Orexins对小鼠内侧前额叶皮层神经元的兴奋作用

Orexins对小鼠内侧前额叶皮层神经元的兴奋作用 第三军医大学 硕士学位Orexins对小鼠内侧前额叶皮层神经元的兴奋作用 姓名:闫洁 申请学位级别:硕士 专业:神经生物 指导教师:胡志安 20080501 第三军医大学硕士学位论文 ,,,,,,,对小鼠内侧前额叶皮层神经元的兴奋作用冰 摘 要 ,,,,,,,(,,,,,, ,矛口,,,,,, ,)， 又称,,,,;,,,,,,(,,,,;,,,,,一,矛口,,,,;,,,,,一,)， 是一种主要来源于外侧下丘脑区(,,,,,,, ,,,,,,,,,,,; ,,,,，,,,)的小分子神经肽。,,,,,,,通过活化,蛋白耦联受体,,,,和,,,,发挥作用。尽管,,,,,,神经元局限于,,,及其邻近区域，但其纤维投射及受体分布却非常广泛，遍及大脑皮层、下丘脑、脑干等众多脑区。,,,,,,,参与机体一系列生理功能的调控，其中促进觉醒是其最重要的功能，新近研究还发现,,,,,,,与注意维持等前额叶功能有关。啮齿类动物内侧前额叶皮层(,,,,,, ,,,,,,,,,, ;,,,,,，,,,,)的边缘前区(,,,,,,,,; ,,,,，,,)在工作记忆、注意力等高级神经活动中具有重要地位，它同时也是觉醒系统的最终作用靶区。形态学证据明，内侧前额叶皮层接受来自,,,的,,,,,,能神经纤维，同时该区域也到,,,,,,受体。但是,,,,和,,,,在内侧前额叶皮层各亚区的分布特点，尚未见报道。 本室早期工作发现，,,,,,, ,通过,,,—,,,信号通路，抑制,，电流，从而兴奋急性分离的额叶皮层,、,区锥体神经元。另有研究表明，在第一体感皮层、第一运动皮层、初级视皮层等新皮层脑片上，,,,,,,,仅对,， ,亚层神经元具有突触后兴奋作用。然而，,,,,,,,是否能够作用于,,区各层次的神经元，目前尚不清楚。 本研究首先通过免疫组织化学染色方法观察,,,,,,两种受体,,,,和,,,,在小鼠前额叶皮层的分布;然后采用红外可视下脑片膜片钳全细胞结合生物素标记，以小鼠内侧前额叶皮层的,,区为研究对象，探究,,,,,,,对不同层次神经元兴奋性的影响，以及受体参与情况。藉此进一步揭示,,,,,,,调控前额叶皮层功能的途径。 ,(,,,,和,,,,在小鼠前额叶皮层的分布 免疫组织化学染色显示，,,,,,,受体免疫反应阳性(,,,,,, ,,;,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,，,,,—，,)神经元主要为锥体形态的细胞，胞体和突起均有着色。,,,,和,,,,阳性神经元的分布特点基本一致，在外侧前额叶皮层和额叶皮层,区(,,,,,,,;,,,,;,, ,,,, ,，,,,)主要集中于,、,，层，在前扣带区(,,,,,,,, ;,,,,,,,, ,,,,，,,)和,,区遍及，,,，层，以，，,，，，和,层密度最高，在边缘下区(,,,,,,,,,,; ,,,,，，,)则呈，本课题受国家自然基金资助(,,(,,,,,,,,) 第三军医大学硕士学位论文低密度散在分布。 ,(,,,,,, ,对边缘前区各层神经元的作用 电流钳记录显示，在,,区，,,，层均有,,,,,, ,的应答神经元，其中，，,，，，和,层神经元的反应率较高，分别为,,(,,,(,,,,,)和,,(,,,(,,,,,)。典型的应答反应表现为细胞膜去极化和动作电位发放频率增加。在,,,,,,, ,,浓度下，,,,,,, ,的兴奋作用呈剂量依赖性。当灌流液中加入,,,阻断突触前动作电位诱发的递质释放后，,,,,,, ,仍可引起神经元去极化(,,,)。以上结果表明，,,,,,, ,对,,区，,,，层神经元均具有突触后兴奋作用。 ,(,,一,,,,,,抑制,,,,,, ,的兴奋效应 在灌流液中加入,,一,,,,,,(,,,,特异性阻断剂)后，在,个应答神经元上，,,,,,,,不再引起任何反应，在另外,个应答神经元上，,,,,,, ,的作用被部分抑制(含,,一,,,,,,的,,,,中去极化:,(,,?,(,, ,,，正常,,,,中去极化:,,(,,?,(,, ,,，,,,，,,,(,,)。,,一,,,,,,完全或部分抑制,,,,,, ,的兴奋效应，表明,,,,介导了,,,,,, ,的作用，而大部分神经元上,,一,,,,,,不能彻底阻断,,,,,, ,引起的去极化，提示,,,,可能也参与了兴奋过程。 ,(,,,,,, ,与,,,,,, ,兴奋性的比较 ,,, ,,时，,,,,,, ,和,,,,,, ,引起的去极化分别为,(,,?,(,, ,,和,(,,?,(,,,,，无显著差异(,,,，,,,(,,);,,, ,,时，,,,,,, ,诱导去极化,(,,?,(,, ,,，与,,,,,, ,(,(,,?,(,, ,,)相比，亦没有显著差异(,,,,，,,,(,,);但,,, ,,时，,, ，显著高于,,,,,, ,,,,,,诱发去极化,,(,,?,(,, ,, (,(,,?,(,, ,,，,,,,，,,,(,,)。