精斑2007

null第十三章 精液斑检验第十三章 精液斑检验null 精斑检验的目的与其他物证检验目的一致：为案件的侦查和审理提供线索和证据 需解决的问：斑痕是否为精斑？若是精斑，确定精斑的个体来源。null 一、 概述 精液性状 乳白色半透明的粘稠液体，有特殊的异嗅味。 弱碱性（Ph72-8.6）比重（1.021-1.040）渗透压0.55-0.58 凝固酶（精囊腺） 5min内凝固成较冻状 中性蛋白酶及纤溶酶（前列腺） 20-30min内液化成稀薄半流动体状null成分构成 有形成分 精 子 呈蝌蚪状 长约50-70ul， 头部----正面观椭圆形，侧面观呈梨形 顶体----覆盖精子头部前2/3帽状结构 含有多种水解酶，穿透卵子 精子细胞核--染色质，各种大小空泡 体部----呈圆柱状，内有中心原纤维轴丝 尾部----动力的来源，线粒体很多 细胞成分 睾丸细胞、白细胞、柱状上皮细胞 其他固体 卵磷脂小体-----前列腺 精 胺 结晶---- 玻璃小体、色素颗粒、脂肪球 精 浆 是由男性各附属性腺分泌物组成，水分90%，其他10% 其中有多种蛋白质（包括酶）、黄素、胆碱、精胺等 精囊腺 50~80% 呈碱性， 含两种主要：果糖和凝固酶，及磷酸胆碱、黄素 前列腺 15~30% 呈酸性，透明状， 含有酸性磷酸酶、纤溶酶、中性蛋白酶、精胺 尿道球腺和尿道旁腺 5% 呈浅灰白色的液体 null 化学组成 蛋白质 精浆蛋白浓度约为35~55mg/ml， 略低于血清蛋白的平均浓度（72mg/ml） 血清共同蛋白 Tf、PI、ORM、GC 精液特有蛋白 1966 γ— 精浆 蛋 白（γ—Sm ） 1967 β— 精浆 蛋 白（β—Sm ） α2—精浆糖蛋白（α2—SGP） 1978 β— 微精浆蛋白（β—MSP） 1978 前列腺特异蛋白（P30）  蛋白酶 水解酶的含量最丰富 某些酶活性水平很高： 酸性磷酸酶等酶活性较其他组织酶活性高50~100 某些酶活性保持较久： 肌酸磷酸激酶(CPK)酸性磷酸酶(ACP)一年以上null 二、精斑的肉眼检验 目 的：发现可疑精斑、确定所在位置及分布，以便准确取材，提高阳性检出绿。 记 录：精斑的分布情况、数目、位置、形状、大小、颜色及光泽等 精斑 部位 人体---犯罪嫌疑人或被害人的外阴或大腿内侧、衣裤 现场---被褥、毛巾、手纸、草席 外观 形状多呈不规则地图状，身体面可成白色鳞片痂状 深色布料---浓厚精斑成灰白色状斑迹 浅色布料---精斑多呈黄白色地图状。边缘较深 软质载体---触之有硬感 辅助检查：陈旧或水洗过的精斑，可疑借助紫外光进行观察 现象---紫外光下精斑呈银白色荧光，边缘呈浅紫兰色 原因----精斑中含有黄素，在紫外线下发荧光 意义---阳性可能是精斑，（阴道分泌物、唾液、鼻涕、乳 汁等都可发荧光） null 三、精斑的预备试验 酸性磷酸酶检验 实验依据：精斑中的酸性磷酸酶含量高：浓度540~4000u/ml，约是于其他脏器的100倍；精斑中酸性磷酸酶稳定性好：抗腐败---常温保存10年、夏季室温8周腐败；耐高热---125℃加热30min仍可检出活性 检验： 磷酸苯二钠试验 原理： 方法：取可以斑痕0.1*0.1，置于试管内，加反应缓冲液3~4滴， 37度温箱内5~30min，然后加等量的显色缓冲液 结果：阳性---立即出现红色----检材可能是精斑 阴性---出现橙色---检材不是精斑或酸性磷酸酶被破坏 特点：灵敏度高---20 000倍稀释的精液仍可以出现阳性反应 磷酸萘酚-固蓝B试验 原理： 方法：取少量检材置于白瓷板上，滴加试剂1~2滴 结果：阳性----1min以内出现深紫红色反应为 阴性----不呈色或呈淡紫红色 特点：灵敏度不好，阴道液液可能呈阳性反应。null其他检验： 碘化碘钾结晶试验 方法：卵磷脂析出胆碱 +碘----过碘胆碱结晶 特点：灵敏度不高1：400，特异性不好[褐色或褐红色针状、菱形结晶] 苦味酸结晶试验 方法：精素----分解产物 + 苦味酸 ---精素苦味酸结晶 特点：只有人的精液出现—种属鉴别 [青黄色有折光的十字、柱、星结晶] 锌检出法 方法：双硫腙法、吡啶基偶氮萘酚法 特点：特异性非常高，阳性几乎是精斑 null 四、精斑的确证试验 1 精子检出法 精子是认定精斑最简便、最可靠的方法。不需要特殊的一起和试剂。 直接镜检：精子存活时间受多种因素的影响 男性 前列腺液—有利于精子 女性 阴道液—酸性—不利于精子 精 囊 液—有害于精子 宫颈液—碱性---保护精子 检材处理：浸泡：检材1.5×1.5,剪碎，置于试管中，加约0.5ml生理盐水，室温2小时，然后4度冰箱过夜。可用玻璃棒搅拌或挤压检材。可用5%~10%的氨液浸泡检材----陈旧检材，眼水不易分离精子  染色方法：单染 复染 苏木素-伊红（HE） 检出时限：活体 尸体 检 出 率：24h精子检出率为50%，48h仅为10%。null2. 免疫学检验 制备抗人精液特殊成分的抗血清，做沉淀反应 抗血清 抗 人 精 液 抗 体---具有器官特异和种属特异性 与其他体液交叉发应—吸收消除（乳、唾、血清） 灵敏度：2000以上阳性可以肯定精斑，对无精子症更具价值 抗前列腺特异性抗原抗体---具有高度的种属特异性和器官特异性 是目前确证人类精斑常用试剂，最理想的标记、灵敏度和采用方法有关 方法：酶联免疫吸附实验，胶体金法 null3 生化学检验 乳酸脱氢酶-X：位于LDH3和4 之间，由精子产生 亮氨酸氨肽酶：存在于精浆，滴加试剂呈粉红色 null 五、精斑的个人识别 1 精斑的ABO血型检测 中和试验：原理 精斑中的水溶性ABH血型物质，能特异地与相应的抗体结合，使抗体与指示红细胞的凝集能力减低或消失。 方法 注意：1 血清效价4倍 2 中和时间至少30min 3 检材浑浊—煮沸—离心 ELISA法：灵敏度高（10-4~10-5）---防止交叉污染 DNA分型： null 2 精斑的血清型检测 可检出的系统：Gm，Km，GC，ORM 3 精斑的酶型检测 其中PGM1和Fu较稳定，PGM1最常用 null 4 精斑的DNA分析 适用范围：即使精液中没有精子，由于精液中含有少量睾丸细胞、上皮细胞等都可应用。 分析方法：PCR技术----STR、VNTR 特殊应用：可以利用父系亲属的血样进行排除推测 不受女性成分的干扰，并可推测犯罪嫌疑人的数目 结果评估：用于排除同一性，没有认定同一性的作用。 统计分析：Y染色体上的各基因座在遗传时是连锁的，以单倍型遗传，不可独立计算。