奶牛隐性乳腺炎病原菌的分离鉴定和体细胞数及酶的相关性研究

第 27 卷第 2 期 家畜生态学报 Vol. 27 No . 2 2006 年 3 月 Acta Ecologiae Animalis Domastici Mar 2006 3 奶牛隐性乳腺炎病原菌的分离鉴定和 体细胞数及酶的相关性研究 马保臣1 ,秦卓明2 3 ,李建基3 ,王春 1 ,柴同杰1 (1. 山东农业大学动物科技学院 ,山东 泰安 　271018 ; 2.山东省农业科学院 ,山东 济南 　250000 ; 3.扬州大学畜牧兽医学院 ,江苏 扬州 　225000) [摘　要 ] 　对 330 个乳样分别用加州乳腺炎检验 (California Mastitis Test , CM T) ,体细胞计 数 (Somatic Cell Count , SCC)和细菌的分离培养 ( Isolation of bacteria) 法进行隐性乳腺炎的 检测 ,结果表明 3 种方法检测的结果差异不显著 ( P > 0. 05) ;对检测患有隐性乳腺炎的 241 乳 区进行了细菌的分离培养 ,结果表明引起隐性乳腺炎的最主要致病菌为金黄色葡萄球菌、凝固 酶阴性葡萄球菌、链球菌、酵母菌、假单胞菌和棒状杆菌、其它细菌的检出率差异根显著 ( P < 0. 05) 。对分离出优势细菌的部分乳样进行了 SCC 与 LD H ,NA Gase ,AL P 和 ACP 几种酶的 测定和相关性 ,结果表明 :LD H 与 SCC 有显著的相关性 ( r = 0. 7936) ,并且 LD H 与 NA2 Gase ,AL P ,ACP 都有明显的相关性 ;NA Gase 与 ACP ,LD H 有明显的相关性 ,但与 AL P 没有 相关性 ;AL P 只与 ACP 和 LD H 有显著的相关性外 ,与 SCC ,NA Gase 没有相关性 ; ACP 与 SCC ,LD H ,NA Gase ,AL P 都有极显著的相关性。 [关键词 ] 　奶牛 ;乳腺炎 ;病原菌 ;体细胞数 ;酶 [中图分类号 ] 　S811. 5 　　　　　　[文献标识码 ] 　A 　　 [文章编号 ] 　100425228 (2006) 0220063205 　　奶牛乳腺炎是引起奶牛场经济损失的最重要疾 病之一 ,尤其是隐性乳腺炎 ,发病率在 46. 4 %～ 85. 7 %。由于隐性乳腺炎没有临床症状 ,还未引起 人们足够的重视 ,但可引起奶产量的急剧减少。近 些年研究发现 ,许多酶类在隐性乳腺炎的病理过程 中起十分重要的作用 ,本文旨在探讨在隐性乳腺炎 发生时 ,乳汁内病原菌 ,体细胞数以及几种酶类之间 的内在联系 ,为临床快速诊断乳腺炎病原菌以及探 讨乳腺的损伤程度提供资料。 1 　与方法 1. 1 　乳样的来源 从青岛 ,济南 ,泰安 ,济宁 4 个奶牛场 ,随机采取 330 个乳样 ,用细菌的分离培养方法检测到患有隐 性乳腺炎的 241 个乳样。该 241 个乳样都是采自泌 乳高峰期的奶牛。 1. 2 　隐性乳腺炎的检测方法及采样方法 在挤奶时 ,先用温水擦洗乳头 ,然后用消毒水再 次擦洗 ,弃去头两把奶 ,对于检测的乳样分别标记 ,分 3 部分 ,一部分存放在灭菌的试管中 ,用于细菌的分 离与鉴定 ;一部分存放在 5mL 的冷冻管中 ,液氮保 存 ; 一部分乳样用 CMT 检测。检测方法参见文献。 1. 3 　病原菌的分离与鉴定 对 330 个乳样分别进行细菌的分离培养与鉴 定 , 病原菌的分离与鉴定参见文献。 1. 4 　体细胞计数方法 采用直接计数法 ,计数方法如下 :涂片 ,将被检乳 汁均匀涂布在玻片上 ,涂片面积为 1 cm2 ,力求均匀且 稀薄 ;37 ℃温箱干燥 ;二甲苯脱脂 5 min ; 用 95 %的酒 精固定 10 min ;玻片自然干燥 ,用美蓝染色 5 min ,水 洗 ;95 %酒精脱色 3 min ,水洗 ,干燥镜检 ,记录 100 个 视野内的细胞数 ,然后计算出体细胞数。3 [收稿日期 ] 　2005204201 ,修回日期 :2005205210 [基金项目 ] 　山东省教委项目 (项目编号 :531321153 ) [作者简介 ] 　马保臣 (19782) ,男 ,山东郓城人 ,在读博士生 ,主要从事奶牛疾病及其分子生物学的研究。 　3 [通讯作者 ] 　秦卓明 (19682) ,男 ,河南淮阳人 ,研究员 ,主要从事动物疫病的分子生物学研究。E - mail : qinzm1997 @163. com © 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 1. 5 　乳酸脱氢酶 (LD H) ,β—N —乙酰氨基葡萄糖 苷酶 ( NA Gase) ,碱性磷酸酶 ( AL P) ,酸性磷酸酶 (ACP)的测定 取液氮保存的乳样 ,先在 4 ℃,3000 r/ min 离心 10 min ,去除乳脂 ,然后在 4 ℃,20000 r/ min 超速离 心 30 min ,去除残脂 ,分离待测乳清。