百合多糖的抗疲劳作用

。 方法：本研究采用了正交实验对提取温度、提取时间、溶剂体积和提取次数等工艺参数进行优选。对浓缩比和乙醇加量进行实验，筛选出最佳的大 理地区百合多糖分离的乙醇沉淀工艺。从蛋白质清除率和多糖损失率两方面对传统的蛋白质去除方法Sevag法和三氯醋酸法进行了比较。用Sephadex G- 200凝胶柱层析和醋酸纤维薄膜电泳分析精制百合多糖的组分，用薄层层析方法分析百合多糖的单糖组成。 结果：最佳提取条件为：温度60℃，固液比1：8，浸提时间7小时，浸提次数2次。在此最佳条件下，进一步研究了多糖分离的乙醇沉淀工艺，发现 浸提液浓缩比和乙醇加量对多糖沉淀率有影响，最佳条件是：当浓缩液：浸提液=1：3，乙醇加量为4倍浓缩液体积时，沉淀率最大，达到87.45％，多糖 含量为17.13％。 采用传统的Sevag法和5％三氯乙酸法去除百合粗多糖中蛋白类成分，并从蛋白质清除率和多糖损失率两方面进行比较，结果为Sevag法的蛋白质清除 率为87.67％、多糖损失率为28.47％，5％三氯乙酸法的蛋白质清除率为88.35％、多糖损失率为38.34％，因而确定采用Sevag法去除蛋白质。 精制百合多糖进行了Sephadex G-200凝胶柱层析，结果得到两个洗脱峰。进行了醋酸纤维素薄膜电泳，结果得到两条区带。进行了酸水解百合多糖 的薄层层析，结果显示此百合多糖主要由葡萄糖组成，未检测到阿拉伯糖、甘露糖、和半乳糖。 结论：通过研究建立了一套可用于百合多糖的提取、纯化工艺，进行了大理地区百合多糖的提取。结果表明：新鲜百合原料(多糖含量为 ：6.79％)，经乙醇抽提、热水浸提(多糖含量为：14.47％)，再浓缩、重复醇沉、Sevag法除蛋白质、乙醇沉淀、透析、再乙醇沉淀、洗涤、干燥得精制 百合多糖(多糖含量为82.9％)。 精制百合多糖经Sephadex G-200凝胶柱层析和醋酸纤维素薄膜电泳分析，均显示存在两个组分，说明本研究精制百合多糖主要含有两种多糖组分 ，并且这两种多糖中的单糖残基存在修饰基团。进行了酸水解百合多糖的薄层层析，结果显示此百合多糖主要由葡萄糖组成，是否含有其它单糖有还待 进一步研究。 3.期刊论文 弥曼.李汾.任利君.梅其炳.MI Man.LI Fen.REN Li-jun.MEI Qi-bing 百合多糖的分离纯化及抗肿瘤作 用 -西安交通大学学报（医学版）2009,30(2) 目的 从百合粗多糖中分离纯化出纯化的百合多糖,并观察其抗肿瘤作用.方法 用水提醇沉法从植物百合中提取百合粗多糖,经透析、除蛋白、冷冻干 燥后,采用DEAE-阴离子交换纤维素分段洗脱对其进行分离纯化,得到纯化的百合多糖;将纯化的百合多糖用于H22荷瘤小鼠,测定其对荷瘤小鼠免疫功能的 影响及抗肿瘤作用.结果 分离出了纯化的百合多糖,经纯度鉴定表明成分均一;该多糖能增强H22荷瘤小鼠的免疫功能,抑制H22肿瘤的生长.结论 纯化的百 合多糖成分均一,具有抗肿瘤作用. 4.期刊论文 罗金花 微波辅助萃取百合多糖的工艺研究 -宜春学院学报2008,30(4) 目的:以龙牙百合中多糖的得率为指标,研究探讨微波辅助萃取技术在百合多糖提取工艺中的应用.以确定最佳提取工艺.方法:水提醇沉法提取百合多 糖,Sevag法(用氯仿和正丁醇按5:1的比例进行萃取)除蛋白质,硫酸-苯酚比色法测总糖含量,采用正交实验对微波辅助萃取技术提取工艺进行优选.结论 :实验表明,微波辅助萃取百合多糖的优选工艺条件为:干燥百合粉碎过100目筛;提取功率为700W;提取温度75℃:提取时间25min.百合多糖的得率为3.41%. 5.学位论文 陈小蒙 水溶性龙牙百合多糖的纯化、一级结构及其生物活性研究 2008 百合是卫生部审批通过的首批药食两用品，国内外学者对百合多糖进行了初步研究，发现它们具有降血糖、抗氧化等生物活性。