中药化学实验指导

中药化学实验指导 中药化学是一门实践性非常强的学科，因此中药化学实验课是本门课程的重要组成部分。根据中 药化学教学大纲的要求，实验教学的主要目的是通过中药有效成分的提取、分离和鉴定等基本操 作技能的训练，培养学生分析问和解决问题的能力，从而训练严格的科学的工作态度。同时通 过实验可进一步巩固课堂所学的理论知识，使理论与实践密切结合。 在实验教学中，要求学生掌握浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流法、连续回流提取法、两相溶剂萃取法、沉淀法、结晶法、薄层色谱、纸色谱、柱色谱的基本操作技能。熟悉它们在中药化学成分 提取、分离、检识和鉴定中的应用。由于中药中所含化学成分复杂，一些有效成分含量较低等特 点，实验中着重训练常量、半微量成分的提取、分离及检识方法。使学生具有初步设计提取中药 中主要类型成分的能力。 《中药化学实验指导》分实验部分和附录部分两方面内容，实验部分收录有代表性的10个实验，每个实验包括六项内容：实验目的、实验原理、实验内容、实验工具、实验方法、注意事项、思 考题。实验部分所收录的内容超过本科教学大纲要求的实验学时数，供实验时选择。附录部分选 录了部分与实验相关的内容，供实验时参考。 本实验讲义适合中草药栽培与鉴定专业、制药工程及相关专业开设中药化学实验课时使用。 中药化学实验时间长，操作繁杂，所用溶剂和试剂品种多，而且用量较大。许多有机溶剂及 药品具有易燃、有毒、腐蚀性、刺激性和爆炸性等特点。在实验操作过程中又经常需要加热或减 压等操作，学生将接触各种热源和电器。如果操作不慎，易引起中毒、触电、烧伤、烫伤、火灾、 爆炸等事故。所以要求每个实验操作者，必须加强爱护国家财产和保障人民生命安全的责任心，严格遵守操作规程，树立严密的科学实验态度，提高警惕，消除隐患，预防事故发生。要求如下： 1、严格遵守实验室的规章及管理措施，执行实验纪律。 2、实验前要认真预习，明确实验目的、基本原理、要求、方法和步骤，明确注意事项，并认真写 好实验预习报告，经教师检查合格后，才能进行实验。 3、进出实验室要保持良好秩序，不准喧哗、打闹，不准打手机，不准吸烟、不准随地吐痰、乱抛 纸屑等杂物。做到“三定”即：定组、定位、定仪器。 4、实验前，必须认真听取教师讲解实验内容和要求，仔细观察教师的示范操作。实验开始时，首先要检查实验仪器、药品和器材是否齐全，若发现短缺或破损，应立即报告教师，给予补齐或 调换，未经许可，不得擅自动用仪器和药品。经指导教师检查同意后，方可开始做实验。 5、认真按照要求进行操作，严格遵守仪器设备的操作规程，实验中不准动用与本实验无关的仪器 设备，不得在实验室内做与本实验无关的事情。违反操作规程造成仪器设备及实验材料损坏者， 将酌情赔偿，并视情节轻重进行批评直到纪律处分。实验中如出现异常现象，应立即停止实验， 及时报告教师，在教师指导下妥善处理。不得擅自拆卸，严防事故，确保实验室的安全。 6、同学间要发扬团结友爱、协调一致的精神，认真、规范地完成实验任务。实验过程中，要积极 动手，严肃认真，仔细分析实验现象，详细实验数据和结果，规范地做好实验原始记录， 总结实验现象。经指导教师认可后，方可结束实验。重做、补做实验或做外的实验，须经 教师批准。 7、要爱护实验室里的一切设施和用品，注意节约水、电、药品和实验材料，没有用完的药品、材 料，要放到指定的容器或其它地方存放。要保持实验室的清洁卫生。实验产生的废液，须倒入 指定废液桶（缸）里，严禁倒入水槽，其它废物装入污物桶，集中倒入垃圾箱。 8、实验完成后，及时切断电源和火源，清洗有关器皿，整理教学仪器、药品和器材，并按要求摆 放整齐。严禁将实验器材和药品携带出实验室，一旦发现，严肃处理。若教学仪器有损坏，须 及时报告教师，并按学校有关赔偿规定执行。经教师许可后方可离开。 9、实验结束后，根据原始记录和实验现象，按教师要求，按时独立完成实验报告，交指导教师批 阅，数据和报告要求实事求是，不得抄袭、伪造和涂改，否则按不及格处理。 10、以上各条必须自觉遵守，违反者予以批评教育，情节严重者，依照学校有关规定进行处理。 1．外伤 及时取出伤口中的碎玻璃屑或固体物质，用蒸馏水冲洗后贴缚创可贴或涂擦碘伏，用消 毒纱布包扎。 2．中毒 如发生中毒现象，应迅速使中毒者撤离现场至通风良好的地方，解开衣领，松开腰带， 让其做深呼吸，轻者可慢慢恢复。较重者应饮服高锰酸钾（1?5000）或1%硫酸铜溶液后，压舌催 吐。呕吐后，再根据毒物性质不同，选择饮服鸡蛋清、牛奶、淀粉糊、桔子汁、咖啡碱、浓茶水 等。如发生昏迷或休克，应进行人工呼吸或输氧，并及时送往医院急救。 3．灼伤 如为火灼伤，忌水洗，可局部涂抹苦味酸、甘油、鸡蛋清、烧伤膏等。药物灼伤，应先 用大量水冲洗，再根据药物的性质，采用适宜的方法处理。如酸碱灼伤，先用大量水冲洗后，再 用3%碳酸氢钠或1%醋酸溶液蘸洗，并局部涂凡士林。如果试剂溅入眼内，先用大量水淋洗，再点 入可的松眼药水等。 4．触电 如有人发生触电事故，应迅速切断电源。触电轻微者可很快自行恢复，较严重者须进行 人工呼吸，并立即送医院急救。 实验报告是实验的总结，通过写实验报告，可以提高学生的分析能力，因此每个学生必须 独立完成实验报告，并要求学生对每个实验应该做到原理清楚，操作方法正确，数据准确可靠， 会简单处理和分析测试数据。要有自己的观点和见解，并加以讨论，实验报告要求书写工整。 一般实验报告应具有下列基本内容： 1、实验名称、实验日期、实验者及同组人员。 2、实验所用的仪器和设备的名称、型号，精度及量程等。 3、实验目的、原理、方法及步骤简述。 4、实验数据及其处理：实验数据应包括全部的测定原始数据，必要时以表格形式，列出数据的运 算过程，进行数据处理和分析。 5、试验结果讨论：根据实验所得到的结果及实验中观察到的现象，结合基本原理进行分析讨论。 试验一 薄层色谱„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„1 实验二 党参多糖的提取与含量测定„„„„„„„„„„„„„„3 实验三 黄芩苷的提取、分离和检识„„„„„„„„„„„„„„5 实验四 槐米中芦丁的提取、分离和检识„„„„„„„„„„„„7 实验五 秦皮中七叶苷、七叶内酯的提取、分离和鉴定„„„„„„10 实验六 大黄中游离蒽醌的提取分离与检识„„„„„„„„„„12 实验七 黄柏中盐酸小檗碱的提取、分离和检识„„„„„„„„„15 实验八 当归中总挥发油的提取及检识„„„„„„„„„„„„„17 实验九 八角茴香油的提取分离与检识„„„„„„„„„„„„18 实验十 中药化学成分预试验„„„„„„„„„„„„„„„„21 附 录 常用检出试剂的配制方法„„„„„„„„„„„„„„28 1．掌握薄层板的制备和使用方法 2．了解薄层色谱的原理及使用范围 薄层色谱是一种微量分析的分离过程，它将样品点在以玻璃板或铝、塑料等片材为载体的多 孔吸附剂薄层的固定相上, 利用混合物中各组分理化性质的差别，用流动相在特定的展开室中将 混合物中的组份推移到不同距离处，从而达到分离。