李斯特氏菌属性

此主题相关图片如下： 按此查看图片详细信息 正在读取此图片的详细信息，请稍候 ... 李斯特氏菌属包括七个种： 单核细胞增生李斯特氏菌 绵羊李斯特氏菌 英诺克李斯特氏菌 威尔斯李斯特氏菌 西尔李斯特氏菌 格氏李斯特氏菌 默氏李斯特氏菌。 其中单核细胞增生李斯特氏菌对人类致病性强，绵羊李斯特氏菌对人类也有一定的致病性，其余李斯特氏菌无致病性。 单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病的病原菌。 它能引起人畜的李氏菌的病，感染后主要现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。 它广泛存在于自然界中，食品中存在的单增李氏菌对人类的安全具有危险，该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一，因此，在食品卫生微生物检验中，必须加以重视。 按此查看图片详细信息 正在读取此图片的详细信息，请稍候 ... 　　该菌为革兰氏阳性短杆菌，大小约为0.5μmх1.0-2.0μm,直或稍弯，两端钝圆，常呈V字型排列，偶有球状、双球状。    兼性厌氧、无芽胞，一般不形成荚膜，但在营养丰富的环境中可形成荚膜，在陈旧培养中的菌体可呈丝状及革兰氏阴性。    该菌有4根周毛和1根端毛，但周毛易脱落。    该菌营养要求不高，在20--25℃培养有动力，穿刺培养2－5天可见倒立伞状生长，肉汤培养物在显微镜下可见翻跟斗运动。          该菌的生长范围为2--42℃（也有报道在0℃能缓慢生长），最适培养温度为35--37℃，在pH中性至弱碱性（pH9.6）、氧分压略低、二氧化碳张力略高的条件下该菌生长良好，在pH3.8－4.4能缓慢生长，在6.5% NaCl 肉汤中生长良好。    在固体培养基上，菌落初始很小，透明，边缘整齐，呈露滴状，但随着菌落的增大，变得不透明。    在5-7%的血平板上，菌落通常也不大，灰白色，刺种血平板培养后可产生窄小的β-溶血环。   在0.6%酵母浸膏胰酪大豆琼脂(TSAYE)和改良Mc Bride(MMA)琼脂上，用45度角入射光照射菌落，通过解剖镜垂直观察，菌落呈兰色、灰色或兰灰色。   该菌触酶阳性，氧化酶阴性。   发酵多种糖类，产酸不产气。   如发酵葡萄糖、乳糖、水杨素、麦芽糖、鼠李糖、七叶苷、蔗糖（迟发酵）、山梨醇、海藻糖、果糖。   不发酵木糖、甘露醇、肌醇、阿拉伯糖、侧金盏花醇、棉子糖、卫矛醇和纤维二糖。   不利用枸橼酸盐，40%胆汁不溶解。   吲哚、硫化氢、尿素、明胶液化、硝酸盐还原、赖氨酸、鸟氨酸均阴性。   VP、甲基红试验和精氨酸水解阳性。 　 该菌对理化因素抵抗力较强。 在土壤、粪便、青储饲料和干草内能长期存活。   对碱和盐抵抗力强，60-70℃经5-20min可杀死，70%酒精5min、2.5%石炭酸、2.5%氢氧化钠、2.5%福尔马林20min 可杀死此菌。该菌对青霉素、氨苄青霉素、四环素、磺胺均敏感。    李斯特氏菌(Listeria)是条件致病菌，大多为散发病例，也可因污染食品而爆发。　    本菌能产生一种溶血素性质的外毒素。能引起人和牛、绵羊等动物的脑膜炎，可使家兔豚鼠等实验动物感染引起血中单核细胞增高。 　　可引起婴儿及新生儿的化脓性脑膜炎或脑膜脑炎，死亡率可达70%。子宫内感染的新生儿可导致新生儿李斯特氏菌病、流产、死胎或习惯性流产。 李斯特的危害在于其低温生长，这样在冷藏食品中就容易发生危险。 与李斯特菌危害有关的食品主要包括： Ready to Eat Meat Products 即食肉制品 Cold Cuts, Hot Dogs, Sausages, etc.冷切，热狗，香肠等。 Soft Cheeses 软奶酪 Feta, Brie, Camembert, or blue-veined varieties Raw Milk 鲜奶 Cole Slaw 生菜色拉 下面我按照大体讲解一下。 SN 0184-93 出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌检验 Method for the examination of Listeria monocytogenes in food for export 样品：冷冻样品，2－5℃解冻，不超过18h      若不能及时检验，应置于－15 ℃保存。      