活血止痛胶囊三七成分的含量测定

活血止痛胶囊三七成分的含量测定 活血止痛胶囊三七成分的含量测定 2008年10月 第3卷第20期 中国医疗前沿 ChinaHealthcareFronfie~ October,2008 Vol.3No.20105 活血止痛胶囊三七成分的含量测定 张同波 (淮安药品检验所,江苏淮安223001) 【摘要】目的建立活血止痛胶囊含量的高效液相测定.方法采用高效液相法进行梯度洗脱.色谱柱为AceC18(4.6l11l11×15 1TIn1,3ixm),流动相为乙腈一水,流速为1.0mL/min,检测波长203nm,柱温为35?.结果活血止痛胶囊中3种皂苷的线性都良好fr= 0.9999),线性范围人参皂苷Rbl0.25-5ixg,人参皂苷RglO.25-5ixg,三七皂苷RIO.125-2.5ixg.结论本文建立的方法简便.精密度高, 重现性好,能同时测定活血止痛胶囊中的3种主要成分,可用于活血止痛胶囊口含片的质量控制 【关键词】活血止痛胶囊人参皂苷Rb人参皂苷Rg三七皂苷RHPLC 【中图分类号】R284.1『文献标识码1A 活血止痛胶囊处方源于孙思邈《千金方》之"活血止痛散",是 祖国医学治疗跌打损伤,瘀血肿痛的经典方剂之一.该药因其疗 效显着,标本兼治,安全性好,价格低廉而深受医患者的欢迎.三 七为方中主要成分之一,用其散瘀止血,消肿定痛之效.活血止痛 胶囊收于卫生部药品标准中药成方制剂第十二册,没有含量 测定.为了控制其质量,本文建立了一种高效液相色谱法可同时 测定活血止痛胶囊的3种主要成分.方法简便,精密度高,重现性 好,现报道如下: 1材料和仪器 1.1材料活血止痛胶囊f珠海安生凤山制药有限公司);人参 皂苷Rb.(110704—200420),人参皂苷Rg.f110703—200425),和三 七皂苷R(110745—200415)对照品f中国药品生物制品检定所);乙 腈(色谱纯,江苏汉邦科技有限公司). 1.2仪器Waters2695—2996高效液相色谱仪. 2方法与结果 2.1色谱条件色谱柱为AceCl8(4.6mmx15mm,3m);流 动相为乙腈一水;采用梯度洗脱法『梯度洗脱时间程序0min,20% 乙腈;0—20rain,20%一40%乙腈;21min,20%乙腈;流速为1.0 ml/min;检测波长203nm;柱温为35~C.理论塔板数按三七皂苷 R.峰计算,应不低于10000. 2.2标准曲线精密称取适量人参皂苷Rb10mg,人参皂苷 Rg.10mg,三七皂苷R.10mg置于2Oral量瓶中,加人适量甲 醇,使完全溶解,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得含人参皂苷 Rb,人参皂苷Rg,三七皂苷R浓度分别为0.5mg/ml, 0.5mg/ml,0.25mg/ml的储备液.分别精密吸取适量的储备液 置于10mL量瓶,加入甲醇稀释至刻度,摇匀,制得一系列具有 浓度梯度含人参皂苷Rb.,人参皂苷R三七皂苷R.的标准 溶液,取标准溶液10I注入液相色谱仪,记录色谱峰面积,以 溶液浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标绘制标准曲线,分别制 得人参皂苷Rb,人参皂苷R,三七皂苷R的标准曲线,回归 方程为:人参皂苷Rb:Y=68561X+10.6,I=-0.9999,线性范围 0.25—5g,人参皂苷Rg1:Y=64942X+12.4,r=-0.9999,线性范围 0.25,5g,三七皂苷R.:Y=59456X+20.5,r=0.9999,线性范围 0.125,2.5g. 2.3精密度试验精密吸取适量含人参皂苷Rb,人参皂苷 R三七皂苷R.