在色谱展开整个过程中，样品的成分受到正反不同方向的力的作用： (1) 流动相利用毛细管力带着样品穿过固定相。 (2) 样品与固定相的相互作用是指组份在移行过程中由于偶极 - （诱导） - 偶极相互作用，氢键和范德华力的作用而产生不同程度的延缓、吸附、分散、离子交换和络合等分离机理。 由于样品组份与流动相和固定相之间的相互作用力程度不同，整个毛细管流动过程中分离运 动都在进行。基于这点，TLC系统（流动相和固定相）必须与样品很好地匹配。 用显色试剂处理，许多组份可在日光或紫外灯光下检视。色谱可用肉眼或使用光密度计和照 相机记录或影像系统方法来评价。 玻璃板（厚1～2mm）研钵 硅胶G 聚酰胺 （一）薄层板的制备 1．硅胶G板 取硅胶G2g（含煅石膏13%），加蒸馏水6ml，于研钵中沿一个方向充分研磨，搅拌成糊状后， 迅速倒在干燥玻璃板上铺平，摇动摊平，置水平位置，室温阴干后，于105?～110?下活化半小时，置干燥器内备用。（硅胶G也可自行配制，按85:15的比例称取硅胶和煅石膏，研匀即可）。薄 层板的厚度一般为0.25～0.5mm。 2．聚酰胺板 称取1.6g聚酰胺，加0.4g可溶性淀粉，加约7.0ml水，研磨3～5min，立即涂成0.25～0.30mm厚的薄层板，室温干燥后，在80?下干燥1h。置于干燥器中保存。 （二）点样 将试样用最少量展开剂溶解，用毛细管（0.5/1/2/3和5µl）蘸取试样溶液，在薄层板上点样。 常规的TLC薄层点状点样每次点0.5至5ul。点样时毛细管必须完全充满和完全排空，要以垂直方 向小心接触板面，不要损伤薄层，受损的薄层会导致溶剂不规律地流动而在色谱上产生失真的色 谱带。在样点上轻轻画出一条平行于玻璃板底边的细线。薄层色谱板载样量有限，勿使点样量过 多。 （三）样品点样位置 起点下缘的最小距离取决于溶剂量。两个起点之间的距离必须令平行移行的主成份不会相互 触及。点状点样时原点的直径应小于或等于3mm（高效板原点的直径应更小）,条带的长度由点样样品体积或样品的种类和相对于板的尺寸点样的数目来决定。到板侧边的距离必须足够大以避免 分离区失真变形。 （四） 层析 吹干样点，竖直放入盛有展开剂的有盖展开瓶中，板的浸入深度约为5mm，但切勿接触到样点。盖上盖子，展开。待展开剂上行到一定高度（由试验确定适当的展开高度），取出薄层板，再 画出展开剂的前沿线。 （五）显色，计算R值 f 挥发干展开剂，选择合适的显色方法显色。量出展开剂和各组分的移动距离，计算各组分的 相对移动值Rf。 Rf值为比移值，又称为阻滞因子，表示薄层板上组分的相对位置。 R＝a/b f （a：斑点中心与原始样点之间的距离 b：溶剂前沿与原始样点之间的距离） 1、薄层板使用的玻璃应清洁，干燥。 2、硅胶加蒸馏水搅拌要缓慢，勿使产生气泡，倒到玻璃板上要迅速铺平。 1. 了解党参多糖的理化性质 2. 掌握党参多糖的提取、分离及纯化方法 党参多糖为灰白色粉末，可溶于水，不溶于乙醇、丙酮、氯仿等有机溶剂。 1）仪器与试剂 分光光度计、索氏提取器、葡萄糖对照品、乙醚、石油醚、乙醇等。 2）样品的制备取新鲜洗净的党参根，阴干，60?烘3h，粉碎成粗粒，置干燥器中备用。 1）党参多糖的提取与精制 称取党参100g，置索氏提取器中，依次用石油醚(30?～60?)、乙醚和80%的乙醇回流提取5h。残渣挥干溶剂后，再以水回流提取4h。减压浓缩至一半体积，加入0.1%活性炭脱色，抽滤，滤液 加95%乙醇使含醇量达80%，冰箱静置过夜，滤过，残渣先后用无水乙醇、乙醚、丙酮洗涤数次， 得多糖粗品，用水—乙醇重结晶纯化数次，60?烘干，即得纯党参多糖。 2）标准曲线的制备 （1）标准葡萄糖溶液的配制： 精密称取105?干燥至恒重的葡萄糖对照品24.9mg，加适量水溶解，转移至250ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，配成浓度为99.6ug/ml标准葡萄糖溶液备用。 （2）5%苯酚溶液的配制： 取苯酚100g，加铝片0.1g和NaHCO30.05g，常压蒸馏，收集182?馏分10g，加蒸馏水200mL溶解，置棕色瓶内放冰箱备用。 （3）标准曲线的绘制： 精密吸取葡萄糖标准溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7ml置干燥试管中，依次加蒸 馏水使最终体积均为1.0ml，另取1.0ml蒸馏水作空白对照，对试管再加入5%苯酚溶液1.6ml，摇匀，迅速滴加浓硫酸7.0ml，充分摇匀，室温放置26min，于490nm处测定吸光度，绘制标准曲线。 3）换算因素的测定 精密称取干燥至恒重的党参多糖20.5mg，水溶解后定容到100ml容量瓶中，摇匀，作为多糖 储备液。精密吸取此溶液0.2ml，加水至1ml，照标准曲线制备项下的方法，测其吸光度值。按下 式： F=W/CD 式中，W为多糖重量(ug)，C为多糖液中葡萄糖的浓度(ug/ml)，D为多糖的稀释倍数，测得换算因子F值。 4）样品溶液的制备 精密称取党参各样品0.20g，用80%乙醇浸泡过夜，再于索氏提取器中用80%乙醇回流2h，残渣挥去溶剂后，断续用水回流2h，反复洗至250mL容量瓶中，定容，摇匀成为样品液。 5）稳定性实验 取样品溶液按标准曲线制备项下的方法测定吸光度，每隔1h测1次，测定5h内稳定性状况。 6）样品多糖含量测定 精密吸取各样品液1ml，于250ml容量瓶中,蒸馏水定容，摇匀，精密吸取此溶液1ml，按测定标准曲线同样方法测其吸光度值， 多糖含量%=CDF/W×100 式中，C为多糖样品溶液的葡萄糖浓度(ug/ml)，D为样品溶液的稀释倍数，F为换算因子，W为样品的重量(ug)，测得多糖平均含量。 1．掌握从黄芩中提取、精制黄芩苷的原理及操作方法 2．熟悉黄芩苷的主要性质和检识方法 黄芩苷 黄芩为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的根。具有消热燥湿，泻火解毒，止血，安胎等功效。含黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素等。黄芩苷为淡黄色结晶粉末，熔 点，223?。易溶于N，N-二甲基甲酰胺，吡啶中；可溶于碳酸氢钠、碳酸钠、氢氧化钠等碱性溶 液中，但在碱性溶液中不稳定，渐变暗棕色；微溶于热冰醋酸；难溶于甲酸、乙酸、丙酮；几乎 不溶于水、乙醚、苯、氯仿等。 根据黄芩苷分子中有羧基，在植物中以盐的形式存在，故可用水做提取溶剂。溶于水的黄芩 苷再在酸性条件下加热，变成有游离羧基的黄芩苷而沉淀析出。 试剂：40%氢氧化钠溶液 乙醇 10%盐酸 40%氢氧化钠溶液 活性炭 浓硫酸氯仿 甲醇 5%二氯氧锆溶液 2%柠檬酸溶液 盐酸 镁粉10%醋酸铅溶液 醋酸 正丁醇 1～5%三氯化铁乙醇溶液 装置：纱布 水浴锅 真空泵 抽滤瓶 布什漏斗 滤纸等 1．