但大多数活性研究 是以百合多糖的粗提物为物质基础进行的。目前对于百合多糖结构与构象的研究不多，同时由于研究者在材料选择和方法的选用上存在差异，对百合多 糖研究所得的结果也不尽相同。本文在国内外最新研究成果的基础上，综合应用分析化学及现代仪器分析等一系列现代研究方法和技术手段，系统地研 究了从龙牙百合中提取纯化出来的百合多糖LLP1、LLP2的组成、结构及其构象，并对其部分活性进行了初步研究。现将本文主要研究结果归纳如下。 1.确定了测定和计算百合多糖含量的方法。采用葸酮.硫酸比色法结合换算因子来测定和计算百合中多糖含量，其数据可靠，该方法重现性较好，较 能反应多糖的真实含量，适合于百合中多糖含量的测定。用该法测得百合多糖的换算因子f=2.718，新鲜龙牙百合鳞茎中多糖平均含量为28.18％。 2.采用现代分离分析手段建立了百合多糖的优选纯化工艺、纯度鉴定和分子量测定方法。采用DEAE-SepharoseFastFlow离子交换层析 (4.6cm×80cm)对百合水提物进行纯化，得到两个组分LLP1、LLP2(LongyaLilyPolysaccharide)。经高效液相凝胶渗透色谱检测发现LLP1为单一对称色谱 峰，紫外280nm处无吸收峰，纯度大于98％，表明该组分为均一多糖组分，重均分子量Mw1为11756Dal.；LLP2为单一对称色谱峰，紫外280nm和示差检测 的出峰时间相差很小，纯度98％，表明该组分可能是糖.蛋白复合物，重均分子量Mw2为1038773Dal.。研究表明DEAE-SepharoseFastFlow离子交换层析 (4.6cm×80cm)纯化速度快，方法简便，效率高，且能方便放大生产。 3.对LLP1、LLP2的理化性质进行了研究，发现LLP1为白色絮状固体，极易吸潮，溶于水和二甲亚砜，尤易溶于热水，不溶于高浓度乙醇、丙酮等有 机溶剂，水溶液呈透明粘稠状，Molish反应、蒽酮-硫酸反应和硫酸-咔唑反应显示有糖及糖醛酸存在，考马斯亮蓝反应显示不含蛋白质。LLP2为淡黄色 絮状固体，易吸潮，不易溶于冷水，易溶于热水和二甲亚砜，不溶于乙醇、丙酮等有机溶剂，水溶液呈半透明状，粘性极强，Molish反应、蒽酮-硫酸反 应、硫酸-咔唑反应显示有糖及糖醛酸存在；考马斯亮蓝反应显示有蛋白质存在。同时研究了两种多糖在溶液中的构象，I2-KI反应发现两种多糖可能存 在较长的侧链和较多的分枝；刚果红反应结果表明LLP1、LLP2不具有三股螺旋结构。 4.采用现代化学及仪器分析方法(硫酸-咔唑法、GC法、高碘酸氧化、Smith降解、红外光谱和NMR法等)，首次解析了LLP1、LLP2的一级结构。LLP1单 糖组成的摩尔比为Glc：Man：Ara=18.60：25.14：1.00；糖醛酸和中性糖含量分别为4.02％、94.08％；LLP1不含甲基糖，主链由甘露糖和葡萄糖组成 ，葡萄糖残基的连接方式有1，4-linkedGlcp和1，6-linkedGlcp，糖链中有末端葡萄糖残基，甘露糖以1，3-linkedManp方式连接。侧链则由阿拉伯糖和 糖醛酸组成。它们都以α形式连接。 LLP2的单糖组成摩尔比为Gal:Rha：Ara=3.58:1.00:1.09，糖醛酸和中性糖含量分别为77.13％、19.46％，蛋白质1.60％；高碘酸氧化与Smith降解 结果显示LLP2中没有1→6糖苷键，含有1→4糖苷键；LLP2不含甲基糖，主链由糖醛酸以1→4方式连接组成，在糖醛酸的3-位有可能形成侧链。侧链由半 乳糖、阿拉伯糖和鼠李糖组成，半乳糖残基以1→4方式连接。它们都以α形式连接。 5.