LD H , NA2 Gase ,AL P , ACP 的测定都采用试剂盒 ,试剂盒购 自南京建成生物工程研究所。 1. 6 　统计方法 :卡方检验和 t 检验 2 　结　果 2. 1 　奶牛隐性乳腺炎的不同诊断方法比较 不同检测方法对奶牛隐性乳腺炎的检测方法如 表 1 所示 ,经卡方检验 ,三种检测方法检测结果差异 不显著 ( P > 0. 05) 。 2. 2 　隐性乳腺炎乳样细菌的分离结果 241 个隐性乳腺炎乳样的细菌分离情况见表 2 , 经卡方检验 ,引起隐性乳腺炎的最主要致病菌为金 黄色葡萄球菌 ,凝固酶阴性葡萄球菌 ,链球菌 ,酵母 菌 ,假单胞菌和棒状杆菌 ,其它细菌的检出率差异显 著 ( P < 0. 05) 。 2. 3 　不同病原菌与体细胞以及几种酶的关系 根据引起隐性乳腺炎细菌的分离结果 ,选择分 离出优势细菌的部分乳样 (非共感染乳样)分别进行 了 SCC 与 LD H , NA Gase , AL P 和 ACP 几种酶的 测定 ,结果见表 3。结果表明 ,金黄色葡萄球菌感染 时测得的各种指标都明显高于阴性对照 ;各感染乳 区 SCC 都明显高于阴性对照 ;在感染金黄色葡萄球 菌和链球菌时 LD H 有明显的升高 ;各感染乳区 NA Gase 都有明显的升高 ;感染葡萄球菌和大肠杆 菌后 AL P 有明显的升高。 2. 4 　隐性乳腺炎体细胞数与几种酶的对数间的相 关性 表 1 　三种隐性乳腺炎的检测方法比较 Table 1 　Comparision of defective methods of subclinical mastitis CM T SCC Isolation of bacteria 阴性 Negative 112 (34 %) 101 (31 %) 89 (27 %) 阳性 Positive 218 (66 %) 229 (69 %) 241 (73 %) 表 2 　奶牛隐性乳腺炎的细菌分离情况 (241 个乳区) Table 2 　Bacteria isolated f rom subclinical mastitis samples (241 quarters) 细菌名称 Bacteria species 细菌数 Number of bacteria 所占比例 ( %) Frequency of isolation ( %) 金黄色葡萄球菌 S . aureus 48 15. 24 凝固酶阴性葡萄球菌 Coagulase - negati ve S . aureus 44 13. 97 链球菌 S t reptococcus 32 10. 16 大肠杆菌 E. coli 16 5. 08 沙雷菌 S erratia 12 3. 94 巴氏杆菌 Pasturel la 11 3. 31 克雷伯氏菌 Klebsiel la 12 3. 94 酵母菌 Yeast 23 7. 3 假单胞菌 Pasturel la 20 6. 35 棒状杆菌 Cory nebacterium bovis 21 6. 67 放线菌 A . bovis 9 2. 86 葡萄球菌厌氧亚种 S . aureus subs p . anaerobi us 6 1. 9 枸橼酸杆菌 Cit robacter S p p 17 5. 39 沙门氏菌 S almonel la 18 5. 71 腐败梭菌 Cl. septicum 2 0. 7 奴卡菌 N ocardia 11 3. 31 变形杆菌 Proteus 13 4. 12 合计 total 315 100 　　注 :241 个乳区中有 74 个乳区出现细菌的共感染 ,占 30. 7 %。 Note :74 quarters in 241 were co - infected by bacteria , and the co - infective rate was 30. 7 %. 46 家畜生态学报 第 27 卷 © 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 表 3 　不同病原菌对 SCC 以及几种酶的影响 Table 3 　SCC and enzyme activity in the milk f rom quarters infected different bacteria 病原菌 Bacteria 样本数 Sample number SCC (500000/ ml) LD H (U/ L/ min) NA Gase (U/ L/ min) AL P (U/ L/ min) ACP (U/ L/ min) 金黄色葡萄球菌 S. aureus 16 3. 65 ±0. 26 3 3 166. 87 ±96. 84 3 3 26. 54 ±14. 32 3 3 166. 77 ±70. 02 3 3 20. 