提取： 取黄芩粗粉100g加入500ml沸水，煮沸40min，纱布粗滤，药渣再加水约500ml，煮沸约30min，过滤，合并两次粗滤液，滴加浓盐酸至pH=1。水浴80?保温30min，待析出黄色沉淀之后，倾去 上清液，搅拌沉淀成为均匀的混悬液，滴加40%氢氧化钠溶液，边加边搅拌至pH=6～7，待沉淀全部溶解后再加入等体积95%乙醇，搅匀后于50?的水浴保温下迅速过滤，滤液用10%盐酸调pH=2～3，继续于50?的水浴保温30min，直到黄芩苷全部析出，放置过夜，抽滤，用蒸馏水洗至中性， 抽干，60?干燥，得粗制黄芩苷，称重。滤液减压回收乙醇。 2．精制 将粗制黄芩苷研细，加10倍量水混匀，滴加40%氢氧化钠溶液充分搅拌，调pH=6～7，使全部溶解，加活性炭适量搅匀，于水浴80?加热30min，过滤，滤液用10%盐酸调pH=1～2，加入等体积95%乙醇，50?水浴保温30min，至有沉淀物产生时取出，放置过夜。沉淀完全后，抽滤，得沉 淀，水洗沉淀至中性，并用少量95%乙醇洗沉淀，抽干，60?干燥，得黄芩苷精品，称重。计算得 率，收集滤液，回收乙醇。 3．黄芩苷的水解 取黄芩苷干品0.5g置三角瓶中，加蒸馏水10ml，在搅拌下滴加10ml浓硫酸，溶液剧烈发热，黄芩苷水解，得深黄色液体，放置20min，抽滤，将水解滤液在搅拌下倾入100ml冰水中，析出黄色固体，抽干，水洗沉淀至中性，加氯仿抽提沉淀，过滤氯仿回收至干，残留物再用甲醇重结晶， 得黄色针状结晶，即黄芩素精品。上清液含葡萄糖醛酸。 4．显色反应 （1）取黄芩苷少许，加乙醇溶解，加5%二氯氧锆溶液，观察颜色及荧光，再加2%柠檬酸溶液，观察颜色及荧光的变化。 （2）取黄芩苷少许，加乙醇溶解，加盐酸镁粉，观察现象。 （3）取黄芩苷少许，加乙醇溶解，加10%醋酸铅溶液，观察现象。 5．色谱鉴定 样品：黄芩苷、黄芩素 展开剂：正丁醇—醋酸—水（4:0.5:5） 显色剂：（1～5%）三氯化铁乙醇溶液 1．黄芩苷类的提取方法有哪几种？用沸水煎煮提取法有何优缺点？ 2．黄芩苷的水解条件和其他黄酮苷的水解条件有什么不同？ 1．以芦丁为实例学习黄酮类化合物的提取分离方法 2．掌握黄酮类化合物的主要性质及黄酮苷、苷元和糖部分的检识方法 3．掌握黄酮苷水解制取黄酮苷元的方法 4．学习薄层色谱在黄酮类化合物中的应用 1．槐米中主要成分的物理性质 为豆科植物槐Sophora japonica L.的花蕾，含芦丁(Rutin)、槲皮素(Quercetin)等多种成分。具清热，凉血，止血之功效。用于治疗肠风便血，痔血，尿血，血淋，崩漏，衄血，赤白痢 下，风热目赤，痈疽疮毒，并用于预防中风。 芦 丁 R=－葡萄糖－鼠李糖 槲皮素 R=H 芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，熔点：含三分子结晶水物177?～178?，无水物188?，溶解度见表1。不溶于乙醚、氯仿、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等有机溶剂，易溶于碱液且显黄色， 酸化后复析出，可溶于浓硫酸和浓盐酸且呈棕黄色，加水稀释复又析出。 表1 芦丁在不同溶剂中的溶解度 溶剂 水 甲醇 乙醇 吡啶 冷 1:8000 1:100 1:300 1:12 热 1:200 1:10 1:30 易溶 槲皮素为黄色结晶，两分子结晶水物熔点313?～314?，无水物熔点316?；可溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等溶剂，不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚。 2．提取分离原理 （1）利用芦丁可溶于热水，难溶于冷水的性质用热水进行提取，再利用芦丁在热乙醇和冷 乙醇中溶解度的差异进行精制； （2）利用芦丁可被稀酸水解，生成苷元和糖，通过纸色谱和薄层色谱进行检识。 1．试剂：95%乙醇 1%硫酸 氢氧化钡溶液鼠李糖 葡萄糖 正丁醇 醋酸 苯胺-邻苯二甲酸盐试 剂 芦丁标准甲醇溶液 槲皮素的标准甲醇溶液 80%乙醇 浓氨水或1%氯化铝醇溶液 10%ɑ-萘酚溶 液 0.5%硫酸盐酸 镁粉1%氯化铁醇溶液 2%二氯氧锆甲醇溶液 2．装置：回流装置 抽滤装置 层析缸 1．芦丁的提取 取槐米40g，稍研碎，置烧杯中加沸水200ml，煮沸10min，趁热用脱脂棉过滤，滤渣再加200ml水，煮沸10min，趁热过滤，合并滤液，放置。过滤，用少量水洗沉淀，抽干，沉淀即为芦丁粗品。 2．芦丁的精制 将上述沉淀称重后，加50倍热水溶解，趁热过滤，放置冰箱中，析晶，过滤，于60?左右干燥（或自然干燥一周），用95%乙醇或甲醇重结晶，得芦丁精品。 3．芦丁的水解 取芦丁精品0.1g，置250ml烧瓶中，加1%硫酸50ml，直火加热回流1h，冷却后过滤，用水洗滤纸，得槲皮素粗品，再用95%乙醇或甲醇重结晶，得槲皮素精品。 4．糖的纸色谱检识 取芦丁水解后的滤液10ml，水浴加热，加氢氧化钡溶液不断搅拌，中和至中性，滤去白色沉 淀，滤液浓缩至1～2ml，供纸色谱用。 支持剂：新华滤纸（中速） 对照品：鼠李糖和葡萄糖的标准水溶液 样品：水解液 展开剂：正丁醇-醋酸-水=4:1:5上层液 显色：苯胺-邻苯二甲酸盐试剂，喷后在105?烘6～10min 5．芦丁及槲皮素的聚酰胺色谱 对照品：芦丁、槲皮素的标准甲醇溶液 样品：自制1%芦丁、槲皮素甲醇溶液 展开剂：80%乙醇 显色：浓氨水或1%AlCl醇溶液显色后，日光或荧光灯下观察。 3 6．芦丁及其苷元的检识 取芦丁及槲皮素精品少量分别用40%甲醇溶解，做样品溶液。每次取上述试液1ml，分别置于小试管中，按下列方法比较苷及苷元的反应情况： （1）Molish反应：加10% ɑ-萘酚溶液1ml，振摇后斜置试管，沿管壁加0.5%硫酸，净置，观察液面交界处颜色。 （2）盐酸—镁粉反应：加少量镁粉，滴加浓盐酸，观察现象。 （3）氯化铁反应：加1%FeCl醇溶液1～2滴，观察现象。 3 （4）锆—柠檬酸反应：加入2%ZrOCl甲醇溶液3～4滴，观察颜色。 2 （5）氯化铝反应：加1%AlCl乙醇溶液3～4滴，观察荧光。 3 1．黄酮类化合物有哪些提取方法？ 2．分析芦丁在水解过程中观察到的现象。 1．掌握用溶剂法提取、分离香豆素类成分七叶苷、七叶内酯的操作技术 2．掌握香豆素类化合物的检识方法 秦皮为木犀科植物苦枥白腊树Fraxinus rhynchophylla Hance.、小叶白腊树Fraxinus bungeana DC.或秦岭白腊树Fraxinus paxiana Lingelsh.的树皮。 具有清热燥湿，收涩，明目 作用，用于热痢，泄泻，赤白带下，目赤肿痛，目生翳膜。含七叶树苷（aesculin）及其苷元七叶树内酯（aesculetin），并含白蜡树苷（fraxin）、白蜡树内酯（fraxetin）、紫丁香苷（syringin） 等。 七叶苷（C15H16O9?3/2H2O），白色针状结晶。无气味。味苦。在pH5.8时水溶液呈蓝色荧光。