非冷冻易腐样品应尽可能及时检验。      若不能及时检验，应置于4 ℃冰箱保存，在24h之内检验。 两次增菌：    巴氏消毒乳、乳制品、冷冻水产品、冻肉及其它加工食品应该前增菌。    25g＋225ml改良缓冲蛋白胨水，均质。    30 ℃培养18－24h，移取1ml接种于100ml增菌培养液（EB）中，30 ℃培养24、48h，分别进行分离。 直接增菌：    生乳、鲜肉以及未经加工处理过的样品。    25g＋225ml 增菌培养液，30 ℃培养24和48h，分别进行分离。 此主题相关图片如下： 按此查看图片详细信息 正在读取此图片的详细信息，请稍候 ... 分离： 划线接种于MMA或者OXA平板，35 ℃培养24－48h。 斜射光镜检。 此主题相关图片如下： 按此查看图片详细信息 正在读取此图片的详细信息，请稍候 ... 这个照片不好，哪位朋友友好的照片，欢迎提供。 MMA平板： 蓝色或者兰灰色， 扁平圆润，稍有凸起， 边缘整齐， 菌落较小，约为0.5mm左右。 此主题相关图片如下： 按此查看图片详细信息 正在读取此图片的详细信息，请稍候 ... OXA平板： 菌落呈黑色，直径1mm， 在其周围形成一个黑色环。挑取5个可疑菌落，接种TSA-YE平板，进行纯培养。 纯化菌落再转接到TSB-YE肉汤，35℃培养24h。 进行生化试验。 典型运动镜检： 从TSA-YE平板挑取生长良好的菌落于洁净载玻片上。 用0.85%灭菌生理盐水制成悬浮液。 在显微镜下用油镜观察。 短棒状杆菌，显微镜下可见轻微旋转和翻滚。 此主题相关图片如下： 按此查看图片详细信息 正在读取此图片的详细信息，请稍候 ... [这个贴子最后由foodmate在 2004/09/24 11:08pm 第 2 次编辑] 过氧化氢酶： 过氧化氢酶又称接触酶，能催化过氧化氢分解成水和氧。 菌落－平板－1滴3％的过氧化氢。 阳性。 按此查看图片详细信息 正在读取此图片的详细信息，请稍候 ... 过氧化氢酶实验也可以在试管中进行。 按此查看图片详细信息 正在读取此图片的详细信息，请稍候 ... 革兰氏染色镜检： 革兰氏阳性。 按此查看图片详细信息 正在读取此图片的详细信息，请稍候 ... [这个贴子最后由foodmate在 2004/09/24 11:41pm 第 1 次编辑] 溶血试验： 7％羊血琼脂平板，划分小格，刺种菌落。 做阳性对照和阴性对照（英诺克李斯特氏菌）。 35 ℃培养24－48h，于明亮处观察。 单核细胞增生李斯特氏菌在刺种点产生窄小的透明β溶血环。 尿素酶（Urease）试验： 有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解、产生2个分子的氨，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。 穿刺接种尿素酶琼脂斜面，35℃培养5天，逐日观察，阴性。 按此查看图片详细信息 正在读取此图片的详细信息，请稍候 ... [这个贴子最后由foodmate在 2004/09/24 11:44pm 第 1 次编辑] 硝酸盐还原试验： 某些细菌能够 把培养基中的硝酸盐还原为亚硝酸盐。   亚硝酸盐与乙酸反应生成亚硝酸。   硝酸与对氨基苯磺酸作用，形成偶氮苯磺酸。   偶氮苯磺酸与α萘氨结合，形成红色的N－ α苯氨偶氮苯磺酸 接种硝酸盐肉汤，35℃培养5天， 加入0.2ml试剂A，再加入 0.2ml试剂B，轻摇混合。 红色：阳性 没有颜色变化：        加入少量锌粉        －变红－阴性（硝酸盐未被还原）        －不变－阳性（亚硝酸盐已经分解成氨和氮） [这个贴子最后由foodmate在 2004/09/24 11:32pm 第 1 次编辑] 甲基红（Methyl Red）试验： 某些细菌在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红。