表面微生物检测SOP

一. 目的： 本规定了COL洁净区（D级）、ME洁净区（D级）、万古霉素洁净区（C级）、菌种（A级、C级、D级）、QC（A级、C级、D级）、取样车（C级）等（包括五指手套和设备?设施等）表面微生物的检测。 二. 检测依据： 中国GMP 、日本药局参考信息、ISO14644、EU-GMP 三. 术语： 1.静态  atrest 洁净设施建造完成，生产设备就位，并按客户与供应商议定的条件运行，但无人员在场的状态。 2.动态  operational 洁净设施按规定方式运行，规定数量的人员按议定方式工作的状态。 四. 测试 1. 表面微生物测试用培养基： （1）沙氏葡萄糖琼脂培养基：（也可使用市售配制好的培养基）： 按照使用称取适量培养基于纯化水中，加热溶化后过滤，用PH计调节pH值至适当范围（略高0.2～0.4），保证灭菌后培养基pH值为5.6±0.2，按需要分装，在121±1℃灭菌15分钟，使用前进行培养基性能确认并做空白培养。 （2）大豆酪蛋白消化物琼脂培养基：（也可使用市售配制好的培养基）： 按照使用说明书称取适量培养基于纯化水中，加热溶化后过滤，用PH计调节pH值至适当范围（略高0.2～0.4），保证灭菌后培养基pH值为7.3±0.2，按需要分装，在121±1℃灭菌15分钟，使用前进行培养基性能确认并做空白培养。 2  培养基平皿的制备 将需要灭菌的培养皿置于121±1℃湿热灭菌15分钟，将培养基加热溶化，冷至45℃ 时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿,培养基的注入量不能太多也不能太少,要尽量注满整个培养基。待琼脂在室温下凝固后，在双碟上写上所检测位置的编号,将大豆酪蛋白消化物琼脂培养基倒置于30℃ ～35℃ 恒温培养箱中培养5天，将沙氏葡萄糖琼脂培养基倒置于20℃ ～25℃ 恒温培养箱中培养7天，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用。 注：制备好的培养基平皿宜在2℃ ～8℃ 的环境中存放。              四. 采样及注意点： 1. 通过风险评估确定各区域的表面微生物的检测位置，各单位具体采样位置见附表-1。另外，对A、B级区域还要进行五指手套表面微生物的检测，一般为静态采样检测。 2. 表面微生物的采样量在24平方厘米--30平方厘米之间，每点采样1次，两种培养基要分别在采样点的两侧进行采样,不能在同一位置采样。采样时间不低于10秒。对于比较弯曲的面，只按一个用力方向采样。五指手套检测时将戴上手套的五指同时放入碟中, 双手各采样1次。 3. 测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性，采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染，应剔除。 4. 由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀的区别，如无法确认可用显微镜鉴别。 5. 表面微生物测试记录见附表-2，测试见附表-3。  五. 各房间具体采样位置： 区域 房间名称 级别 表面微生物检测位置 ME车间 混合间 D级 选混合器人员面对的两侧各测定1次 封口间 D级 人员走动频繁的墙壁测定2处 双锥干燥间 D级 4台干燥机选其中2台,每个测2处(选人员面对的两侧) 粉碎间 D级 选粉碎机人员面对的两侧各测定1次 清洗间 D级 清洗槽内、外表面各1处 洁具清洗间 D级 清洗槽内、外表面各1处 分离间 D级 4台分离机选其中2台,每个测1处(选人员接触频繁处) 结晶间 D级 3个结晶罐选其中2个,每个测1处(选人员接触频繁处) 结晶间 D级 选熟化罐人员接触频繁处测1处 