溶 于热水、热乙醇、乙醇、甲醇、吡啶及氯仿，微溶于冷水和乙醇，极微溶于乙醚。熔点204～206?。 七叶苷 七叶内酯为棱柱状结晶（冰醋酸）、叶状结晶，真空升华，熔点268～270?，溶于稀碱显蓝色荧光，可溶于热乙醇及冰醋酸，几乎不溶于乙醚和水。 2．实验原理 七叶苷、七叶内酯均能溶于沸乙醇中，可用沸乙醇将二者提取出来，利用二者在乙酸乙酯中 的溶解度不同进行分离。 1．试剂：95%乙醇 氯仿 乙酸乙酯 无水硫酸钠 甲醇 NaOH溶液 甲酸乙酯 盐酸盐酸羟胺甲醇溶液 1%NaOH甲醇溶液 重氮化对硝基苯胺 1%氯化铁溶液 甲苯 甲酸 2．装置：回流装置 硅胶-G板 层析缸 1．提取 称取秦皮粗粉300g，加95%乙醇连续回流2小时，过滤，药渣再加95%乙醇400ml，回流1h，再重复1次，3次滤液合并，减压回收乙醇至浸膏状，加蒸馏水80ml，加热溶解，过滤，待滤液冷却 后，用氯仿洗涤2次。 2．分离 经氯仿洗涤过的水溶液，于水域上加热除去残留的氯仿，待水溶液冷却后，用乙酸乙酯萃取， 每次50ml，共萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液，加无水硫酸钠适量，放置，减压回收乙酸乙酯至干， 残留物溶于温热甲醇中，再经适当浓缩后放置过夜，析出黄色结晶，滤出结晶，用甲醇反复重结 晶，即得七叶内酯。 将经乙酸乙酯萃取过的水溶液，置于水浴上浓缩至适当体积，放置，析出微黄色结晶，过滤， 用甲醇重结晶，即得七叶苷白色结晶。 3．显色反应 （1）观察荧光：取七叶苷和七叶内酯的甲醇溶液分别滴1滴于滤纸上，254nm的紫外灯内观察荧光的颜色，然后在原斑点上滴NaOH溶液，观察荧光变化。 （2）异羟肟酸铁反应：取七叶苷和七叶内酯，分别置于试管内，加入盐酸羟胺甲醇溶液2～3 滴，再加入1%NaOH甲醇溶液2～3滴，于水浴上加热数分钟，只反应完全，冷却，再用盐酸调至pH3～ 4，加1%FeCl3试液1～2滴，溶液呈红?紫红色。 4．薄层色谱鉴定 样品：七叶苷、七叶内酯及其对照品。 吸附剂：硅胶-G板。 展开剂：甲苯-甲酸乙酯-甲酸（5:4:1）。 显色剂：重氮化对硝基苯胺或于紫外灯254nm下观察荧光。 1．香豆素类成分通常可以采用哪几种方法进行提取？ 2．鉴别香豆素类成分的显色剂有哪些？显色原理是什么？ 1．掌握从大黄中提取和分离游离蒽醌的方法 2．掌握用pH梯度萃取法分离不同酸性的羟基蒽醌类化合物 3．掌握蒽醌类化合物的主要检识方法 4．熟悉蒽醌类化合物的色谱检识方法 5．了解用柱色谱法分离蒽醌类成分 1．主要化学成分的结构及性质 大黄为蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatum L.、唐古特大黄Rheum tanguticumMaxim. ex Reg. 和药用大黄Rheum officinaleBaill.的干燥根及根茎。大黄中含有大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚及其苷，总含量约3%～5%。 （1）大黄酸(rhein) 分子式CHO，分子量284.21。黄色针状结晶（升华法），mp.321～322?，1586 330?分解。能溶于碱水、吡啶，略溶于乙醇、苯、氯仿、乙醚和石油醚，几不溶于水。 （2）大黄素(emodin) 分子式CHO，分子量270.23。橙色针状结晶(乙醇)，mp.256～257?，15105 能升华。易溶于乙醇、碱水，微溶于乙醚、氯仿，几不溶于水。 （3）芦荟大黄素(aloe-emodin) 分子式CHO，分子量270.23。橙色针状结晶（甲苯），16105mp.223～224?。易溶于热乙醇，可溶于乙醚和苯，并呈黄色；溶于碱液呈红色；氨水及硫酸中呈 绯红色。 （4）大黄酚(chrysophanol) 分子式CHO，分子量254.23。橙黄色六方形或单斜结晶（乙15104 醇或苯），mp.196～197?，能升华。易溶于沸乙醇，可溶于丙酮、氯仿、苯、乙醚和冰醋酸，极 微溶于石油醚、冷乙醇，几不溶于水。 （5）大黄素甲醚(physcion) 分子式CHO，分子量284.26。砖红色单斜针状结晶，mp.203～16125 207?，溶于苯、氯仿、吡啶及甲苯，微溶于醋酸及醋酸乙酯，不溶于甲醇、乙醇、乙醚和丙酮。 2．实验原理 本实验是根据大黄中的羟基蒽醌苷经酸水解成游离羟基蒽醌，而游离羟基蒽醌不溶于水，可 溶于氯仿、乙醚等亲脂性有机溶剂的性质，用氯仿从水解液中将游离羟基蒽醌提取出来，再利用 各游离羟基蒽醌的酸性不同，采用pH梯度萃取法将其分离。其中大黄酚和大黄素甲醚的酸性十分 近似，用pH梯度萃取法难以分离，可利用两者的极性不同，采用硅胶柱色谱法进行分离。 1．试剂：20%硫酸 氯仿pH为8的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液 盐酸pH 9.9的碳酸氢钠-碳酸钠缓冲溶液5%碳酸钠氢氧化钠 乙醇10%氢氧化钠溶液0.5%醋酸镁乙醇溶液 石油醚（30～60?） 醋酸乙酯 甲酸5%醋酸镁甲醇溶液 2．装置：索氏提取器 硅胶板 层析缸 1．酸水解 取大黄粗粉10g，加20%硫酸水溶液100ml，水浴加热3～4h，抽滤，滤渣水洗至中性（便于下一步用碱性溶液萃取），于70?左右干燥。 2．总羟基蒽醌苷元的提取 滤渣置索氏提取器中（滤纸筒包扎），用乙醚150ml提取至近无色为止。得到乙醚提取液。 3．pH梯度萃取分离 （1）分离大黄酸 置乙醚提取液于分液漏斗中，以2.5%水溶液120ml分3次萃取，合并NaHCO3萃取液，酸化（用浓盐酸调pH至3），静置，至不产生沉淀为止，抽滤，得大黄酸沉淀。 （2）分离大黄素 经2.5%NaHCO水溶液萃取后的乙醚层，以2.5%NaCO水溶液120ml分3次萃323取，合并NaHCO萃取液，酸化（加浓盐酸调pH至3），主要得大黄素沉淀，尚含有少量大黄酚、大3 黄素甲醚和芦荟大黄素等。水洗沉淀物至中性，低温干燥后作为柱色谱样品。 （3）分离芦荟大黄素 经2.5% NaCO水溶液萃取过的乙醚层，继续以2.5%NaCO水溶液120ml2323分4次萃取，酸化（用浓盐酸调pH至3），静置，至不产生沉淀为止，抽滤，得芦荟大黄素沉淀。 （4）分离大黄酚和大黄素甲醚混合物 经2.5% NaCO水溶液萃取过的乙醚层， 再以0.5%NaOH23 水溶液100ml分4次萃取，至碱水层无色为止，合并NaOH萃取液，酸化的沉淀，为大黄酚和大黄 素甲醚混合物。 4．用硅胶柱色谱分离精制大黄素 （1）装柱 取100～200目的硅胶约10g，干法装柱。 （2）加样 将样品溶解于5ml石油醚（60～90?）—乙酸乙酯（7:3）中，用吸管吸取样品溶液于色谱柱柱床顶端。 （3）洗脱 用石油醚（60～90?）—乙酸乙酯（7:3）为洗脱剂，分段收集，每份10ml，用硅胶薄层板跟踪检查（被洗脱的成分先后顺序为：大黄酚和大黄素甲醚、大黄素、芦荟大黄素等）。 合并大黄素部分，适当浓缩，放置析晶，过滤，即得纯品大黄素。 