上述结果表明中低浓度下,,,,,, ,和,,,,,, ,的作用强度相近，而高浓度下,,,,,, ,的作用强于,,,,,, ,。鉴于,,,,对,,,,,, ,的亲和力强于,,,,,, ,，而,,,,对,,,,,,,和,,,,,, ,的亲和力相当，上述结果再次证明,,,,和,,,,均参与介导,,,,,,,的作用。此外，通过比较,,, ,,，,,, ,,和,,, ,, ,,,,,, ,引起的去极化，提示,,,,,,,的兴奋作用也呈剂量依赖性。 综上所述，本研究结果表明:第一，小鼠内侧前额叶皮层的,,区和,,区广泛表达,,,,和,,,,，，,,，层均分布有,,,—，,细胞，以，，,，，，和,层最密。第二，在,,区，,,,,,, ,与,,,,,, ,可通过,,,,和,,,,广泛兴奋，,,，层神经元，并且，，,，，，和,层细胞具有较高的反应率。 关键词:,,,,,,,;,,,,,,受体;内侧前额叶皮层;边缘前区;免疫组织化学染色;脑片膜片钳;高级神经活动;觉醒;昆明小鼠 , 第三军医大学硕士学位论文 ,,, ,,;,,,,,,, ,,,,;, ,, ,,,,,,, ,, ,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,, ,, ,,;, ,,,,,,;, ,,, ,,;,,,,,,;,,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,, , ,,, ,，,,,, ,,,,, ,, ,,,,;,,,,,—, ,,,一,，,,, ,,,,,, ,,,,,;,, ,, ,,, ,,,,,,, ,,,,,, ,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,; ,,,,(,,,)(,,, ,,,,;,,,, ,,,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,, ,, ,—,,,,,,,—;,,,,,, ,,;,,,,,,，,,,;, ,,, ;,,,,,,, , , ,,, ,,,,(,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,, ,,, ,,;,,,,,, ,, , ,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,，,,,,, ,,,,,;,,,,, ,,, ,,,,,, ,,;,,,,,, ,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,(,;;,,,,,,,,，,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,;,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,, ,,,,,,,,,,;,, ,,,;,,,,,(,,;, ,,,,,,;,,,, ,,,,, ,,,, ,,,,,,, ,,,, ,, ,,,,,,,,, ,,,, ,, ,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,(,,,,,,,,,,,,，,,,,, ,,,, ,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,,,, ,,,,,,, ,;,,,,,, ,,, ,,,, ,,,,,,,, ,, ,,;,,, ,,,,,,,(,,,,,,,,,,,;(,,),,,,，, ,,,, ,, ,,,,,, ,,,,,,,,,, ;,,,,,(,,,,),, ,,,,,,，,, ;,,,,;,, ,,,,,,,,, ,,,,,,, ,;,,,,,, ,,;, ,, ;,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,，,,, ,, ,, ,,, ,,,,, ,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,;,,,,;,, ,,,,,,, ,,,,,,,(，, ,,, ,,,, ,,,,, ,,,, ,,, ,,,, ,,;,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,;,,,,, ,,, ,,,,,,,,, ,,, ,,,,,;,,,,, ,,,, ,,, , ,,;,,,,,,，,,,,,,, ,,,, ,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