浓度分别为0.5rag/ml,0.5mg/ml,0.25mg/ml 的储备液,配制成高,中,低三个浓度标准溶液,分别在 0,2,4,6,8h和连续5d测定其峰面积,计算日内,日间精密度 fn=5),结果见表1. 作者简介:张同波(1966一),男,副主任药师,江苏淮安药品检验所副所长. 表1精密度试验结果(n=5) 2.4重复性试验精密吸取适量含人参皂苷Rb,人参皂苷 Rg.,三七皂苷R.浓度分别为0.5,0.5,0.25rag/ml的储备液,配制 成浓度分别为0.3,0.3,0.15mg/ml的样品溶液,平行操作5份, 分别进样.测得结果,RSD=0.78%. 2.5进样精密度试验精密吸取适量含人参皂苷Rb,,人参皂 苷Rg.,三七皂苷R浓度分别为0.5,0.5,0.25mg/ml的储备液, 配制成浓度分别为0.3,0.3,0.15mg/ml的样品溶液,同一样品溶 液连续进样5次.测得结果,RSD=0.42%. 2.6回收率试验按活血止痛胶囊中3种成分的比例精密称 取适量人参皂苷Rb.,人参皂苷Rg.,三七皂苷R,再按活血止痛 胶囊处方加适量的其它五味药材置于50mL量瓶,加入适量甲 醇,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重 量,摇匀,滤过.精密量取续滤液25ml,蒸干,残渣加水30m1分次 溶解并转移至分液漏斗中,用水饱和的正丁醇振摇提取4次 f30ml,30ml,20ml,20m1),合并正丁醇液,用氨试液洗涤2次,每次 20ml,弃去氨试液,再用水洗涤2次,每次15ml,分取正丁醇液,蒸 干,加甲醇适量使溶解并转移至lOml量瓶中,加甲醇稀释至刻 度,摇匀,用微孔滤膜(0.45gm)滤过,取10l注入液相色谱仪,进 行色谱,记录色谱峰面积,计算回收率,结果见表2. 表2回收率试验结果(n:3) 2008年10月 106第3卷第20期 中国医疗前沿 ChinaHe~thcareFrontiers October,2008 Vol.3No.20 2.7色谱行为在该色谱条件下,取对照品混合液进样l0l, 出峰顺序,依次为人参皂苷Rb.,人参皂苷Rg,三七皂苷R1,其分 离度R均大于2,符合《中国药典2005年版一部HPLC法的分离 条件,色谱图见图1.取活血止痛胶囊样品进样,样品中含人参皂 苷Rb.,人参皂苷,三七皂苷R,分离度良好,并且无杂质峰干 扰,色谱图见图2. 图1人参皂苷Rb,人参皂苷Rg,,三七皂苷R高效液相色谱图 舟译 图2活血止痛胶囊高效液相色谱图 2.8含量测定取活血止痛胶囊20粒的物,研细,精密称 定,精密称取2g,置具塞锥形瓶中,精密加人甲醇50ml,称定重 量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重 量,摇匀,滤过.精密量取续滤液25ml,蒸干,残渣加水30m1分次 溶解并转移至分液漏斗中,用水饱和的正丁醇振摇提取4次 (30ml,30ml,20ml,20m1),合并正丁醇液,用氨试液洗涤2次,每次 20ml,弃去氨试液,再用水洗涤2次,每次15m|,分取正丁醇液,蒸 干,加甲醇适量使溶解并转移至10ml量瓶中,加甲醇稀释至刻 度,摇匀,用微孔滤膜(0.45gin)滤过,即得,取l0l注入液相色谱 仪,记录色谱峰面积,计算活血止痛胶囊的含量,结果见表3. 