病原学诊断与防治

第八章病原学诊断与防治 第一节    细菌学诊断 一、病原菌检测 1. 标本 标本采集与送检的原则： （1）据不同疾病以及疾病的不同时期采集不同标本 （2）严格无菌操作，避免标本被污染 （3）尽可能在疾病早期以及抗菌药物使用前采集标本 （4）采集的标本必须尽快送检，大多数细菌标本可以冷藏送检。 （5）标本作好标记。标本采集与送检的原则 2.细菌形态与结构检查 （1）显微镜放大法 普通光镜,电子显微镜等 （2）染色法 染色剂与细菌细胞质的结合。 最常用的染色剂是盐类。 3.分离和鉴定 鉴定的主要有： 培养特征、形态特征、生化反应、血清学鉴定、动物试验、药物敏感试验 4.病原菌抗原的检测 常用的细菌学诊断的免疫学技术有： 沉淀反应、协同凝集试验、免疫荧光法、对流免疫电泳、酶免疫测定和免疫印迹技术。 5.其他检测法 二、血清学诊断 用已知抗原检测病人血清或其它体液中未知抗体及其量的变化，可作为感染性疾病的辅助诊断。 第二节    病毒学诊断 目前常用的病毒学诊断方法包括病毒的分离鉴定、病毒的血清学检查、病毒蛋白和核酸的检测。 一、标本的采取与送检 原则： 1. 对本身带有杂菌（如咽拭子、粪便）或易受污染的标本，要进行病毒分离培养，应使用抗生素。 2. 标本应低温保存并尽快送检。 3.血清学诊断标本的采取应在发病初期和病后2~3w内各取1份血清以便对比双份血清抗体效价的动态变化。 二、病毒的分离与鉴定 （一）病毒的分离 1. 动物接种最早的病毒分离方法 2.  鸡胚培养 按病毒种类不同接种于不同部位如绒毛尿囊膜、尿囊腔、羊膜腔、卵黄囊等。 3.细胞培养 （1）从生长方式可分 单层细胞和悬浮细胞培养 （2）从来源、染色体特征及传代次数分 ①原代细胞 来源于动物、鸡胚或引产人胚组织细胞 ②二倍体细胞 细胞在体外分裂50~100代后仍保持2倍染色体数目的单层细胞。 ③传代细胞系 多由癌细胞或2倍体细胞突变而来，能在体外持续传代，对病毒的敏感性稳定 （3）病毒在培养细胞中增殖的指标 ①细胞的变化 细胞病变、多核巨细胞、包涵体 ②红细胞吸附 红细胞吸附和红细胞吸附抑制现象 ③干扰现象 ④细胞代谢的变化 （二）病毒的数量与感染性测定 （三）新分离病毒的鉴定 病毒核酸类型的鉴定、理化性状的检测、形态学观察、血清学鉴定和基因测序和生物对比 三、病毒感染的血清学诊断 中和试验、补体结合试验、血凝抑制试验、凝胶免疫扩散试验 四、病毒感染的快速诊断 （一）形态学检查 电镜和免疫电镜检查、普通光镜（查包涵体） （二）病毒蛋白抗原检查 免疫荧光技术、固相放射免疫测定、酶免疫技术 （三）特异性IgM抗体的检测 （四）检测病毒核酸 1.核酸杂交技术 斑点杂交、细胞内原位杂交、DNA印迹杂交、RNA印迹杂交 2.核酸扩增技术 PCR、连接酶链反应、反转录PCR 3. 基因芯片技术 第三节    真菌学诊断 （一）标本的采集 浅部感染真菌的检查： 深部感染真菌的检查： 标本采集要注意：标本量要足，标本应新鲜，严格无菌操作 （二）病原性真菌的检查与鉴定 1.直接镜检不染色标本、染色标本 2.分离培养 常用沙氏培基和改良沙氏培基（2~4w） 临床多用试管培养、十分重视小培养。 3.动物实验 4.皮肤超敏反应试验 （三）真菌学快速诊断 血清学试验 核酸的检测 真菌毒素的检测 第四节特异性预防与治疗（略） 一、人工主动免疫 （一）疫苗 第一代疫苗：死疫苗、活疫苗 第二代疫苗：亚单位疫苗、基因工程疫苗 第三代疫苗：DNA疫苗（基因疫苗或核酸疫苗 （二）类毒素 二、人工被动免疫 1.抗毒素 2.抗菌血清 3.胎盘丙种球蛋白 4.其他免疫制剂 三、细菌感染的治疗（略） 四、病毒感染的治疗（略） 五、真菌感染的治疗（略） 复习思考： 1.标本采集与送检时应注意什么？ 2.试比较人工主动免疫和人工被动免疫的不同点。 3.用于预防病毒感染的疫苗有哪些？ 4.试解释生物制品、人工主动免疫、人工被动免疫、亚单位疫苗、核酸疫苗、基因工程疫苗。