56 ±6. 32 3 3 凝固酶阴性葡萄球菌 Coagulase - negati ve S. aureus 15 3. 71 ±0. 57 3 3 94. 58 ±56. 69 16. 82 ±10. 43 3 154. 15 ±60. 14 3 3 9. 69 ±3. 25 链球菌 S t reptococcus 12 3. 96 ±1. 06 3 3 130. 56 ±63. 44 3 3 19. 45 ±11. 56 3 122. 36 ±45. 93 13. 66 ±6. 27 假单胞菌 Pasturel la 9 1. 516 ±0. 28 3 3 96. 51 ±55. 03 17. 57 ±6. 33 3 128. 92 ±61. 86 12. 01 ±4. 77 大肠杆菌 E. coli 5 1. 68 ±0. 13 3 3 92. 14 ±48. 39 17. 25 ±5. 22 3 138. 55 ±25. 14 3 11. 42 ±5. 29 酵母菌 Yeast 8 1. 61 ±0. 25 3 3 90. 23 ±44. 57 18. 09 ±4. 97 3 130. 65 ±53. 54 12. 44 ±4. 65 棒状杆菌 Cory nebacteri um bovis 7 1. 42 ±0. 51 3 101. 47 ±62. 11 15. 58 ±10. 35 3 134. 44 ±61. 84 14. 64 ±6. 31 细菌培养阴性乳样 bacteria negati ve sam ples 34 0. 241 ±0. 23 86. 69 ±44. 25 10. 02 ±6. 56 124. 15 ±50. 33 10. 11 ±4. 36 　　注 : 3 3 P < 0. 01 , 3 P < 0. 05 ,下表同。 　　NOte : 3 3 means P < 0. 01 , 3 means P < 0. 05 , the same below. 表 4 　隐性乳腺炎 SCC 和几种酶的对数间的相关系数 Table 4 　Correlation coefficient between enzymes and SCC 名称 Name SCC (log) LD H (log) NA Gase (log) AL P(log) ACP(log) SCC(log) - - 0. 7936 3 3 0. 8317 3 3 0. 2794 0. 6915 3 3 LD H (log) - - - - 0. 8673 3 3 0. 3415 3 0. 9451 3 3 NA Gase (log) - - - - - - 0. 2747 0. 8334 3 3 AL P(log) - - - - - - - - 0. 4657 3 3 3 　讨　论 3. 1 　有关奶牛隐性乳腺炎的诊断方法 CM T 是粗略检测乳中 DNA 数量的间接方法 , 其值主要随乳汁内白细胞的数量而变化 ,但其不能 用来检测将近产犊的乳牛 ,泌乳末期以及干奶期之 前的乳牛的乳样 ,检测时 , CM T 值偏高 ,一些引起 乳牛乳产量锐减的疾病其乳的 CM T 值也偏高 ,虽 然这些牛没有乳腺炎 ,但奶产量的减少不能稀释体 细胞而使值偏高。体细胞数 ( Somatic Cell Count , SCC)指每毫升牛奶中体细胞的数量 ,主要由白细胞 和少量的上皮细胞组成 ,体细胞计数是广泛用于表 示个体或一群体感染程度的标志 ,感染是 SCC 升高 的主要因素。乳腺感染时 ,中性粒细胞可占体细胞 数的 95 % ,单核细胞和脱落的上皮细胞也与体细胞 有关 ,体细胞数是反映乳腺健康状况的重要标志 ,当 体细胞数达到 50000 个/ mL 时 ,个体产量的损失开 始发生 ,并当体细胞数从 50000 个/ mL 到 400000 个/ mL 每增加一倍 ,损失都急剧增大 ;到 400000 个/ mL 以上时 ,产量随体细胞数的增加也下降 ,但 幅度很小。乳汁的细菌培养是检验乳腺感染的最可 靠方法 ,给了解牛群乳腺炎提供最好的资料 ,同时也 是检测新的乳腺内感染的最直接方法。本试验证 明 ,三种检测方法在隐性乳腺炎的检出率上差异不 显著 ( P > 0. 05) ,与 J . R. Middleton (2002) 报道基本 一致 ,但不同的是 ,当新的感染发生时 ,细菌培养呈 阳性 ,SCC 会出现滞后提高 ;当应用抗生素后 ,细菌 数目减少 ,细菌培养还呈阳性 ,但会引起 SCC 和 CM T 值的提前减少。 3. 2 　有关引起奶牛隐性乳腺炎的致病菌 国内外学者对引起乳腺炎的致病菌进行了大量 的研究 ,但不同地域其致病菌的种类存在明显的差 异。Boot h J . M. 研究发现牛棒状杆菌 ,无乳链球 菌以及凝固酶阴性葡萄球菌是造成隐性乳腺炎的重 要病原。