有些细菌产酸量少，培养基的pH保持在6.2以上，指示剂呈现黄色 V-P试验： 　某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V－P（+）反应。 操作： 接种MR-VP肉汤，35℃培养48h。 移取1ml于洁净试管，加入5％ α－萘酚溶液6ml， 再加入10％氢氧化钾溶液0.2ml，轻摇1min，静置20min VP-阳性反应：红色 剩余培养液继续培养2d， 加入甲基红指示剂5滴。 MR-阳性反应：红色 按此查看图片详细信息 正在读取此图片的详细信息，请稍候 ... 三糖铁（TSI）琼脂试验： 本试验可同时观察乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产气（变黄）；产生硫化氢（变黑）。葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。 三糖铁试验： 接种三糖铁琼脂，35℃培养5天。 斜面和底层产酸，不产生硫化氢。 (发酵葡萄糖和蔗糖) 糖酵解试验 不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。 接种0.5%糖类发酵管。 35℃培养24－48h，阴性继续培养到5天。李斯特氏菌不产气。 葡萄糖：阳性 麦芽糖：阳性 七叶苷：阳性 甘露醇：阴性 鼠李糖：阳性 木糖：阴性 按此查看图片详细信息 正在读取此图片的详细信息，请稍候 ... 动力观察： 穿刺接种半固体动力培养基， 室温（20－25℃）培养2－5天，逐日观察。 有动力。 自穿刺线向四周蔓延生长， 呈典型伞状生长，底部为弯月牙状。 协同凝血试验：企业可不做。 血清学检验：企业可不做。 小鼠毒力试验：企业可不做。 结果： 阳性结果：检出单核细胞增生李斯特氏菌 阴性结果：未检出单核细胞增生李斯特氏菌 偶刚开始做环境中的李斯特菌的检测，发现在下水道，冷凝水，天花板，墙壁等死角存在大量的李斯特菌。 我们目前的检测方法其实并不是按照标准的方法，而是参照了一些快速方法。 大体流程如下： 样品处理 | Fraser肉汤增菌24小时----如果没有生长和颜色变化，基本可以排除 | 用Mimi_VIDAS进行筛选----阴性结果排除 | 科玛嘉显色平板划线-----有很好的显色特性，不符合的排除 | 纯化菌落 | VITEK32生化仪器鉴定 | 报告结果 按此查看图片详细信息 正在读取此图片的详细信息，请稍候 ... 这是一些国家在不同的工厂李斯特菌属和单增李斯特的检出率。 按此查看图片详细信息 正在读取此图片的详细信息，请稍候 ... [这个贴子最后由foodmate在 2004/09/27 11:51am 第 1 次编辑] 这是李斯特的协同溶血实验。(cAMP) 两条竖线，左面是马红球菌，右面是金葡。 三条横线，上面是单增，中间是一种非溶血李斯特，下面是绵羊李斯特。 结果：单增在靠近金葡处溶血增强。      绵羊在靠近马红处溶血增强。 按此查看图片详细信息 正在读取此图片的详细信息，请稍候 ... [这个贴子最后由foodmate在 2004/09/27 11:57am 第 1 次编辑] 溶血实验。 从左向右依次是： 单增，窄小的 贝塔 溶血环。 绵羊，大的透明 贝塔 溶血环。 无溶血环的李斯特。 按此查看图片详细信息 正在读取此图片的详细信息，请稍候 ... 溶血实验局部放大照片。 从左向右依次是： 单增，窄小的 贝塔 溶血环。 绵羊，大的透明 贝塔 溶血环。 无溶血环的李斯特。 单核细胞增生李斯特菌 一、概况： 李斯特菌在环境中无处不在，在绝大多数食品中都能找到李斯特菌。肉类、蛋类、禽类、海产品、乳制品、蔬菜等都已被证实是李斯特菌的感染源。李斯特菌中毒严重的可引起血液和脑组织感染，很多国家都已经采取措施来控制食品中的李斯特菌，并制定了相应的标准。目前国际上公认的李斯特菌共有七个菌株： 1、 单核细胞增生李斯特菌 (L.monocytohenes) 2、 绵羊李斯特菌 (L.iuanuii) 3、 英诺克李斯特菌 (L.innocua) 4、 威尔斯李斯特菌 (L.innocua) 5、 西尔李斯特菌 (L.seeligeri) 6、 格氏李斯特菌 (L.grayi) 7、　　默氏李斯特菌 (L.murrayi) 其中单增李斯特菌是唯一能引起人类疾病的。