( ( ) ) 注：(表示没有菌群生长，)表示有菌群生长 *+, -+ .-/ + *0/ 0 !"#（$% & $’） 黄酮类 ,/ 1-* ,/ .*, ,/ 0*2 （*$% & $’芦丁） 总糖（$% & $’） */ -31 1/ 104 */ ,4+ 在样品成分的初步分析中，所测的三种成分中，早 丰 .号苦瓜的含量均低于滨城苦瓜，苦瓜籽与瓜肉相 比，蛋白质及黄酮类物质含量明显要高，但总糖含量却 要低。 ./ 1 苦瓜提取物的抗氧化作用测定 本实验的结果可知，以生理盐水为对照，早丰 .号 苦瓜及瓜籽均有明显的抗氧化作用（5 6,/ ,,*），但滨 城苦瓜却基本上无抗氧化作用。抗氧化作用的结果与 样品成分初步分析并无对应关系，说明起抗氧化作用 的物质可能不是所测的几种大分子物质，而有可能是 其他一些小分子物质。 ./ . 抑菌活性测定 从表 1 7表 2 的抑菌结果可知，两种苦瓜对金黄 色葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、白色葡萄 球菌、黑腐菌等均有抑制作用。早丰 . 号 !"# 是 ***, 7 111,$% & $’，滨城苦瓜 !"#是 1+,,$% & $’。苦瓜 籽的提取液也有抑菌作用。!"#为 -+ 7 *+,$% & $’。早 丰 .号苦瓜对变形杆菌、产气杆菌、黑腐菌、软腐菌的 抑制能力要比滨城苦瓜强些。在受测菌中，大肠杆菌、 产气杆菌和枯草杆菌对两种苦瓜提取液和瓜籽提取液 的敏感性较金黄色葡萄球菌差。 本实验中对白色葡萄球菌、黑腐菌和软腐菌这三 种菌的抑制实验目前尚未见报道。黑腐菌和软腐菌是 常见的桂物病原菌，该实验结果能进一步说明苦瓜是 抵御病虫害能力较强的一种蔬菜，而且早丰 .号抵御 病虫害能力要比滨城苦瓜好。该结果为利用苦瓜成分 控制植物病害，提供一定的理论基础。另外苦瓜这种广 谱的抑菌作用提示苦瓜作为食品本身就具有抑菌防腐 的作用，也可考虑作为天然的食品防腐剂。 ./ 2 降血糖实验 正常小鼠 *4只，腹腔注射四氧嘧啶后，随机分成 四组，每组 2只，对照组皮下注射生理盐水 *$’ &只，另 三组分别皮下注射早丰 .号苦瓜，滨城苦瓜，苦瓜籽提 取液 *$’ &只，48后测定结果如下： 滨城苦瓜 + ,/ 1*- 9 ,/ ,2* ,/ 2+ 瓜籽 2 ,/ *1- 9 ,/ ,*0 2*/ - 注：对照组为生理盐水 1+,, *1+, 41+ .*1 大肠杆菌 ( ( ) ) 金黄色葡萄球菌 ( ( ) ) 白色葡萄球菌 ( ( ( ) 变形杆菌 ( ( ) ) 产气杆菌 ) ) ) ) 枯草杆菌 ( ) ) ) 黑腐菌 ( ( ) ) 软腐菌 ( ( ) ) 表 " 苦瓜提取物抗氧化作用（! # $!%&’） 表 $ 早丰 ( 号苦瓜籽抑菌活性测定结果 早丰 .号苦瓜 滨城苦瓜 早丰 . 号苦瓜籽 蛋白（$% & $’） *+/ -,* *-/ -+- .3/ -1, 注：(表示没有菌群生长，)表示有菌群生长下同 早丰 .号苦瓜组 2/ **4 9 */ *41 0/ 1-, 9 */ 1,4 *,,/ 3 表 ) 苦瓜提取物降血糖作用 组别 血糖浓度 用药前 用药后 48 血糖升高度: 对照组 ./ 4- 9 */ ++ 0/ +,+ 9 1/ 2-0 *.*/ - 滨城苦瓜组 2/ -2- 9 ,/ -0. 0/ -43 9 */ *43 02/ - 苦瓜籽组 2/ 442 9 */ *1, -/ 312 9 1/ .,1 43/ 3 对照组 4 ,/ 1*0 9 ,/ ,2 ——— 苦瓜 样品 次数 光密度（;<值） ;<值降低度: 表 * 样品成分分析 早丰 .号 + ,/ **3 9 ,/ ,1. 2+/ , 大肠杆菌 ( ) ) ) 金黄色葡萄球菌 ( ( ) ) 白色葡萄球菌 ( ( ) ) 变形杆菌 ( ( ) ) 软腐菌 ( ( ) ) 《食品科学》 031,,*，=>’/ 11，?>/ 2!营养卫生 表 ( 早丰 (号苦瓜抑菌活性测定结果 !"#（$% & $’） 111, ***, +++ 1-- 产气杆菌 ( ) ) ) 枯草杆菌 ( ) ) ) 黑腐菌 ( ( ) ) 与生理盐水组相比，两苦瓜的瓜肉提取液均对四 氧嘧啶导致的高血糖小鼠有一定的降血糖作用，早丰! 号稍好些，苦瓜籽的作用则更好。有研究表明，苦瓜含 有大量的降糖物质如植物胰岛素之类 " # $。美国的 %&’()&)(*&等研究表明 " ! $。苦瓜果汁的降糖作用是通 过刺激活性 ! +细胞分泌胰岛素达到的。在本实验中， 从成分初步分析表中可知，瓜籽的黄酮类物质和蛋白 类物质较两种肉的含量大，含糖量则较小，所以推测降 血糖物质可能是黄酮类和蛋白类物质起主导作用。由 于本实验所用小鼠只数较少，所以结果经统计学处理， 并无显著意义。另外，造成该结果的另一个可能原因就 是提取方法有可能会对活物质造成损伤因此有必要探 索出一套较好的提取方法，以保证活性物质的完好。 参考文献 , 江苏新医学院编 -《中药大辞典》- 上海科技出版社，,#./， ,0.,- 0 薛颖，宋曙辉，陈杭 - 苦瓜等 #,种食用植物抗促癌作用的 研究 - 营养学报，,##.，01（0）：0,# 2 00!- ! 王勇庆 - 苦瓜降血糖作用研究 - 湖南中医杂志，,##.，,3 （4）：/3 2 //- 3 张憔杰主编 - 复合多糖生化技术 - 上海科技出版社，,#.5， 4 2 5- / 6’&78’9 ::- ; ’&<=9 &)9 >?)@=7=A? B?7C89 D8’ 7C? E(&)7=7&7=8) 8D B=F’8G’&) E(&)7=7=?@ 8D <’87?=) (7=H=ICG 7C? <’=)&=