5．检识 （1）碱液试验 分别取各蒽醌化合物结晶少许，置试管中，加1ml乙醇溶解，加数滴10%氢氧化钠试剂振摇，观察颜色变化，羟基蒽醌应显红色。 （2）醋酸镁试验 分别取各蒽醌化合物结晶少许，置试管中，加1ml乙醇溶解，加数滴0.5%醋酸镁乙醇试剂，观察颜色变化，羟基蒽醌应显橙、红、紫等颜色。 （3）薄层色谱检识 薄层板：硅胶G-CMC-Na 试 样：自制大黄酸、大黄素、芦荟大黄素的氯仿溶液 对照品：上述各成分对照品乙醇溶液 展开剂：石油醚（30～60?）—醋酸乙酯—甲酸（15?5?1）上层溶液 显 色：在可见光下观察，记录黄色斑点的位置。然后再用浓氨水熏蒸或喷雾5%醋酸镁甲醇溶液，斑点应显红色。 1．大黄中5种羟基蒽醌化合物的酸性和极性大小应如何排列？为什么？ 2．pH梯度萃取法的原理是什么？适用于哪些中药成分的分离？ 3．蒽醌类化合物及其苷的薄层色谱用什么作吸附剂、展开剂和显色剂？ 4．蒽醌类与醋酸镁显色反应的必要条件是什么？ 1．掌握从黄柏中提取小檗碱的原理及方法 2．掌握小檗碱的结构，熟悉小檗碱的检识方法 1．主要成分的结构及物理性质 黄柏为芸香科植物黄皮树Phellodendron chinense Schneid. 或黄檗Phellodendron amurense Rupr. 的干燥树皮。具清热燥湿，泻火除蒸，解毒疗疮的功效。用于湿热泻痢，黄疸， 带下，热淋，脚气，痿辟，骨蒸劳热，盗汗，遗精，疮疡肿毒，湿疹瘙痒。含小檗碱、药根碱、 木兰花碱、黄柏碱、N-甲基大麦芽碱、掌叶防己碱等。 小檗碱 小檗碱系季铵型生物碱，为黄色小针状结晶，易溶于热水及热醇；可溶于冷乙醇（1:100）； 能溶于冷水（1:20）；难溶于苯、丙酮、氯仿、乙醚及石油醚；能与氯仿、丙酮、苯在碱性条件下 形成加成物。 2．提取分离原理 利用小檗碱的盐酸盐在水中溶解度较小（1:500）,而硫酸盐的溶解度较大（1:30）的性质，首先将药材原料用稀硫酸溶液浸泡或渗漉，将药材中的小檗碱转变成硫酸盐溶出，然后再使其转 化为盐酸盐，结合盐析法，制得盐酸小檗碱。 1．提取：取黄柏粗粉50g，加入10倍量0.2%～0.3%硫酸水溶液浸泡24小时，用脱脂棉过滤，滤液加石灰乳调pH值到12，静置30min，抽滤，滤液用浓盐酸调pH到2～3，再加入滤液量6%～8%（W/V）的固体氯化钠，搅拌使其完全溶解，放置过夜，抽滤，得盐酸小檗碱粗品。 2．精制：将所有粗品（湿品）称重，放入烧杯中，加30倍量蒸馏水，加热至沸，趁热抽滤， 并趁热向滤液中滴加浓盐酸，调pH到2，放置过夜，滤取结晶，60?以下干燥，称重，得精制盐酸小檗碱。 3．检识： （1）纸色谱 支持剂：新华滤纸（中速） 对照品：盐酸小檗碱 样 品：精制盐酸小檗碱乙醇溶液 展开剂：正丁醇:醋酸:水=7:2:1 显 色：紫外灯下观察 （2）定性反应：取盐酸小檗碱少许，加蒸馏水溶解 ?取试液1ml，加锌粒少许，再加浓硫酸数滴，观察现象。 ?取试液1ml，加氢氧化钠试剂2～3滴，再加丙酮数滴，观察现象。 ?取试液1ml，滴加稀盐酸数滴，再加漂白粉少许，观察现象。 1．学会应用挥发油含量测定器提取药材中挥发油及含量测定的操作方法。 2．掌握挥发油的一般化学检识方法。 利用挥发油的性质，采用水蒸气蒸馏或共水蒸馏法提取挥发油。挥发油组成较复杂，大多是 由脂肪族、萜类和芳香族类以及他们的含氧衍生物所组成，因此可以利用各种官能团的特性检识 挥发油的组成。 硬质圆底烧瓶，挥发油测定器(0.1ml刻度)，回流冷凝管，电热套、玻璃珠 样品粉碎过2～3号筛，混合均匀。取供试品适量（约含挥发油0.5～1.0ml，20～30g），称定重量（精确至0.01g），置烧瓶中，加水300～500ml（或适量）与玻璃珠数粒，振摇混合后，连接 挥发油测定器与回流冷凝管。自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶 时为止。置电热套中或用其他适宜方置片刻，开启测定器下端的活塞，将水缓缓放出，至油层上 端到达刻度0线上棉5mm处为止。放置1小时以上，再开启活塞使油层下降至其上端恰与0线平齐，读取挥发油量，并计算供试品中挥发油含量（%）。 （1）将挥发油滴在滤纸上，加热观察现象。 （2）三氯化铁试剂：将挥发油少许溶于乙醇中，加入三氯化铁的乙醇溶液，如产生蓝、蓝绿 或绿色，表明有酚类成分存在。 （3）5%香草醛-浓硫酸试剂 挥发油提取的主要方法有哪些？各自的优缺点是什么？ 1．掌握挥发油的水蒸气蒸馏提取法。 2．学习挥发油的一般检识及挥发油中固体成分的分离。 3．掌握挥发油中化学成分的薄层点滴定性检识。 4．了解挥发油单向二次薄层色谱检识。 八角茴香为木兰科植物八角茴香Illicium verum Hook.f.的干燥成熟果实。分布于福建、 广东、广西、贵州、云南等省区。含挥发油4%～9%，一般约5%（果皮中较多）、脂肪油约22%（主要存在于种子中）及蛋白质、树胶、树脂等。挥发油中主要成分是茴香醚，约为总挥发油的80%～90%，冷时常自油中析出，故称茴香脑。此外，尚含莽草酸及少量甲基胡椒酚、茴香醛、茴香酸等。 茴香醚（脑） 甲基胡椒酚 茴香醛 莽草酸 茴香酸 1．茴香脑(anethole) 又称大茴香醚、茴香烯、茴香醚。分子式C10H12O，分子量148.21。为白色结晶，mp.21.4?，bp.235?。与乙醚、氯仿混溶，溶于苯、醋酸乙酯、丙酮、二硫化碳及 石油醚，几不溶于水。 2．莽草酸(shikimic acid) 又称毒八角酸。分子式C7H10O5,分子量174.15。无色针状结晶（甲醇—醋酸乙酯），mp.190～191?。在100ml水中可溶解18g，100ml无水乙醇中可溶解2.5g，几乎不溶于氯仿、苯、石油醚。 3．甲基胡椒酚(methylchavicol) 分子式C10H12O，为无色液体，bp.215～216?。 4．茴香醛 (anisaldehyde) 分子式C8H8O2，有两种状态：棱晶，mp.36.3?，bp.236?；液体，mp.0?，bp.248?。 5．茴香酸 (anisic acid) 分子式C8H8O3，为针状结晶，mp.184?，bp.275～280?。 本实验是水蒸气蒸馏法提取挥发油的通法。挥发油的组成成分较复杂，常含有烷烃、烯烃、 醇、酚、醛、酮、酸、醚等官能团。因此可以用一些检出试剂在薄层板上进行点滴试验，从而了 解组成挥发油的成分类型。挥发油中各类成分的极性互不相同，一般不含氧的烃类和萜类化合物 极性较小，在薄层色谱板上可被石油醚较好的展开；而含氧的烃类和萜类化合物极性较大，不易 被石油醚展开，但可被石油醚与醋酸乙酯的混合溶剂较好的展开。为了使挥发油中各成分能在一 块薄层色谱板上进行分离，常采用单向二次色谱法展开。 1．茴香脑的提取分离 取八角茴香50g，捣碎，置圆底烧瓶中，加适量水浸泡湿润，按一般水蒸气蒸馏法进行蒸馏 提取。也可将捣碎的八角茴香置于挥发油测定器的烧瓶中，加蒸馏水500ml与数粒玻璃珠，连接挥发油测定器与回流冷凝管，自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并使溢流入烧 瓶时为止。