,,,, ,, ,, , , ,,, ,,,, ,,,,,, ,,,, ,,,,,,( ，, ,,, ,,,,,,,, ,,,,，,, , ,,,,,, , ,,;,,,, ,,, ,;,,,, ,,,,, ,,,, ,,,, ,,,,,;,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,, ;,,,;,, ,,,, , ,,, ,(,, , ,,, ,,,)，,,, ,;,,,,,,,, ,, ,,,,,,—,,, ,,,,,,,,, ;,,;,,,, ,,, ,,,,,,,,,, ,, ,，;,,,,,,,，,,,,,,,,, ,,,,,,;, ,, ,,,,,,,;, ,,;,,,,,,, ,,,,;, ,, ,,,,,,, ,, ,,, ,,,(，, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,, ;,,,,,，,,,,,,,,,,,, ;,,,,,，,,,,,,, ,,,,,, ;,,,,, ,,, ;,,,,,,,, ;,,,,,，,,, ,,,,;, ,, ,,,,,,, ,,, ,,,,, ,,,, ,,,,,, ,,,,,,;,,, ,, ,,,,,,,, ,，, ,,,,,,,(,,,,,,,，,, ,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,;,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,, ,;,,,, ,, ,,,,,,,, ,，, ,, ,,,, ,,,,,,, ,, ,, ,,,,( ，, ,,, ,,,,,,, ,,,,,?,, ,,,,,,, ,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,, ,, ,, , , ,,, ,,,, ,, ,,;,,,, ,, ,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,( ,,,,,？,,,,,,， ,,,,, ,,,,,—;,,, ,,,;,—;,,,,,,;,,,,,,, ,,;,,,？,,，,, ,,,,,,,, ,,, ,,,色;, ,, ,,,,,,, ,, ,,,,,,, ,, ,,,,色,,,, ,,,,,, ,,,,, ,, ,,,,(,,, ,,,,,,, ,,;,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,, ,,,,,—,,;,,,;,, ,，,,, ,,,,,, ,,,, ,,,, ,,,,,,, ,,,, ,,,;,,, ,, ,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,, ,,;,,,,,(，, ,,,,,,,,，,, ,,, ,,,, , 第三军医大学硕士学位论文,,,,,,,,,,,, ,, ,, , , ,,, ,,,, ,,,, ,,,,,,,, ,, ,,, ,;,,,, ,, ,,,,,,,( ,(,,,,,,,,,,,, ,, ,,,, ,,, ,,,, ,, ,,, ,,, ，,,,,,,,,,,;,,,,,,,, ,,,,, ,, ,,,,,, ,,;,,,,,, ,,,,,,,, ,,,, ,, , , ,,, ,,,,,,,,,,,,,,, ,, , ,,,,,,, ,,,,,,, ,, ,,,(,,,, ,,,,,, ,,;,,,,,, ,,,,,,,,,;,,,,(,,,—，,);,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,，,,, ,,,, ,,,,, ,,, ,,,;,,,,, ,,,, ,,,,,,,(，, ,,,,,,,,,, ,,, ,,, ,,,,，,,,,,,,,,,,, ,,,,,;,,,,,, ;,,;,,,,,,,, ,, ,,,, ,,, ,,,, , ,,, ,，，,,,,,,, ,,,,,,,, ;,,,,,,,,(,,),,,, ,,, ,, ,,,,,，,,, ,, ,,, ,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,,,,,，,,,,,,,,,, ，，,，，， ,,, , ,,,,, ,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,, ,,, , ， ,,, ,，( ，, ;,,,,,,,， ,,,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,; 