单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病的病原菌。它能引起人、畜的李氏特菌病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。它广泛存在于自然界中，食品中存在的单增李氏菌对人类的安全具有危险，该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一。 (一) 特点： 1、 分布广：存在于土壤、水域(地表水、污水、废水)、昆虫、植物、蔬菜、鱼、鸟、野生动物、家禽。 2、 生存环境可塑性大：能在2-42℃下生存(也有报道0℃能缓慢生长 )能在冰箱冷藏室内较长时间生长繁殖。 3、 适应范围大：酸性、碱性条件下都适应。 4、带菌较高的食品有：牛奶和乳制品；肉类(特别是牛肉)；蔬菜；沙拉；海产品；冰淇凌等。 　（二）流行情况： 1999年底，美国发生了历史上因食用带有李斯特菌的食品而引发的最严重的食物中毒事件，据美国疾病控制和防治中心资料显示，在美国密歇根州有14人因食用被该菌污染的 “热狗”和熟肉而死亡，在另外22个州97人患此病，6名妇女流产。 1992-1995年法国出产的奶酪及猪肉中发现李斯特菌，2001年11月以来，我国质检部门多次从美国、加拿大、法国、爱尔兰、比利时、丹麦等二十多家肉类加工厂进口的猪腰、猪肚、猪耳、小排等三十多批近千吨猪副产品中检出单增李斯特菌、沙门氏菌等致病菌。 二、流行病学 单增李斯特氏菌广泛存在于自然界中，不易被冻融，能耐受较高的渗透压，在土壤、地表水、污水、废水、植物、青储饲料、烂菜中均有该菌存在，所以动物很容易食入该菌，并通过口腔-粪便的途径进行传播。据报道，健康人粪便中单增李氏菌的携带率为0.6-16%,有70%的人可短期带菌，4-8%的水产品、5-10%的奶及其产品、30%以上的肉制品及15%以上的家禽均被该菌污染。人主要通过食入软奶酪、未充分加热的鸡肉、未再次加热的热狗、鲜牛奶、巴氏消毒奶、冰激凌、生牛排、羊排、卷心菜色拉、芹菜、西红柿、法式馅饼、冻猪舌等而感染，约占85-90%的病例是由被污染的食品引起的。 该菌可通过眼及破损皮肤、粘膜进入体内而造成感染，孕妇感染后通过胎盘或产道感染胎儿或新生儿,栖居于阴道、子宫颈的该菌也引起感染，性接触也是本病传播的可能途径，且有上升趋势。 三、致病性： 单增李斯特菌进入人体是否得病与菌量和宿主的年龄免疫状态有关，因为该菌是一种细胞内寄生菌，宿主对它的清除主要靠细胞免疫功能，因此，易感者为新生儿、孕妇、40岁以上的成人，免疫功能缺陷者。 潜伏期：在感染后3-70天出现症状，健康成人可出现轻微类似流感症状，易感者突然发热，剧烈头痛、恶心、呕吐、腹泻、败血症、脑膜炎、孕妇出现流产。 　　单增李氏菌的抗原结构与毒力无关，它的致病性与毒力机理如下： 1、寄生物介导的细胞内增生，使它附着及进入肠细胞与巨噬细胞； 2、抗活化的巨噬细胞，单增李氏菌有细菌性过氧化物歧化酶，使它能抗活化巨噬细胞内的过氧物（为杀菌的毒性游离基团）分解； 3、溶血素，即李斯特杆菌溶血素O，可以从培养物上清液中获得，为SH活化的细胞溶素，有α和β两种，为毒力因子。 临床表现：健康成人个体出现轻微类似流感症状，新生儿、孕妇、免疫缺陷患者表现为呼吸急促、呕吐、出血性皮疹、化脓性结膜炎、发热、抽搐、昏迷、自然流产、脑膜炎、败血症直至死亡。 控制：单增李斯特氏菌在一般热加工处理中能存活，热处理已杀灭了竞争性细菌群，使单增李斯特氏菌在没有竞争的环境条件下易于存活，所以在食品加工中，中心温度必须达到70℃持续2分钟以上。单增李斯特氏菌在自然界中广泛存在，所以即使产品已经过热加工处理充分灭活了单增李斯特氏菌，但有可能造成产品的二次污染，因此蒸煮后防止二次污染是极为重要的。由于单增李斯特氏菌在4℃下仍然能生长繁殖，所以未加热的冰箱食品增加了食物中毒的危险。冰箱食品需加热后再食用。 农产品安全质量无公害水产品安全要求GB18406.4-2001 2001年10月1日实施， 对鱼肉、贝类、甲壳类(虾蟹)爬行类(鱼)两栖类、蛙等，制定了微生物指标： 细菌总数 个/g ≤106　　　　　大肠菌群 个/g ≤10 致病菌 沙门氏菌、李斯特菌、副溶血性弧菌 不得检出