缓缓加热至沸，至测定器中油量不再增加，停止加热，放冷，分取油层。 将所得的八角茴香油置冰箱中冷却1小时，即有白色结晶析出，趁冷滤过，用滤纸压干。结 晶为茴香脑，滤液为析出茴香脑后的八角茴香油。 2．检识 （1）油斑试验 取八角茴香油适量，滴于滤纸片上，常温下（或加热烘烤），观察油斑是否 消失。 （2）薄层色谱板点滴反应 取硅胶G薄层色谱板1块，用铅笔按表画线。将挥发油试样用5～ 10倍量乙醇稀释后，用毛细管分别滴加于每排小方格中，再将各种检识试剂用滴管分别滴于各挥 发油试样斑点上，观察颜色变化。初步推测每种挥发油中可能含有化学成分的类型。 （3）挥发油薄层色谱单向二次展开检识 取硅胶G-CMC-Na薄层板（6cm×15cm）一块，在距底边1.5cm及8cm处分别用铅笔画起始线和中线。将八角茴香油溶于丙酮，用毛细管点于起始线上呈一长条形，先用石油醚（30～60?）-醋酸乙酯（85?15）为展开剂展开至薄层板中线处取出， 挥去展开剂，再放入石油醚（30～60?）中展开至接近薄层板顶端时取出，挥去展开剂后，分别 用下列几种显色剂喷雾显色。 ?1%香草醛-硫酸试剂：可与挥发油产生紫色、红色等。 ?荧光素-溴试剂：如产生黄色斑点，表明含有不饱和化合物。 ?2,4-二硝基苯肼试剂：如产生黄色斑点，表明含有醛或酮类化合物。 ?0.05%溴甲酚绿乙醇试剂：如产生黄色斑点，表明含有酸性化合物。 观察斑点的数量、位置及颜色，推测每种挥发油中可能含有化学成分的种类及数量。 1．通过观察馏出液的混浊程度来判断挥发油是否提取完全。最初的馏出液中含油量较多， 明显混浊，随着馏出液中油量的减少，混浊度也随着降低，至馏出液变为澄清甚至无挥发油气味 时，停止蒸馏。 2．提取完毕，须放冷，待油水完全分层后，再将油层放出，尽量不带出水分。 3．进行单向二次展开时，先用极性较大的展开剂展开至中线，然后再用极性较小的展开剂 展开。在第一次展开后，应将展开剂完全挥干，再进行第二次展开，否则将影响第二次展开剂的 极性，从而影响分离效果。 4．挥发油易挥发逸失，因此进行层析检识时，操作应迅速及时，不宜久放。 5．喷洒香草醛-浓硫酸显色剂时，应于通风橱内进行；用溴甲酚绿试剂显色时，应避免在酸 性条件下进行。 1．从八角茴香中提取分离茴香脑的原理是什么？ 2．利用点滴反应检识挥发油的组成优点是什么？ 3．单向二次展开薄层色谱法检识挥发油中各成分时，为什么第一次展开所用的展开剂极性 最好大于第二次展开所用的展开剂的极性？单向二次展开薄层色谱法有什么优点？ 1．掌握常见中药化学成分的鉴别原理及实验技术 2．能根据实验结果，判断检品中所含化学成分的类型 3．认真做好预试验记录，正确书写实验报告 本实验中的供试液（品），可根据各类成分鉴别实验的具体需要，选择有代表性的各类成分或 含相应成分的药材提取物，根据实验的具体要求进行准备。需要鉴别的主要药物成分的类型有： 生物碱、糖、苷、氨基酸、蛋白质、鞣质、黄酮、蒽醌、香豆素、强心苷、皂苷、挥发油、油脂、 有机酸等。 中药中所含的化学成分很多，在提取分离某种有效成分之前，一般可先通过简单的预试验， 初步了解药材中可能含有哪些类型的化学成分，以便选用适当的方法对其中有效成分进行提取、分离。 预试验通常分为二类：系统预试验和单项预试验。其基本原理是利用中药中各类化学成分在 不同溶剂中溶解度不同，分成数个部分，如水溶性、醇溶性及石油醚溶性等部分，再分别进行各 种定性反应。各成分的检识反应可在试管或滤纸片上进行，也可用色谱法，然后根据各化学反应 的现象进行分析判断，以了解试样中可能含有哪些类型的化学成分。 1．水溶性成分的检识 取中药粗粉5g，加50ml蒸馏水，浸泡过夜，或于50～60?水浴中温浸1小时，滤过，滤液供检识下列各类成分： （1）糖、多糖和苷类 1）Molish反应：取1ml供试液于试管中，加入1～2滴10%α-萘酚乙醇试剂摇匀，倾斜试管45?，沿管壁滴加1ml浓硫酸，分成两层。如在两液层交界面出现紫红色环，表明可能含有糖、多糖或 苷类。 2）斐林反应：取1ml供试液于试管中，加入新配制的4～5滴斐林试剂，在沸水浴中加热数分 钟，如产生砖红色氧化亚铜沉淀，表明可能含有还原糖。 将上述溶液中沉淀滤过除去，滤液加1ml 10%盐酸溶液，置沸水浴中加热水解数分钟，放冷后， 滴加10%氢氧化钠溶液调pH至中性，重复上述斐林反应，如仍产生砖红色氧化亚铜沉淀，表明可能含有多糖或苷类。 （2）氨基酸、多肽和蛋白质类 1）茚三酮反应：取供试液点于滤纸片上，喷雾茚三酮试剂后，吹热风数分钟，如呈紫红色或 蓝色，表明可能含氨基酸、多肽或蛋白质。 2）双缩脲反应：取1ml供试液于试管中，加1滴10%氢氧化钠试剂，摇匀，再加0.5%硫酸铜溶液，边加边摇匀，如溶液呈现紫色、红紫色或蓝紫色，表明可能含有多肽或蛋白质。 3）酸性蒽醌紫反应：取供试液点于滤纸片上，喷洒酸性蒽醌紫试剂，如呈现紫色，表明可能 含有蛋白质。 （3）酚类、鞣质类化合物 1）三氯化铁反应：取1ml供试液于试管中，加醋酸酸化后，加数滴1%三氯化铁试剂，溶液如呈显绿、蓝绿、蓝黑或紫色，表明可能含有酚性成分或鞣质。 2）三氯化铁-铁氰化钾反应：取供试液点于滤纸片上，干燥后，喷洒三氯化铁-铁氰化钾试剂，如立即呈现蓝色，表明可能含有鞣质。喷试剂后应立即观察，若放置一段时间，背景也能逐渐呈 蓝色。如欲使纸上的斑点保存下来，在纸片仍湿润时，用稀盐酸洗涤，再用水洗至中性，置室温 干燥即可。 3）香草醛-盐酸反应：取供试液点于滤纸片上，干燥后，喷洒香草醛-盐酸试剂，如立即呈不 同程度的红色，表明含有间苯二酚和间苯三酚结构的化合物。 4）明胶-氯化钠反应：取1ml供试液于试管中，加入1～2滴明胶-氯化钠试剂，如产生白色混浊或沉淀，表明可能含有鞣质。 5）咖啡碱反应：取1ml供试液于试管中，加入数滴0.1%咖啡碱溶液，如产生棕色沉淀，表明可能含有鞣质。 （4）有机酸类 1）pH试纸反应：取供试液，以广泛pH试纸测试，如呈酸性，表明可能含有有机酸或酚类成 分。 2）溴酚蓝反应：取供试液点于滤纸片上，喷洒0.1%溴酚蓝试剂的70%乙醇溶液，如在蓝色背景上产生黄色斑点，表明可能含有有机酸。如显色不明显，可再喷雾氨水，然后暴露于盐酸蒸气 中，背景逐渐由蓝色变成黄色，而有机酸的斑点仍为蓝色。 （5）皂苷类 1）泡沫反应：取2ml供试液于试管中，剧烈振摇2分钟，如产生大量持久性泡沫，再把溶液 加热至沸或加入乙醇，再振摇，如仍能产生多量持久性泡沫，表明可能含有皂苷。 2）溶血反应：取供试液点于滤纸片上，干燥后，加1滴2%红细胞试液，数分钟后，如在红色背景中出现白色或淡黄色斑点，表明可能含有皂苷。本实验也可在试管中进行。 2．醇溶性成分的检识 取10g中药粗粉，加100ml乙醇，沸水浴中回流提取1小时，滤过。滤液回收乙醇至无醇味， 取1/2量浓缩液，加10ml乙醇溶解，供甲项检识。剩余的浓缩液加10ml 5%盐酸，充分搅拌，滤过，滤液部分供乙项检识。