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,,,,,, ,,;,,,,,,; ,,,,,, ,,,,,,,,,, ;,,,,,; ,,,,,,,,; ,,,,; ,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,;,,,,,—;,, ,,,;,—;,,,,;,,,,,,,,,,,;,培,,, ,,,,,,, ,;,,,,,,;,, ,,;, 第三军医大学硕士学位论文 英文缩写一览表英文缩写 英文全名 中文全名,,,, ,,,,,,;,,, ;,,,,,,,,,,,, ,,,, 人工脑脊液,, ,,,,,,,, ;,,,,,,,, ,,,, 前扣带区,, ,;,,,, ,,,,,,,,, 动作电位,,, ,,;,,,, ,,;,,,, 弓状核,, ,,,,, ,,,,,,,,, 基底前脑,, ;,,,,,,,, ;,,,,, 扣带回皮层,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,; ,,;,,,, 下丘脑背内侧核,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,, 二甲基亚砜,,, ,,,,,, ,,,,, ,,;,,,, ,, ,,, ,,,,, ,,,,, 迷走神经运动背核,,, ,,,,,, ,,,,, ,,;,,,, 背缝核,,,, ,,,,,,, ,,,;,,,,,,(,—,，,,,,,,,,,, ,,,,)一 ,，,，,?，,?一,,,,,;,,,; ,;,,,,, ,,,,,,, ;,,,,;,, ,,,, , 额叶皮层,区,,, ,(,,,,,, ;,,,;,, ,,,, , 额叶皮层,区,,,,, ,一【,一,,,,,,,,,,,,〕,,,,,,,,,,— ,?一,,,,,,,,,,,,,,,,,,，, ,,,,,,,,,,; ,,,,, 边缘下区,, ,,;,, ;,,,,,,,, 蓝斑,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,; ,,,, 外侧下丘脑区,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,;,,,, 背外侧被盖核,,, ,,,,,, ,,,,, ;,,,,, 第一运动皮层,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,, ;,,,,, 内侧前额叶皮层,,, ,,;,,,, ,,,;,,, ,,,,,,,,,, 孤束核,,,, ,,,,,,一, ,,;,,,,, ,,,,,,一,受体,,,, ,,,,,,一, ,,;,,,,, ,,,,,,一,受体,,,—，, ,,,,,, ,,;,,,,,, ,,,,,,,,,;,,,, ,,,,,,受体免疫反应阳性,, , ,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,, 磷酸盐缓冲溶液 第三军医大学硕 士学位论文,,, ,,,,,,,,,, ;,,,,, 前额叶皮层,,, ,,,,,,,,,;,, ,,;,,,, 穹隆周围核,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,; ,,,, 下丘脑后区,,, ,,,,,,, ,,,,,, , 蛋白激酶,,, ,,,,,,,,; ,,,, 边缘前区,,, ,,,,,,,,,,,,, , 磷酯酶,,,,, ,,,,,, ,,,;,,,,,, ,,,, 额叶皮层内侧中央前区,,, ,,,,,,,,,,;,,,, ,,;,,,, 室旁核,, ,,,,, ,,;,,, 中缝核群,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,,,, ;,,,,, 第一躯体感觉皮层,,, ,,,,,,,,,,,,,,,, ,,;,,,, 结节乳头体核,,, ,,,,,,,,,,,, 河豚毒素,，,, ,,,,,,, ,,,,,, ;,,,, 初级视皮层,,, ,,,,,,,,,,,, ,,;,,,, ,, ,,,,,,,,,,,, 下丘脑腹内侧核,,, ,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,, 腹侧被盖区 , 第三军医大学研究生学位论文独创性声明 秉承学校严谨的校风和科研作风，本人申明所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证而使用过的材料，与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一 本人切相关责任。 