高效液相色谱法测定清脑降压片中阿魏酸的含量
高效液相色谱法测定清脑降压片中阿魏酸的含量
【摘要】目的:建立清脑降压片的阿魏酸含量测定方法。方法:高效液相色谱法,色谱柱:C18(4.6mm×150mm,
5μm);流动相:乙腈-0.085%磷酸(17︰83);柱温:35℃;检测波长:316nm;流速:1.0ml/min。结果:
方法稳定、重现性好、回收率高、准确可靠。结论:本方法可以作为清脑降压片含量测定的方法。
【本论文关键词】 阿魏酸 清脑降压片 高效液相色谱法 含量测定
清脑降压片收载于《中国药典》2005年版一部,是由黄芩、夏枯草、槐米、当归、丹参等1...
高效液相色谱法测定清脑降压片中阿魏酸的含量
【摘要】目的:建立清脑降压片的阿魏酸含量测定方法。方法:高效液相色谱法,色谱柱:C18(4.6mm×150mm,
5μm);流动相:乙腈-0.085%磷酸(17︰83);柱温:35℃;检测波长:316nm;流速:1.0ml/min。结果:
方法稳定、重现性好、回收率高、准确可靠。结论:本方法可以作为清脑降压片含量测定的方法。
【本论文关键词】 阿魏酸 清脑降压片 高效液相色谱法 含量测定
清脑降压片收载于《中国药典》2005年版一部,是由黄芩、夏枯草、槐米、当归、丹参等13位中药组
成的中药复方制剂[1]。临床用于肝阳上亢所致的眩晕,症见头晕、头痛、项强、血压偏高。在标准中并未
制定含量测定方法,阿魏酸是当归药材中的有效成分之一,本文参照《中国药典》2005年版一部当归药材
项下的含量测定方法以及有关当归含量测定方法的文献[2~3],通过高效液相色谱法测定样品中阿魏酸的
含量,希望以此控制终产品的质量。
1 仪器与试剂
仪器:岛津-10AtvP,浙江大学 N2000色谱工作站,色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶,Diamonsil
(钻石)-C18(200mm×4.6mm,5μm)(迪马公司提供)。试药;阿魏酸对照品,中国药品生物制品检定所
提供。乙腈为色谱纯;其他试剂均为分析纯。
2 色谱条件
色谱柱:C18(4.6mm×150mm,5μm);流动相:乙腈-0.085%磷酸(17︰83);柱温:35℃;检测波长:
316nm;流 速 :1.0ml/min。样品中阿魏酸峰与其他峰分离度大于1.5;理论板数按阿魏酸峰计算应不低于5000。
3 实验条件的选择
3.1 提取溶剂的选择
以不同浓度的乙醇、甲醇为溶剂,采用加热回流的提取方法,测定同批样品,结果采用70%甲醇为溶剂 ,
提取较安全。
3.2 提取方法及时间的选择
以70%甲醇为溶剂,分别加热回流15、30、60、120min,测定同批样品,结果采用加热回流30min 为宜 ,
提取较完全。
4 线性关系的考察
精密量取阿魏酸对照品溶液(10.15mg/50ml)1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml,分别置50ml 棕
色量瓶中,加70%甲醇至刻度,摇匀,分别精密吸取10μl注入液相色谱仪中,
峰面积积分值。其进样
量(μg)与峰面积关系见
1。表1 阿魏酸对照品进样量与峰面积的关系 (略)
以阿魏酸对照品的进样量为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线,其回归方程为:
Y=2566022.47X-4009,r=0.99996。结果表明,阿魏酸在0.041~0.203μg 范围内线性关系良好。
5 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液10μl,分别于配制后0、2、4、8、12h 依法测定,计算峰面积积分值,结果
见表2。平均值为243487.6,RSD=0.66%,表明供试品溶液在12h内基本稳定。表2稳定性试验(略)
6 精密度试验
精密吸取同一供试品溶液,进样10μl,重复进样5次,计算峰面积积分值,结果见表3。平均积分值为
243425.8,RSD=0.29%,表明精密度良好。表3 精密度试验结果(略)
7 重复性试验
取同一批样品5份进行测定,计算含量测定结果,结果见表4,平均值为0.05978,RSD=0.74%,表明重
现性良好。表4 重现性试验结果(略)
8 回收率试验
采用加样回收法,精密称取已知含量的同一批号的样品(0.1983mg/g)0.6g,精密加入70%甲醇20ml,
再分别精密加入阿魏酸对照品溶液(0.0203mg/ml)5ml,按供试品溶液制备方法制备及上述色谱条件测定,
结果见表5。表5 回收率试验结果(略)
9 样品测定
9.1 对照品溶液的制备
精密称取阿魏酸对照品10mg,置50ml 棕色量瓶中,加70%甲醇使溶解,并稀释至刻度,摇匀;精密量
取3ml,置50ml 棕色量瓶中,加70%甲醇稀释至刻度,摇匀,即得(每1ml中含阿魏酸12μg)。
9.2 供试品溶液的制备
取清脑降压片20片,除去包衣,精密称量,计算平均片重,研细,精密称取1.2g,置具塞锥形瓶中,
精密加入70%甲醇25ml,密塞,称定重量,加热回流30min,放冷,再称定重量,用70%甲醇补足减失的重量 ,
摇匀,滤过,续滤液作为供试品溶液。
9.3 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,样品含量测定结果见表
6。表6 含量测定结果(略)
10 讨论
清脑降压片原标准中没有含量测定项,本研究制订的阿魏酸的含量测定方法简便易行、重现性好,为
清脑降压片质量标准的提高提供了可靠的依据,具有一定的参考价值。
【参考文献】
[1] 中华人民共和国药典,一部[S].2005.
[2] 傅欣彤,刘 颖,张小茜.当归质量标准的研究[J].中国中医药信息杂志,2003,10(8):43~44.
[3] 郑末晶,杨 静,吴桂芝,等.高效液相色谱法测定当归寄生注射液中阿魏酸的含量[J].中成药,
1999,21(4): 178.
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