本研究发现 ,引起隐性乳腺炎的病原菌主 要为金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、链球 菌、酵母菌、棒状杆菌和假单胞菌。引起乳腺炎的病 原菌 ,根据其传播特点 ,大体可分为两类 :一类是接 触传染性病原微生物 ,它植于乳腺并通过挤奶工或 挤奶机传播 ,包括无乳链球菌、停乳链球菌、金黄葡 56第 2 期　　　　　马保臣等 :奶牛隐性乳腺炎病原菌的分离鉴定和体细胞数及酶的相关性研究 © 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 萄球菌和支原体。一类为环境性病原体包括大肠杆 菌、肺炎克雷伯菌、产气肠杆菌、沙雷氏菌、变形杆 菌、假单胞菌 ,以及其它革兰氏阴性菌、凝固酶阴性 葡萄球菌、环境链球菌、酵母菌 ,或真菌、原藻属菌、 化脓性放线菌及牛棒状菌等。本试验检测出的接触 传染性病原微生物和环境性病原体的比例分别为 21. 34 %和 88. 76 % ,充分证实 ,奶牛隐性乳腺炎主 要为环境性病原所引起 ,给我们启示 ,搞好环境卫生 和乳头药浴是降低隐性乳腺炎的最主要措施。 Dalject Chhabra (1999) 在 450 个患有乳腺炎的奶 样中分离到 48 例酵母菌 ,占 10. 67 % ,本试验检出 的酵母菌比例分别占细菌检出总数的 7. 3 % ,与其 报道相一致。酵母菌的比例较大笔者认为有以下几 种原因 : ①酵母菌本身作为致病菌 ,通过污染的灌注 导管、注射器或多次剂量的乳房灌注地进入乳房 ,因 此 ,酵母菌性乳腺炎可能激发于临床型乳腺炎的治 疗过程中 ; ②连续多次或联合使用大剂量的抗生素 使酵母菌的易感性增强 ,并且可使酵母菌的繁殖能 力大大加强 ,一些激素药物的应用进一步加重病情 ; 本试验在奶牛隐性乳腺炎的乳样中分离到葡萄球菌 厌氧亚种 ,在国内外尚属首次报道。 3. 3 　有关体细胞数与乳腺炎病原菌的关系 体细胞数是反映乳腺健康状况的重要标志 ,可 根据体细胞计数的高低确定乳腺炎的发病情况 ,并 且可进一步估算出牛奶损失。本试验结果表明 ,除 棒状杆菌外 ,细菌感染后 ,SCC 都有明显的升高 ,与 对照组差异极显著 ( P < 0. 01) ,链球菌感染后 SCC 最高 ,其次是凝固酶阴性葡萄球菌 ,金黄色葡萄球 菌 ,大肠杆菌 ,假单胞菌 ,和酵母菌 ,试验结果与黄利 权 (1995) 报道不一致 ,但与 Anakaco Shitandi and Gat honi Kihumbu (2004) 报道结果基本一致。本试 验中测得链球菌 ,凝固酶阴性葡萄球菌 ,金黄色葡萄 球菌 ,大肠杆菌 ,假单胞菌 ,和酵母菌感染时 SCC 差 异不显著 ( P > 0. 05) , 说明细菌的种类对 SCC 没有 显著影响 ,也可能是本试验的样本较少有关 ,大批的 试验在进一步的研究之中。 3. 4 　几种酶在评价乳腺炎的作用 Ishikawa H. ( 1982) 和 Kitchen B J ( 1980) 指 出 ,LD H 主要来自被损害的上皮细胞和大量的乳汁 白细胞 ,乳汁中 LD H 活性的增加充分反映了白细 胞大量聚集的炎症过程和乳腺组织的损害程度。本 试验发现 ,金黄色葡萄球菌和链球菌感染后 ,LD H 有明显的升高 ,与对照组差异极显著 ( P < 0. 01) ,说 明 ,金黄色葡萄球菌和链球菌感染可引起显著的乳 腺损伤。 β—N —乙酰氨基葡萄糖苷酶 (NA Gase) 是一种 溶菌酶 ,产生于乳腺的组织 ,是乳腺上皮细胞破坏的 标志 ( Kitchen et al 1978) ,另外 ,分叶核白细胞也是 NA Gase 的重要来源 ,在乳腺炎时 , 10 %～15 %的 NA Gase 来自分叶核白细胞 , Emanuelson et al (1987)认为 ,NA Gase 的活性可以预测乳腺的感染 , Itchikawa 等 (1993)认为 ,检测 NA Gase 的活性是确 诊乳腺炎的最可靠的方法。本试验证明 ,细菌感染 后 ,NA Gase 都有明显的升高 ,与对照组差异显著 ( P < 0. 05)或差异极显著 ( P < 0. 01) ,与报道一致 ,D S Nauriyals and S P Pachauri (1999) 用体细胞计数的 方法检测 474 个乳区 ,191 个乳区患有隐性乳腺炎 , 乳腺炎乳区乳汁 NA Gase 的活性 (0. 0931 + 00078 U moles/ mL/ min) 明显高于正常乳区乳汁 (0. 009 + 0. 0009U moles/ mL/ min) 。NA Gase 的活性测定 是判断乳腺感染的良好指标 ,并且可以推测乳腺的 损伤程度。 Elizabet h W and Kristian G(1990) 证明 ,ACP 来自胞浆 ,线粒体 ,核质和微粒体中 ,由于半胱氨酸 和二硫苏糖醇刺激释放进乳汁所形成。本试验证 明 ,金黄色葡萄球菌感染后 ,ACP 有明显的升高 ,与 对照组差异极显著 ( P < 0. 