酸水不溶部分，加10ml醋酸乙酯溶解，醋酸乙酯液用5%氢氧化钠溶液振摇洗涤2次（每次2～3ml），弃去碱水层。醋酸乙酯层再用蒸馏水洗1～2次，至水洗液呈中性，弃去水洗液，置于水浴上蒸发除去醋酸乙酯，残留物用15ml乙醇溶解，供丙项检识。 甲项检识 （1）鞣质类：同水溶性成分检识 （2）有机酸类：同水溶性成分检识 （3）黄酮类 1）盐酸-镁粉反应：取1ml供试液于试管中，加镁粉适量，摇匀，加2～5滴浓盐酸，即产生剧烈反应，如溶液呈红色或紫红色，表明可能含有黄酮类。 2）三氯化铝反应：取供试液点于滤纸上，晾干，喷雾三氯化铝试剂，干燥后，斑点呈鲜黄色， 如在紫外灯下观察，斑点有明显的黄绿色荧光，表明可能含有黄酮类。 3）氨熏反应：取供试液滴于滤纸片上或硅胶色谱板上，置氨气中熏片刻，斑点呈亮黄色，在 紫外灯下观察，斑点呈黄色荧光，表明可能含有黄酮类。 （4）蒽醌类化合物 1）碱液反应：取1ml供试液于试管中，加10%苛性碱试剂呈红色，如加酸使成酸性，则红色 褪去，表明可能含有蒽醌类。 2）醋酸镁反应：取1ml供试液于试管中，加数滴1%醋酸镁甲醇溶液，如溶液呈橙红色、紫色等颜色，表明可能含有蒽醌类。 （5）甾体和三萜类 1）醋酐-浓硫酸反应：取1ml供试液，置蒸发皿中水浴蒸干，加1ml冰醋酸使残渣溶解，再加1ml醋酐，最后加1滴浓硫酸，如溶液颜色由黄?红?紫?蓝?墨绿，表明可能含有甾体类成分。如溶液最终呈现红或紫色，表明含有三萜类成分。 2）三氯醋酸反应：取供试液滴于滤纸片上，滴三氯醋酸试剂，加热至60?，产生红色，渐变为紫色，表明含甾体类成分。加热至100?才显红色、红紫色，表明含有三萜类成分。 3）氯仿-浓硫酸反应：取1ml供试液，置于蒸发皿中水浴蒸干，加1ml氯仿使残渣溶解，将氯仿液转入试管中，加1ml浓硫酸使其分层，如氯仿层显红色或青色，硫酸层有绿色荧光，表明可 能含有甾体或三萜。 乙项检识 （1）生物碱类 1）碘化铋钾反应：取1ml供试液于试管中，加1～2滴碘化铋钾试剂，如立即有棕黄色至棕红 色沉淀产生，表明可能含有生物碱。 2）碘化汞钾反应：取1ml供试液于试管中，加2～3滴碘化汞钾试剂，如产生白色或类白色沉 淀，表明可能含有生物碱。 3）碘-碘化钾反应：取1ml供试液于试管中，加2～3滴碘-碘化钾试剂，如产生褐色或暗褐色 沉淀，表明可能含有生物碱。 4）硅钨酸反应：取1ml供试液于试管中，加1～2滴硅钨酸试剂，如产生黄色沉淀或结晶，表 明可能含有生物碱。 丙项检识 （1）强心苷类 1）碱性苦味酸反应：取1ml供试液于试管中，加数滴碱性苦味酸试剂，如溶液即刻或15分钟内显红色或橙红色，表明可能含有强心苷类。 2）间二硝基苯反应：取1ml供试液于试管中，加数滴间二硝基苯试剂，摇匀后再加数滴20%氢氧化钠，如产生紫红色，表明可能含有强心苷类。 3）冰醋酸-三氯化铁反应：取1ml供试液于蒸发皿中，水浴上蒸干，残留物加0.5ml冰醋酸-三氯化铁试剂溶解后，置于试管内，沿管壁加入1ml浓硫酸，使分成二层，如上层为蓝绿色，界 面处为紫色或红色环，表明可能含有2,6-二去氧糖的强心苷类。 4） 呫吨氢醇反应：取1ml供试液于蒸发皿中，水浴上蒸干，加呫吨氢醇试剂，置水浴上加 热2分钟，如溶液显红色，表明可能含有2,6-二去氧糖的强心苷类。 本实验也可取强心苷固体试样少许，加入1ml呫吨氢醇试剂振摇，置水浴上加热3分钟，如呈现红色，表明可能含有2,6-二去氧糖。 （2）香豆素、内酯类 1）异羟肟酸铁反应：取1ml供试液于试管中，加7%盐酸羟胺醇溶液及10%氢氧化钠溶液各2～3滴，置沸水浴上加热数分钟至反应完全，放冷，加1%盐酸调pH3～4，再加1～2滴1%三氯化铁试剂，如溶液为红色或紫色，表明可能含有香豆素或内酯类。 2）开环-闭环反应：取1ml供试液于试管中，加2～3滴1%氢氧化钠溶液，于沸水浴上加热3～4分钟，得澄清溶液，再加3～5滴2%盐酸使溶液酸化，如溶液变为混浊，表明可能含有内酯类化合 物。 3）重氮化偶合反应：取1ml供试液于试管中，加数滴5%碳酸钠试剂，于沸水浴上加热数分钟， 冷后，加数滴新配制的重氮盐试剂，如呈红色或紫色，表明可能含有香豆素类化合物。 4）间硝基苯反应：取供试液点于滤纸片上，喷洒2%间硝基苯试剂，待乙醇挥发后，再喷洒 2.5mol/L氢氧化钾溶液，置70～100?的恒温箱中加热，如呈紫红色，表明可能含有内酯类化合 物。本试验也可在试管中进行。 5）荧光反应：取供试液，点于滤纸片上或硅胶色谱板上，干燥后置紫外灯下观察，如呈现蓝 -绿色荧光，再喷洒1%氢氧化钾试剂，荧光加强，表明可能含有香豆素类化合物。 3．石油醚溶性成分的检识 取2g中药粗粉，加10ml石油醚，室温下浸渍提取2～3小时，滤过，滤液作下列成分检识。 （1）甾体、三萜类：同醇溶性成分甲项检识。 （2）挥发油、油脂类 1）油斑试验：取供试液点于滤纸片上，室温下挥去溶剂后，滤纸片上如留有油斑，表明可能 含有油脂或挥发油，若稍经加热，油斑消失或减少，表明可能含有挥发油，如油斑无变化，表明 可能含有油脂。 2）香草醛-浓硫酸反应：取供试液点于硅胶色谱板上，挥去石油醚，喷洒香草醛-浓硫酸试剂，如产生红、蓝、紫等颜色，表明可能含有挥发油、萜类和甾醇。 4．氰苷类成分的检识 （1）苦味酸钠反应：取1g试样，捣碎，置于试管中，加数滴蒸馏水使湿润，于试管中悬挂 一条苦味酸钠试纸（勿使试纸接触试管下部试样），用胶塞塞住试管，于50～60?水浴中加热15～30分钟，，如试纸由黄色变为砖红色，表明可能含有氰苷。 （2）普鲁士蓝反应：取1g试样，捣碎，置于试管中，加蒸馏水使湿润，立即用滤纸将试管 口包紧，并在滤纸上加1滴10%氢氧化钾溶液，于50～60?水浴中加热15～30分钟，再在滤纸上分别滴加10%硫酸亚铁试剂、10%盐酸、5%三氯化铁试剂各1滴，如滤纸显蓝色，表明可能含有氰苷。 1．本实验所用的供试品，可根据具体情况，灵活选择，但应包括试验材料项中所列出的成分， 提倡尽可能使用有代表性的化学对照品。 2．预试验反应完成后，首先对反应结果明显的成分进行分析判断，作出初步结论。而对某些 反应结果不十分明显的，应进一步浓缩处理供试液，再进行检识或另选一些试剂进行检识，有时 可配合色谱法检识。 3．判断分析各反应结果时，应综合考虑，例如异羟肟酸铁反应为阳性的有酯、内酯、香豆素 类等化合物，要配合香豆素的特有反应，将香豆素与其他酯类化合物进行区别。 4．预试验结果一般只能提供试样中可能含有哪些类型的化学成分，然后设计提取分离的工艺 方法，通过对提取分离得到的成分进一步检识，才能确定该药材中含有哪些成分。 （1）中药化学成分预试验有何实际意义？在判断预试验结果时应注意哪些问题？ （2）怎样才能提高预试验的准确性和灵敏度？在具体操作中应注意哪些问题？ 1．碘化铋钾试剂 取8g次硝酸铋溶于17ml 30%硝酸（相对密度1.18）中，在搅拌下缓慢滴加碘化铋钾水溶液（碘化钾 27g溶于20ml水中），静置过夜滤过，加蒸馏水稀释至100ml。 附：改良碘化铋钾试剂 甲液：取0.85g次硝酸铋溶于10ml冰醋酸中，加40ml水。 