细胞计数实验报告

细胞计数实验报告 一、目的 培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好,所以要进行细胞计数 二、原理 细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。显微镜直接计数法是将一定稀释的菌体或孢子悬液注入血球计数板的计数室中,于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。因为计数板是一块特别的载玻片。其上由四条槽构成三个平台;中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半,每一边的平台上各刻有一个方格网,每个方格网共分为九个大方格,一个大方格分成16个中方格,每个中方格又分成25个小方格,无论哪种每个大方格中的小方格都是400个。每一个大方格边长为0.1mm,所以计数室的容积为0.1mm3。计数时,通常只用4个四周大方格内的细胞数即可。然后求出每个大方格的平均值,即得出一个大方格中的平均细胞数,再换算成lml菌液中的总细胞数。若设大方格中平均细胞数为N,菌液稀释倍数为M,则计算方法为: lml菌液中的总菌数=平均每个中格中菌的个数=10000xMxN=10000MN(个) 三、实验材料 普通显微镜、血球计数板、试管、吸管,微量移液管、细胞悬浮液 四、实验步骤 1、将血球计数板及盖片用擦试干净,并将盖片盖在计数板上。 2、将细胞悬液吸出少许,注射在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间。 3、镜下观察,计算计数板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算: 细胞数/ml=4大格细胞总数/ 4×10000 注意:镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团占10%以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液 五、实验结果 六、讨论与反思 注意多计数几次,求平均值 细胞要比较均匀的分布,四个大方格上的细胞数不应相差太多,否则重新混匀细胞悬浮液,再次计数