01) ,其他细菌感染后 ACP 没有明显变化 ,与对照组差异不显著 ( P > 0. 05) 。 本试验中 ,金黄色葡萄球菌 ,凝固酶阴性葡萄球 菌和大肠杆菌感染后 AL P 的活性有明显的增高 ,其 他细菌感染时 AL P 的活性差异不显著 ( P > 0. 05) 。 结果与 Pakhomov 等 (1985) 的报道不相一致 ,与黄 利权 (1995)报道基本一致。 3. 5 　奶牛隐性乳腺炎 SCC 和几种酶的相关性 本试验也发现 LD H 与 SCC 的有显著的相关性 (r = 0. 7936) ,并且 LD H 与 NA Gase ,AL P ,ACP 都 有明显的相关性。说明 LD H 的活性是反映乳腺感 染的最好指标之一。黄利权 (1995) 研究发现 ,LD H 与体细胞数间有较强的相关性 ( r = 0. 858 ) , 与 ACP , GP T , GO T 有显著的相关性 ,但与 AL P 没有 显著的相关性 ,原因需要进一步的研究。 S. Pyorala and E. Pyorala (1997) 研究发现 , NA Gase 与体细胞数呈正相关 ,并且 NA Gase 与不 同的细菌感染也有相关性 ,葡萄球菌感染时 , NA2 Gase 与体细胞数的相关性很强 ( r = 0. 941) ,凝固酶 阴性葡萄球菌感染时 , NA Gase 与体细胞数的相关 性较强 (r = 0. 761) ,在链球菌和大肠杆菌感染时 ,两 66 家畜生态学报 第 27 卷 © 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 者的相关性分别为. r = 0. 808 和 r = 0. 733。本试验 证明 NA Gase 与 SCC 显著相关 ( r = 0. 8317) ,与报 道相一致。国外有报道 SCC 与 NA Gase 的相关系 数在不同的动物存在差异 ,奶牛隐性乳腺炎 r = 0. 8602 ( Kitchen B J . et al . , 1978) ,山羊 r = 0. 5477 ( Timmms and Schultz ,1985) , 骆驼 r = - 0. 1949。 本试验首次探讨了奶牛隐性乳腺炎乳样 NA Gase 与 AL P , ACP 和 LD H 的关系 ,发现 NA Gase 与 ACP ,LD H 有明显的相关性 ,但与 AL P 没有相 关性。 本试验发现 AL P 只与 ACP 和 LD H 有显著的 相关性外 ,与 SCC ,NA Gase 没有相关性 ,结果与黄 利权 (1995) 不完全一致 ,黄利权等研究认为 ,AL P 与 LD H 没有相关性。原因还需要进一步研究。本 试验说明 AL P 的活性不能很好的反映乳腺的损伤 程度。 本试验发现 ACP 与 SCC ,LD H ,NA Gase ,AL P 都有极显著的相关性 ,结果与黄利权 (1995) 报道的 ACP 与 SCC ,LD H ,AL P 有极显著的相关性一致。 充分说明 , ACP 的活性变化可以很好得反映 SCC 和其他酶的活性变化。 参考文献 : [1 ] 　马保臣 , 牛家华 , 高玉君 ,等. 奶牛乳腺炎的细菌学研究 [J ] . 家畜生态学报 ,2005 ,26 (6) [ 2 ] 　J . R. Middleton , L . K. Fox , J . M. Gay. J . W. Tyler Influence of Staphylococcus aureus st rain2type on mammary quarter milk somatic cell count and N2acetyl2β2D2glucosaminidase activity in cattle f rom eight dairies [ J ] . J . Dairy Sci. 2002 , 85 : 11332 1140. [3 ] 　Dalject ChhabraStudies on Mycotic Mastitis in Cattle[J ] . Indi2 an Vet . J . 1999 ,76 (11) :104321045. [ 4 ] 　Anakaco Shitandi and Gat honi Kihumbu. Assessment of Cali2 fornia mastitis test usage in smallholder dairy herds and risk of violative antimicrobial residues[J ] . J . Vet . Sci. 2004. 