通过四种不同体系(对α-淀粉酶的抑制作用、DPPH·自由基、超氧阴离子和羟基自由基)研究了百合多糖LLP1、LLP2的生物活性。结果显示 ，LLP1、LLP2浓度增加，对α-淀粉酶的抑制率会提高，且在相同浓度条件下，LLP2比LLP1的抑制作用要显著；LLP1对DPPH·无清除作用，对超氧阴离子 自由基几乎无清除能力，而对·OH自由基有较强的清除作用；LLP2对超氧阴离子的清除能力比较弱，对DPPH·和·OH自由基均有较强的清除能力。试验 结果显示，在一定浓度范围内，LLP2的生物活性比LLP1的活性高，这与多糖的糖醛酸含量、是否是糖-蛋白质复合物及构效关系有关。 6.期刊论文 杨林莎.李玉贤.李明丽.刘珺 苯酚-硫酸比色法测定百合多糖的含量 -中国中医药信息杂志2004,11(8) 目的测定河南产百合提取物中多糖的含量.方法采用苯酚-硫酸比色法.结果百合多糖含量为16.69%.结论方法简便,结果准确,重现性好,平均回收率为 99.42%. 7.期刊论文 何纯莲.张小艳.杨球桢.杨小红 药用百合多糖提取纯化工艺的研究 -湖南师范大学学报（医学版） 2008,5(3) 目的:优化百合多糖提取、纯化工艺.方法:以水提醇沉法提取百合多糖,savage法去蛋白纯化.在单因素实验的基础上,采用正交试验的方法对影响百 合多糖提取、纯化的因素进行优化.结果:百合多糖的最佳提取工艺为:在65℃下,用15倍药材量的蒸馏水提取3次,每次4h.最佳纯化工艺为: 样品:氯仿(v: v)为3: 2,氯仿:正丁醇为2: 1,振摇时间为15min.结论:优化的百合多糖提取纯化工艺简单、稳定,易于产业化规模生产. 8.学位论文 吴晓斌 百合中活性成分的提取、纯化及测定研究 2006 百合球茎属于百合科，包括几百个品种，如风信子，郁金香和洋葱，在中国广泛种植，且价格低廉，可作为食物和观赏用，百合球茎多糖在肠道(尤 其在大肠)的消化吸收功能非常重要，可以防止一些疾病。所以人们将百合多糖提取出来进行研究。 本论文的研究成果主要有以下几部分： (1)用回流提取、液液萃取、柱层析和有溶剂分步沉淀等方法，从百合中制备了多糖粗提出物。确定了多糖的最优提取条件。采用优于传统回流提取 的超声波辅助提取，以蒸馏水为溶剂，在400W下浸提40min，料液比为1:10，多糖得率达1.373％；并对超声波辅助提取机理进行了探讨。 (2)分别探讨了多糖、皂苷、蛋白质的测定方法。采用苯酚—硫酸法结合DNS法对多糖进行测定，确定了最佳检测条件：总糖含量与吸光度值在 0.0～73.0 μ g／mL范围内线性关系良好；单糖含量与吸光度值在0.40～2.00mg／mL范围内有良好线性关系。采用改进的考马斯亮蓝法分析测定了多糖 中蛋白质的含量，线性回归方程A=0.01238+1.07179x， R=0.9997。 (3)研究了采用酶—Sevag联用法去除多糖中的蛋白质，确定了最佳清除条件：酶解温度60℃，酶解时间4h，1.0mg／mL的木瓜蛋白酶0.5ml，反应 pH值6.0；试验结果表明，酶—SeVag联用法萃取三次后，残留蛋白质含量仅为1.22％，清除率高达89.29％。在提取纯化工业中，引入大孔吸附树脂技术 ，对树脂种类、吸附条件进行了研究。静态吸附结果表明X-5、NKA-9和AB-8树脂的吸附量分别为24.23，39.21和33.06；以乙醇为洗脱剂，X-5、NKA-9和 AB-8树脂的洗脱率分别为77％，97.3％，91.9％。静态实验表明XNKA-9树脂具有较好的吸附解吸性能。动态洗脱中采用梯度洗脱方式，结果表明在 95％的乙醇洗脱下，多糖纯度可达93.2％。 (4)采用DEAE一纤维素柱和Sephadex G—200为柱填料，通过离子交换层析进一步分离纯化百合多糖。层析柱尺寸为：20×500mm，试验装置简单，吸 附及洗脱易于进行。