论文作者签名: 第三军医大学研究生学位论文版权使用授权书 完全了解第三军医大学有关保护知识产权的规定，即:研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属第三军医大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为第三军医大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，可以采用影印、缩印或其他手段保存论文。 雾喜篓嘉篆耄,蛰 指导教师签名:亟巨整( 日 期: 刀驴,(厂(,( 第三军医大学硕士学位论文 ,,,,,,,对小鼠内侧前额叶皮层神经元的兴奋作用 (,上,,„一 刚 吾 ,,,,,,,(,,,,,, ,和,,,,,, ,)， 也称为,,,,;,,,,,,(,,,,;,,,,,—,和,,,,;,,,,,一,)，主要是由外侧下丘脑区(,,,,,,, ,,,,,,,,,,,; ,,,,，,,,)特定神经元产生的一种肽类递质;穹隆周围核(,,,,,,,,;,, ,,;,,,,，,,,)，下丘脑背内侧核(,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,;,,;,,,,，,,,)和下丘脑后区(,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,; ,,,,，,,,)也存在一定数量的,,,,,,能神经元胞体。,,,,,, ,和,,,,,, ,来源于同一前体分子，分别位于氨基酸序列的,,(,,片断和,,(,,片断。,,,,,,,能够结合于,,,,,,一,受体(,,,,,,一,,,;,,,,,，,,,,)和,,,,,,(,受体(,,,,,,一, ,,;,,,,,，,,,,)，,,,,和,,,,均为具有,个跨膜结构区的,蛋白耦联受体，其中,,,,主要与,蛋白中,。亚单位结合，而,,,,可与,“。和,或,。亚单位结合。,,,,,, ,和,,,,,, ,均可激活,,, ,、,,, ,;但,,,,与,,,,,,,结合的亲和力强于,,,,,, ,，而,,,,对,,,,,, ,和,,,,,, , 的亲和力相当【卜,,。,,,,,,神经元发出的纤维遍及整个中枢神经系统。在下丘脑，,,,,,,能纤维投射至弓状核(,,;,,,, ,,;,,,,， ,,,)、,援内侧核(,,,,,,,,,,,, ,,;,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,，,,,)以及室旁核(,,,,,,,,,,;,,,,, ,,;,,,,，,,,);在下丘脑以外的区域，如大脑皮层、边缘系统(主要包括海马和杏仁体)、丘脑、脑干和脊髓等，也广泛分布有,,,,,,神经末梢【,，,】。,,,,和,或,,,,同,,,,,,纤维末梢的分布一致【,,。大量研究表明，,,,,,,系统可能与一系列的生理功能调控有关，主要包括睡眠觉醒、能量稳态、神经内分泌等方面【, ,。 维持觉醒是,,,,,,,最为重要的生理作用之一。在体实验中，特异性的激活,,,,,,神经元，可促使动物由睡眠转为觉醒【,,;而,,,,,,神经元病理性减少、,,,,,,基因或,,,,基因敲除，则可导致发作性睡病【,。, ,,。人们很早就认识到，皮层觉醒是脑干上行网状激活系统、下丘脑、丘脑、以及基底前脑等多极觉醒系统共同作用的结果，其中主要包括蓝斑(,,;,, ;,,,,,,,,，,,)去甲肾上腺素能、背缝核(,,,,,,,,,,, ,,;,,,,，,,,),一羟色胺能、黑质多巴胺能、基底前脑(,,,,, ,,,,,,,,,，,,)胆碱能和结节乳头体核(,,,,,,,,,,,,,,,, ,,;,,,,，,,,)组胺能神经元。随着对,,,,,,系统的深入研究，人们逐渐发现上述众多觉醒系统均接受,,,,,,系统支配，在,,,,,,,的统一调控下激活皮层。因此，,,,,,,系统被认为是机体的“觉醒启动区”【,,?, ,,。 新近研究表明，,,,,,,系统还与学习认知、药物成瘾、精神疾病等高级神经活动 第三军医大学硕士学位论文有关。例如，在体实验证明,,,,,, ,可以促进动物的学习能力，强化记忆的巩固和再现„,,】。,,,,,,系统功能缺陷的小鼠，由吗啡和安非他明诱导的成瘾行为显著减少„,,】;在,,,,,,功能缺陷的发作性睡病患者中也发现类似现象:发作性睡病患者普遍接受长期精神兴奋剂治疗，但是这些患者很少出现药物成瘾及滥用【,,】。又如，在抑郁症患者中，可观察到脑脊液的,,,,,,,水平低于正常【,,】。目前，对于,,,,,,,在以上生理病理过程中的作用机制尚处于探索阶段，参与的脑区可能有前额叶皮层(,,,,,,,,,, ;,，,,,,，,,,)、海马、中脑腹侧被盖区(,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,，,,,)等„,,—,,,。 