5 (1) :52 9. [ 5 ] 　D S Nauriyal and S S Pachauri . . Determination enzyme N2 acetyle2β2D2glucosaminidase activity for screeing dairy herds for mastitis [J ] . Indian Journal of Animal Sciences 1999 ,69 (3) :175. [ 6 ] 　A. T. Guliye , C. Van Creveld and R. Yagil . Detection of snb2 clinical mastitis in dromedary camels ( Camelus dromedarius ) using somatic cell count s and t he N - acetyle2β2D2glucosamini2 dase test [J ] . Tropical Animal Healt h and Production , 2002 , 34 :952104. Isolation and Identif ication of Bacteia and Correlation bet ween SCC and Enzyme in Subcl inical Mastitis Milk Samples MA Bao2chen1 ,Q IN Zhuo2ming2 3 ,L I jian2ji3 , WAN G Chun2ao1 ,CHA I Tong2jie1 (1 . College of A nimal Science and Technology , S handong A gricult ure Universi t y , Tai’an , S handong , China; 2 . S handong A cadem y of A gricul t ural Sciences , J inan , S handong , China; 3 . College of A nimal H usbandry and V eterinary Science , Yangz hou Universit y , Yangz hou , J iangsu , China) Abstract : Three hundred and t hirty milk samples in subclinical mastitis were detected by CM T (Cali2 fornia Mastitis Test) , SCC ( Somatic Cell Count ) and isolation of bacteria. The result s showed that t he t hree met hods were not different ( P > 0. 05) . The bacteria which took high inspection rates in subclinical mastitis milk samples were coagulase2negative Stap hylococaus , S. aureus , St reptococcus , yeast , Pseudo2 monas and Corynebacterium. The enzyme activity of SCC ,LD H , NA Gase , AL P and ACP were detected f rom a part of milk samples . Correlations were st udied among SCC ,LD H ,NA Gase ,ACP and AL P in sub2 clinical mastitis milk samples. Significant correlation coefficient s were found between SCC , NA Gase , AL P ,ACP and LD H. There was significant correlation between ACP ,LD H and NA Gase , but t here was poor correlation between AL P and NA Gase. AL P was significant correlation wit h ACP and LD H ,but not with SCC and NA Gase. There were high correlation between SCC ,LD H ,NA Gase , AL P and ACP. Key words : milk cow ; subclinical mastitis ; bacterium ; SCC ; Enzyme 76第 2 期　　　　　马保臣等 :奶牛隐性乳腺炎病原菌的分离鉴定和体细胞数及酶的相关性研究 © 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net