表33个批号活血止痛胶囊的含量测定结果(n=3) 样品号人参皂苷Rb.(m如)人参皂苷Rg.(m如)三七皂苷R(mWg) 3讨论 活血止痛胶囊所含成分多而复杂,作者曾采用C18柱,选用 多种流动相体系如甲醇一水60%,80%)和乙腈一水Co%, 80%)等,对活血止痛胶囊中三七进行测定,但均未能将活血止痛 胶囊的3种皂苷成分进行有效分离,结果不理想.本文以乙腈一 水为流动相,以C18柱为固定,采用梯度洗脱法,能同时测定活血 止痛胶囊中三七3种主要成分的含量,且线性良好,操作简便快 捷,结果准确可靠,重现性好,可用于活血止痛胶囊口含片的质量 控制. 参考文献: 【1】严华,粟晓黎,林瑞超.高效液相色谱法测定三七中三七皂苷R, 的含量uJ.药物分析杂志,2002,22(5):383 【2J王一飞,李以川,罗勇,等.三七叶皂苷滴丸制备研究UJ.中成 药,2003,25(12):956~58. 【3】王强,江英桥,马世平,等.高效液相色谱法测定三七中三七皂 苷R.的含量U】.中国中药杂志,2000,25(10):617~618. 【4】梁宁,赵怀清,周迎春,等.HPLC法同时测定三革总皂苷中人参 皂苷R与RbI的含量U1.中草药,2002,33(8):704~705. 【5】许细生.HPLC法测定跌打止痛颗粒中人参皂苷R的含量U】. 湖南中医药导报,2001,7(5):258259. 【6】沈向红,任一平,陈翊,等.HPLC法测定保健食品中人参皂甙的 研究U】.中国卫生检验杂志,2003,13(5):600~601. (上接第97页)患者常无痛性颈,锁骨上淋巴结进行性肿大,超声 检查腹膜后常发现淋巴结肿大,分布部位广泛,数目多,外形类圆 形,边界清,内部呈低回声.恶性肿大淋巴结直径较大时,CDFI: 多数内可探及周边型,中央型或混合型血流信号,而本组腹膜后 较小淋巴结(<3era)【内不易探及血流信号,与腹膜后位置深,及 肠气干扰,呼吸影响使彩色多普勒血流不易显示.原发肿瘤部位 不同,淋巴结转移分布有差别,腹腔脏器}肖化系统恶性肿瘤以肝 门区,胰腺周围,肠系膜上动脉分叉处多见;盆腔脏器恶性肿瘤淋 巴结转移以双侧髂血管旁,腹主动脉旁多见;膈以上脏器恶性肿 瘤以胰腺周围,腹主动脉前方多见;恶性淋巴瘤分布于双侧髂血 管旁,腹主动脉旁,胰腺周围. 3.2腹膜后肿大淋巴结在临床上具有重要的指导意义:(1)临 床已明确原发灶,在手术前,对腹膜后检查有否肿大淋巴结,可决 定手术方式和治疗方法;患者进行化疗或放疗前,先行腹膜后检 查有否肿大淋巴结,以便分期,制定治疗,化疗或放疗期间定 期检查腹膜后淋巴结观察病情进展情况,总之超声检查可作为临 床最简单有效地观察肿瘤转移的指标.(2)原发灶未明确,根据肿 大淋巴结声像图特征及分布部位,为临床提供相关性.(3)在我国 恶性淋巴瘤占恶性肿瘤的第九位(男性)和第l1位(女性)多发 生于青壮年,对化疗及放疗极为敏感,因此化疗及放疗前后对比 声像图特征为临床提供疗效判断. 3.3超声检查腹膜后具有一定局限性,如位置深,胃肠道大 量气体干扰,晚期大量腹水不易检出肿大淋巴结,宫颈癌,卵巢癌 发生骶前区肿大淋巴结经腹超声检查较困难,结合CT,MRI,ECT 可提高检出率. 参考文献: [1】江峰,李国杰.中国超声医学杂志,2003;19(1):36~39 【2】吴晓莉,于德江,梁萍等.中国超声医学杂志,2002;18(11): 824~825 [3J程颖,鲍慧铮,丛琦,张均.肿瘤,2006;5(26):484 【4】王纯正,徐智章主编超声诊断学.北京:人民卫生出版社,2006; 484