结晶间 D级 选输液泵人员接触频繁处测1处 结晶间 D级 选熟化泵人员接触频繁处测1处 COL 总混间 D级 4台混合器选2台,每个测2处(选人员面对的两侧) 总混间 D级 选除尘器人员接触频繁处测1处 总混间 D级 2台电子称选每个电子称表面各2处 粉碎间 D级 ２台粉碎机选其中１台,测２处(选人员面对的两侧) 粉碎间 D级 选人员接触频繁处测1处 包装调整间 D级 人员走动频繁的墙壁测定2处 包装调整间 D级 选每个电子称表面各2处 包装调整间 D级 选热合机人员接触频繁处测1处 包装调整间 D级 选轨道人员接触频繁处测１处 成品暂存间 D级 选轨道人员接触频繁处测１处 ＶＣＭ 工器具清洗间 C级 选换热器人员接触频繁处测1处 工器具存放 C级 选干热灭菌柜人员接触频繁处测１处 工器具存放 C级 选湿热灭菌柜人员接触频繁处测１处 氯化钙结晶间 C级 选结晶罐人员接触频繁处测1处 氯化钙结晶间 C级 选中间罐人员接触频繁处测1处 氯化钙结晶间 C级 选换热器人员接触频繁处测1处 氯化钙结晶间 C级 选空气过滤器人员接触频繁处测1处 氯化钙结晶间 C级 选氮气过滤器人员接触频繁处测1处 过滤干燥间 C级 选干燥机人员面对的两侧各测定1次 过滤干燥间 C级 选粉碎机人员面对的两侧各测定1次 过滤干燥间 C级 选废水罐人员接触频繁处测1处 过滤干燥间 C级 选输水泵人员接触频繁处测1处 过滤干燥间 C级 选换热器人员接触频繁处测1处 菌种Ⅰ区 接种间1 A级 选超净工作台台面中心测定2处 西培养间 D级 选摇床人员接触频繁处测1处 东培养间 D级 选摇床人员接触频繁处测1处 五指手套 A级 双手各采样1次 菌种Ⅱ区 接种间2 A级 选超净工作台台面中心测定2处 西培养间 D级 选摇床人员接触频繁处测1处 东培养间 D级 选摇床人员接触频繁处测1处 五指手套 A级 双手各采样1次 ＱＣⅠ区 无菌实验室 C级 选微波炉人员接触频繁处测1处 无菌实验室 C级 选离心机人员接触频繁处测1处 无菌实验室 C级 选生化培养箱人员接触频繁处测1处 无菌实验室 A级 选超净工作台台面中心测定2处 生物测定室一更 D级 选微波炉人员接触频繁处测1处 生物测定室 D级 选牛津杯人员接触频繁处测1处 生物测定室 D级 选生化培养箱人员接触频繁处测1处 五指手套 A级 双手各采样1次 ＱＣⅡ区 无菌实验室１ C级 选超净工作台台面中心测定2处 无菌实验室２ C级 选超净工作台台面中心测定2处 无菌实验室３ C级 选超净工作台台面中心测定2处 无菌实验室４ C级 选超净工作台台面中心测定2处 五指手套 A级 双手各采样1次 仓库 取样车 C级 选热合机人员接触频繁处测1处         六. 表面微生物测试时控制及定期测定频次见下表： 等级 表面微生物 警戒线 行动线 标准要求 定期测定频次 A级 设备?设施(Ф55 mm) CFU/碟 ---- ---- <1 每月一次 手指 CFU/手套 ---- ----- <1 每月一次 B级 设备?设施(Ф55 mm) CFU/碟 ≤3 ≤4 ≤5 每月一次 手指 CFU/手套 ≤3 ≤4 ≤5 每月一次 C级 墙 、设备?设施(Ф55 mm) CFU/碟 ≤12 ≤20 ≤25 每月一次 D级 墙 、设备?设施(Ф55 mm) CFU/碟 ≤20 ≤40 ≤50 每月一次             七. 异常时的解决办法 依据《环境检测基准书》VXX的规定进行处理。 八. 该规程的修订、废止 本规程的修订、废止由检验分析责任者起草，经品管部QA会签，由品质总责任者批准。 九. 附表 附表-1：表面微生物各单位具体采样位置 文件编号： 附表-2：（          ）洁净区微生物测试标准操作规程·记录 文件编号： 附表-3：（          ）洁净区微生物测试报告 文件编号：