DEAE-纤维素柱上，通过NaCl溶液梯度洗脱，透析后再用乙醇沉淀后得到了两种百合多糖精品LPl、L22。经Sephadex G—200柱进一 步分离，证实都为均一组份。对所得两种多糖精品的理化性质及纯度进行了研究，并由紫外和红外光谱分析结果对其结构进行了初步表征。 (5)探讨了百合多糖和皂苷的连续提取工艺，研究了从百合中同时得到多糖和皂苷的提取工艺。采用先醇提后水提的方法，确定了适合的乙醇浓度、 提取次数和浓度。可以同时得到高含量的多糖和皂苷产品。 9.期刊论文 Manal M Shehata.王璋.许时婴 不添加蛋白酶从百合根茎中提取分离纯化水溶性非淀粉多糖 -浙江大 学学报(农业与生命科学版)2004,30(2) 采用不添加蛋白酶的方法从百合根茎中提取分离水溶性非淀粉多糖(WSNSP).用离子交换色谱和凝胶过滤色谱纯化WSNSP,测定了WSNSP的相对分子质量 ,其值为97.8 kD.另外,研究发现一些多糖是与蛋白质结合在一起的. 10.学位论文 Manal Mohammed El-Sayed(迈娜) 新鲜百合球茎中非淀粉多糖的提取、分离、纯化、鉴定和生物活性 的研究 2003 百合球茎的化学成分分析表明,它含有7.8﹪总非淀粉多糖(TNSP)和3.5﹪可溶性非淀粉多糖(SNSP).用水可以从新鲜百合球茎中提取水溶性非淀粉多 糖(WSNSP).有两种方法可以将WSNSP中的蛋白质分离出来,即蛋白酶水解法和非蛋白酶法.而非蛋白酶法包括Sevage法和柱色谱分离法.柱色谱分离法或 Sevage法纯化的WSNSP回收率高且蛋白质含量低,所以这两种方法可以用来从百合球茎中提取WSNSP.此外,这两种方法与酶法相比方便且费用低.所以非酶 法可以作为一种常规方法应用于实验室或工业化生产百合球茎WSNSP.在WSNSP分离过程中应用了两种色谱分离步骤,即离子交换(DEAE-Sepharose-CL- 6B)和凝胶过滤(Sepharose-CL-6B).从离子交换色谱获得两个多糖组分,按洗脱顺序标记为组分1和组分2.组分1含75﹪WSNSP,而组分2含25﹪WSNSP.组分 1不含蛋白质,而组分2含一些蛋白质.组分1经凝胶过滤色谱分离得到两个多糖组分,分别标记为组分A和B.组分A和B分别含67.5﹪和7.5﹪百合球茎WSNSP中 总多糖.组分2经凝胶过滤色谱分离得到组分C和D.组分C和D分别含2.5﹪和22.5﹪百合球茎WSNSP中总多糖.组分A和B中不含蛋白质,而组分C和D中都含一些 蛋白质,这说明组分C和D是糖蛋白,即多糖和蛋白质通过化学键结合在一起.百合球茎中WSNSP主要组分是组分B,因为组分B含百合球茎WSNSP中大部分总多 糖(67.5﹪).所以进一步研究了组分B的结构.利用不同的方法(GC、IR、高碘酸氧化法、Smith降解、甲基化法和<'13>C-NMR)测定了组分B的化学结构.研 究了WSNSP抑制肿瘤细胞生长(体外)和抗癌效果(体内)的生物活性.体外试验结果表明,百合球茎中WSNSP组分B可以直接抑制肿瘤细胞的生长.而体内试验 结果表明,WSNSP组分B具有抗癌功效,可以抑制小鼠S<,180>肉瘤增殖,抑瘤率在45.68﹪以上.正是因为百合球茎中WSNSP具有抗肿瘤功能,所以可以用做功 能性或保健性食品的成分.从我们的试验发现,可以用几种方法生产WSNSP. 本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_hnsfdxxb-yxb200903003.aspx 授权使用：河南省中医学院(hnszyxy)，授权号：7d9a8120-7a65-44cc-97b6-9db901621e2c 下载时间：2010年7月20日