前额叶皮层是位于额叶的联合皮质，在哺乳动物高度发达，几乎占新皮层面积的,,,。前额叶皮层是皮层下觉醒调节系统的最终作用靶区，其电活动情况可反映机体觉醒一睡眠状态;同时，它整合感觉、知觉、运动等信息，进而指挥其它脑区，使整个中枢神经系统灵活而协调的运作，在认知、注意力、药物成瘾、情绪等高级神经活动中发挥重要作用【, ,,。由于大脑解剖结构的不同，灵长类动物的前额叶皮层功能，在啮齿类动物主要由内侧前额叶皮层(,,,,,, ,,,,,,,,,, ;,,,,，,,,,)负责。啮齿类动物的内侧前额叶皮层属于无颗粒型皮质，，,层(内颗粒层)不明显，,层(内锥体细胞层)相对较厚【,,?,,,。根据细胞构筑以及功能上的差异，它分为额叶皮层,区(,,,,,,, ;,,,;,, ,,,,,，,,,)、前扣带区(,,,,,,,, ;,,,,,,,, ,,,,,，,,)、边缘前区(,,,,,,,,,; ,,,,，,,)和边缘下区(,,, ,,,,,,,; ,,,,，，,)„,,?, ,,。其中,,区与灵长类动物的前额叶皮层背外侧区具有相似功能，参与注意维持、工作记忆等高级神经活动〔,,,。 现有研究表明，,,,,,,系统与前额叶皮层之间存在功能上的联系。,,,,,,不足的发作性睡病患者会出现注意力缺陷等前额叶皮层功能障碍症状，而且注意力缺陷与患者困倦没有关系„,,，,,,。通过鼻腔内给药的方法，给恒河猴,,,,,, ,，能够减轻睡眠剥夺后的认知功能障碍〔,,,。但是关于,,,,,,系统调控前额叶皮层的途径，迄今仅有少量报道。 形态学证据表明，大鼠下丘脑,,,,,,神经元发出的纤维广泛投射到前额叶皮层〔,】;而前额叶皮层也检测到,,,,和,,,,的,,,,及蛋白，这些结构为,,,,,,系统直接作用于内侧前额叶皮层奠定了基础〔,,，,,,。,,,,,等曾报道，,,,,,,能纤维在内侧前额叶皮层深层的分布较浅层密集，在,,区和，,区较,,,区和,,区密集【,,,。然而，,,,,,,的两种受体,,,,和,,,,在内侧前额叶皮层的分布情况，目前尚不清楚。 本室早期即已开始关注,,,,,,,对于大脑皮层的作用，发现,,,,,, ,可使急性分离的额叶皮层,区和,区(,,,,,,, ;,,,,;,, ,,,, , ,,, ,，,,, ,,, ,,,)锥体神经元出现去极化，使培养皮层神经元的胞内钙升高，提示,,,,,, ,对皮层细胞具有直接兴奋效应 , 第三军医大学硕士学位论文„,,?,,,。另据,,,,,等四报道，在第一躯体感觉皮层(,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,, ;,,,,，,,,)、第一运动皮层(,,,,,,, ,,,,, ;,，,,,,，,,,)、初级视皮层(,,,,,,, ,,,,,, ;,,,,,，,，,,)和扣带回皮层(;,,,,,,,, ;,,,,,，,,)的脑片上，,,,,,,,仅对,， ,亚层神经元具有突触后兴奋效应，提示,,,,,,,在新皮层的作用非常局限。但是,,,,,,,对内侧前额叶皮层,,区各层次神经元的作用仍未见报道。鉴于,,,,,,系统与内侧前额叶皮层在结构和功能上的密切联系，我们推测,,,,,,,在,,区可能存在更为广泛的直接作用。 因此，本实验利用免疫组织化学染色技术和膜片钳全细胞记录技术，以明确,,,,,,受体在前额叶皮层的分布特点，并在脑片上研究,,,,,,,对,,区各层神经元的兴奋效应，以及,,,,和,,,,参与介导,,,,,,,作用的情况，旨在进一步阐明,,,,,,系统调控前额叶皮层功能的途径。 ,, 第三军医大学硕士学位论文 第一部分 ,,,,和,,,,在，,、鼠 内侧前额叶皮层的分布 月,, 吾 ,,,,,,神经元主要位于,,,及邻近区域，尽管胞体分布局限，但其纤维却投射到大脑皮层、边缘系统、下丘脑、丘脑、脑干等众多脑区【,,。,,,,,,受体也广泛分布于中枢神经系统。原位杂交组织化学研究表明，大鼠,,,, ,,,,主要分布在海马、,,,、,,,、,,,、,,,和,,，,,,, ,,,,则主要分布在大脑皮质深层、隔核、海马、丘脑内侧核群、中缝核群(,,,,, ,,;,,,，,,)以及下丘脑的一些核团，如,,,、,,,等【,,】。免疫组织化学方法检测到的,,,,和,,,,蛋白分布情况与,,,,基本一致„,,，,,,。,,,,,,能纤维及受体的广泛分布为,,,,,,,参与调控机体多种生理功能提供了结构基础。 啮齿类动物的内侧前额叶皮层在功能上与灵长类动物的前额叶皮层相似，对于认知、情绪、执行等高级神经活动具有重要意义，同时也是与觉醒相关的重要脑区【,,，,,,。 该区域从背侧到腹侧，可分成,,,区、,,区、,,区和，,区，位于背侧的, ,,区和,,区主要与躯体运动和感觉有关，位于腹侧的,,区和，,区主要与执 行功能和情绪行为有关阮,,,。 目前已经证实,,,,,,系统与内侧.