3130xl 基因分析仪简明使用手册- 3130XL DNA 测序仪操作规程

3130xl 基因仪简明使用手册- 3130XL DNA 测序仪操作规程 3130XL DNA 测序仪操作规程 1、样品,DNA模板的纯度与用量,,(1)DNA纯度,OD260/OD280=1.6-2.0;,2,DNA用量,PCR产物,10-30ng; 质粒,双链DNA,150-300ng ; 引物浓度,3.2pmol/ul. PCR扩增,96?1min.?(96?10sec. ?50?5sec. ?60?4min.)×2、 25个循环?4?保温。 3、反应体系,10ul反应体系,BigDye0.5ul, sequencing Buffer(5 ×)1.8ul,模板,150-300ng(质粒),用去离子超纯水补充到10ul。 4、PCR产物纯化,96孔板,酒精/EDTA/NaAc法。,1,每管加入25ul 100%酒精,1ul 125mM EDTA,1ul 3M NaAc,轻微离心,室温放置15min.,,2,9600rpm离心15min,弃去上清夜。,3,每管加入50ul70%酒精,震荡,9600rpm离心15min弃去上清液.(4)重复第,3,步一次。,5,让残余的酒精在室温下挥发干,加入10ul Hi-Di Formamide轻离,95?变性4min,迅速置冰中冷却4min后,再上机电泳。 5、开机,,1,打开电瓶后开关,听到“咔”一声后,再按下前面“on”按纽,这时全部指示灯变绿。,2,打开计算机。,3,按下3130XL主机开关,左面第一个,,等中间指示灯由黄变绿后,表明开机完成。 6、编程。由Run 3130XL Data collect软件完成。 7、上样电泳,数据收集单96孔板,需电泳6个小时,双96孔板,需电泳12个小时。电泳时绿色指示灯连续闪烁,电泳完成后指示灯保持稳定。 8、关机,,1,关掉主机开关。,2,关掉计算机。,3,先按下电瓶前边“off”按纽,“beep”声过后,指示灯变绿后,关掉后部电源开关。 9、注意安全,保持室内卫生。操作时,必须戴手套和口罩,以免中毒,废物放入指定地点,以免污染环境。 生物技术中心 仪器管理人,贾涛 2006年10月15日