乙液：取8g碘化钾溶于20ml水中。 将溶液甲和乙等量混合，置棕色瓶中能保存较长时间，可作生物碱沉淀试剂用。如作色谱显 色剂用，需取上述混合液1ml与2ml醋酸、10ml水的比例混合即得。 2．碘化汞钾试剂 取1.36g氯化汞和5g碘化钾各溶于20ml水中，将两液混合后再加水稀释至 100ml。 3．碘-碘化钾试剂 取1g碘和10g碘化钾，溶于50ml水中，加热溶解，加2ml醋酸，再加水稀 释至100ml。 4．苦味酸试剂 取1g苦味酸，溶于100ml水中即得。 5．硅钨酸试剂 取5g硅钨酸，溶于100ml水中，用盐酸调pH2。 6．磷钨酸试剂 取20g钨酸钠、10g磷酸（相对密度为1.13）与水混合后，加热煮沸20分钟， 稍冷后加盐酸至酸性。 7．鞣酸试剂 取1g鞣酸，加1ml乙醇，溶解后加水至10ml。 1．糖的检出试剂 （1）斐林试剂 甲液：取6.93g结晶硫酸铜，加水至100ml。 乙液：取34.6g酒石酸钾钠及10g氢氧化钠，加水至100ml。使用时甲、乙两液等量混合。 （2）α-萘酚-浓硫酸试剂 甲液：取1gα—萘酚，加95%乙醇至10ml。 乙液：浓硫酸。使用时分别加入两液。 （3）氨性硝酸银试剂 取1g硝酸银，加20ml水溶解，小心滴加适量氨水， 随加随搅拌，至开始产生的沉淀将近全部溶解为止，滤过即得。 （4）苯胺-邻苯二甲酸试剂 取0.93g苯胺及1.6g邻苯二甲酸，溶于100ml水饱和的正丁醇中。 （5）α-去氧糖试剂 1）三氯化铁-冰醋酸试剂 甲液：取0.5ml %三氯化铁水溶液，加冰醋酸至100ml。 乙液：浓硫酸。使用时分别加入两液。 2）呫吨氢醇冰醋酸试剂：取10mg呫吨氢醇溶于100ml冰醋酸（含1%盐酸）中。 2．酚类检出试剂 （1）三氯化铁试剂：5%三氯化铁水溶液或乙醇溶液。 （2）三氯化铁-铁氰化钾试剂 甲液：2%三氯化铁水溶液。 乙液：1%铁氰化钾水溶液。应用时甲、乙两溶液等量混合或分别滴加。 （3）香草醛-盐酸试剂：取0.5g香草醛，溶于50ml盐酸中。 （4）重氮化试剂 甲液：取0.35g对硝基苯胺，溶于5ml浓盐酸中，加水至50ml。 乙液：取5g亚硝酸钠，加50ml水溶解。应同时取甲、乙两液等量在冰水浴中混合后备用。 本试剂系由对硝基苯胺和亚硝酸钠在强酸性条件下经重氮化作用而成。由于重氮盐不稳定， 故本试剂应在临用时配制。 （5）4-氨基安替比林-铁氰化钾试剂 甲液：2%4-氨基安替比林乙醇溶液。 乙液：8%铁氰化钾水溶液（或用0.9%4-氨基安替比林和5.4%铁氰化钾水溶液）。应用时分别加 入。 3．氰苷类检出试剂 （1）苦味酸钠试纸：取适当大小的滤纸条，浸入苦味酸饱和水溶液中，浸透后取出晾干，再 浸入10%碳酸钠水溶液内，迅速取出，晾干即得。 （2）亚铁氰化铁（普鲁士蓝）试剂 甲液：10%氢氧化钾水溶液。 乙液：10%硫酸亚铁水溶液。 丙液：10%盐酸水溶液。 丁液：5%三氯化铁水溶液。 1．盐酸-镁粉试剂：浓盐酸和镁粉。 2．三氯化铝试剂：2%三氯化铝乙醇或甲醇溶液。 3．碱式醋酸铅（或醋酸铅）试剂：饱和碱式醋酸铅（或饱和醋酸铅）水溶液。 4．醋酸镁试剂：1%醋酸镁甲醇溶液。 5．氢氧化钾试剂：10%氢氧化钾水溶液。 6．锆-柠檬酸试剂：甲液—2%二氯氧锆甲醇溶液。乙液—2%柠檬酸甲醇溶液。应用时分别加 入。 氢氧化钾试剂、醋酸镁试剂、碱式醋酸铅试剂参见黄酮类检出试剂5、4、3。 1．异羟肟酸铁试剂 甲液：新鲜配制的1mol/L羟胺盐酸盐的甲醇溶液。 乙液：1.1mol/L氢氧化钾甲醇溶液。 丙液：取1g三氯化铁溶于100ml1%盐酸中。应用时甲、乙、丙三溶液按次序滴加，或甲、乙 两溶液等量混合滴加后再加丙液。 2．内酯环的开环-闭环试剂 甲液：1%氢氧化钠水溶液。乙液：2%盐酸溶液。 3．重氮化试剂：参见酚类检出试剂（4）。 4．4-氨基安替比林-铁氰化钾试剂：参见酚类检出试剂（5）。进行3、4试验时，试样应先加 3%碳酸钠水溶液，加热处理后再分别滴加试剂。 5．间硝基苯试剂：2%间硝基苯乙醇液。 1．碱性3,5-二硝基苯甲酸试剂 甲液：2%3,5-二硝基苯甲酸甲醇溶液。 乙液：1mol/L氢氧化钾水溶液。应用前甲、乙两液等量混合。 2．碱性苦味酸试剂 甲液：1%苦味酸水溶液。 乙液：10%氢氧化钠水溶液。应用前甲、乙两液以9?1混合。 3．碱性亚硝酰铁氰化钠试剂 甲液：吡啶。 乙液：0.5%亚硝酰铁氰化钠水溶液。 丙液：10%氢氧化钠水溶液。 1．溶血试验 2%血细胞生理盐水混悬液：取新鲜兔血（由心脏或耳静脉取血）适量，用洁净小毛刷迅速搅 拌，除去纤维蛋白，用生理盐水反复离心洗涤至上清液无色后，量取沉降的红细胞，加入生理盐 水配成2%混悬液，贮存于冰箱内备用（贮存期2～3天）。 2．醋酐-浓硫酸试剂 甲液：醋酐。乙液：浓硫酸。 1．醋酐-浓硫酸试剂 参见皂苷类检出试剂2。 2．氯仿-浓硫酸试剂 甲液：氯仿（溶解试样）。乙液：浓硫酸。 3．三氯化锑试剂 取25g三氯化锑，溶于75g氯仿中（亦可用氯仿或四氯化碳的饱和溶液）。 4．五氯化锑试剂 五氯化锑和氯仿（或四氯化碳）按1?4于用前配制。 5．间二硝基苯试剂 甲液：2%间二硝基苯乙醇溶液。乙液：14%氢氧化钾乙醇溶液。用前等量混合。 6．三氯醋酸试剂 取3.3g三氯醋酸，溶于10ml氯仿中，再加入过氧化氢1～2滴。 7．香草醛-硫酸试剂 1%香草醛60%硫酸液或取0.5g香草醛溶解于100ml硫酸-乙醇（4?1）混合液中。 1．氯化钠-明胶试剂 取1g白明胶，溶于100ml 10%氯化钠水溶液中。 2．醋酸铅试剂 饱和醋酸铅水溶液。 3．咖啡碱等生物碱试剂 0.1%咖啡碱水溶液。 4．三氯化铁-铁氰化钾试剂 参见酚类检出试剂（5）。 1．双缩脲试剂 甲液：1%硫酸铜水溶液。乙液：10%氢氧化钠水溶液。 2．茚三酮试剂：取0.3g茚三酮，溶解于100ml正丁醇中，再加3ml醋酸即得。或取0.2g茚三 酮，溶于100ml丙酮或乙醇中。 溴酚蓝试剂 0.1%溴酚蓝乙醇溶液。 1．重铬酸钾-硫酸试剂 检查一般有机物。 显色剂：取5g重铬酸钾，溶于100ml 40%硫酸中。 薄层检查：喷洒后加热至150?至斑点出现。 2．荧光素-溴试剂 检查不饱和化合物。 甲液：0.1%荧光素乙醇溶液。 乙液：5%溴的四氯化碳溶液。喷甲液后，再用乙液熏。 喷洒后处理：喷洒荧光素溶液后，放置存有溴溶液的缸内，可于紫外灯下检查荧光，荧光素 与溴化合成曙红(无荧光)，而不饱和化和物则成溴加成物，保留了原有荧光；若点样量较多，则 呈黄色斑点，底板呈红色。 3．碘试剂 检查一般有机物，方法有二。 （1）将层析板放密闭缸内或瓷盘内，缸内预先放有碘结晶少许，大部分有机化合物呈棕色斑 点。 （2）层析板放碘蒸汽中5分钟（或喷5%碘的氯仿溶液），取出置空气中待过量的碘蒸气全部挥 发后，喷1%淀粉的水溶液，斑点转成蓝色。 4．硫酸试剂 显色剂：5%的浓硫酸乙醇溶液，或15%浓硫酸正丁醇溶液，或浓硫酸-醋酸（1?1）。 喷洒后处理：空气中干燥15分钟，再加热至110?直至出现颜色或荧光。