SQSTM血液基因组DNA提取试剂盒

SQSTM血液基因组DNA提取试剂盒 SMS/blood-4.3 TMSQS血液基因组DNA提取试剂盒 TM (SQSBlood DNA Isolation Kit) 主要用途:主要用于哺乳动物外周血基因组DNA的提取，也可以用于从鸟类、两栖类或更低级的动物血液中提取高质量的基因组DNA。。 主要特点: 本试剂盒特别适合于从300,1000微升外周血中分离基因组DNA，整个操作过程所需时间少于30分钟，试剂盒的试剂组成中不含酚)氯仿)异戊醇等毒性或刺激性的试剂,所提取的DNA OD260/280为1.7-1.9，可用于PCR、酶切、测序、文库筛选、连接和转化、Southern杂交等下游实验。 保存条件:所有试剂可室温存放一年以上。 预计产量:5-15μg/300μl外周血 试剂盒组成: Contents 100 reactions 50 reactions 红细胞裂解液(RBC Lysis Buffer) 75ml*2 75ml 白细胞裂解液(WBC Lysis Buffer) 60ml 30ml 去蛋白液(PB Buffer) 20ml 10ml 保存液(Elution Buffer) 15ml 10ml 说明书 一份 一份 实验准备: 请自备100%异丙醇、70%乙醇和TE(PH8.0)溶液。 实验操作步骤 1( 首先在1.5ml 的离心管中装入900μl RBC Lysis Buffer， 加入300μl 的外周血,混和均匀，于室温下孵育3-10分 钟(在此期间翻转离心管10次以上。血液样品加入RBC Lysis Buffer孵育5分钟后会变成较透明的混合液,对于新鲜抽 取的血样可以适当延长孵育时间至15分钟。) 2( 13000-16000rpm离心1分钟，小心移弃上清液,留下可见的白细胞沉淀层和10-20μl的残液。用枪头上下多次混匀或 于涡旋混合器上猛烈振荡离心管约10秒钟，确保残液中的白细胞沉淀层充分悬浮。(如不能保证沉淀充分悬浮,可适当 加入50-100μl的TE(PH8.0)缓冲液悬浮沉淀。) 3( 加入300μl WBC Lysis Buffer至悬浮细胞中，快速振荡离心管20秒以上,以充分裂解细胞,室温放置5-10分钟(适 当延长该操作步骤中的细胞裂解的时间可有效提高DNA得率)。 4( (可选)加入1.5μl RNA酶溶液(浓度为10 mg/ml),翻转试管25次,混合样本,于37?孵育30分钟,将样品冷却到室温。 (通常进行300微升血样DNA提取时不必对样品进行RNase处理,若选择对样品进行RNase处理,处理结束后确保将样品 降至室温)。 5( 加入100μl PB Buffer, 于涡旋混合器上猛烈振荡离心管30秒以上,使溶液充分混匀,此时会出现红褐色的块状蛋白沉 淀物(剧烈震荡不会导致DNA断裂) 。 6( 13000-16000rpm离心5分钟，将含有DNA的上清液移入一个干净的1.5ml 的离心管中(注意不可搅动蛋白沉淀层),加入 300μl 100%异丙醇。翻转离心管约50次,混合样品。此时DNA在溶液中呈现为一条白色的絮状物。 7( 13000-16000rpm离心2分钟, 此时DNA在离心管的底部形成肉眼可见的白色点状沉淀,仔细弃净上清液,加入700μl 70% 乙醇,翻转试管数次,以充分洗净DNA层。 8( 13000-16000rpm离心1分钟,仔细弃净乙醇(注:DNA环可能松散,因此务必小心) 。于空气中放置至乙醇完全挥发,注意 不要使沉淀过于干燥,以免DNA难以溶解。 9( 加入50 -200μl保存液(Elution Buffer)或灭菌的双蒸水,溶解沉淀,可以置于65?水浴5分钟以加速溶解。于4?贮 存DNA,若长期保存,则应置于-20?或-80?。 SMS/blood-4.3 注意事项 1) 血液类型可以是全血、血凝块和白细胞，可以是新鲜血，也可以冻存的抗凝血，可以是哺乳动物，也可以是鸟类、 两栖类或更低级的动物的血。注意，如果是从鸟类、两栖类或更低级的动物血中提取DNA，因其血液红细胞中有核 血液用量不要超过10ul，可直接加入300 ul红细胞裂解液后按正常步骤操作。 2) 血液保存:一般情况，在2-8?下血液可有效保存6-7周，-20?下可有效保存3个月。但为了保证提取DNA的质量， 建议最好使用新鲜的保存时间在1周左右的血液为宜。 3) 血液样品应避免反复冻融，或保存时间超过3个月，否则会导致DNA链的短裂和降解。进行冻存血样DNA抽提时，需 将冻存血样于37?水浴2分钟充分溶解后立即置于冰上，以确保DNA的完整性及得率。 4) 血液的来源有时会影响DNA的得率，患有使血细胞减少的病症病人血样，其DNA得率很低甚至完全提不出来。如再生 障碍性贫血、急性白血病、骨髓增生异常综合症、脾亢、自身免疫性疾病等。 5) 样品用量: 300微升血样为样品的最适提取量,若欲提取的血液样品超过300微升,可按比例适当增加其他溶液的 加入量,通常情况下,血样)RBC Lysis Buffer)WBC Lysis Buffer)PB Buffer、异丙醇的比例为3:9:3:1:3。 广州市珀尔生物科技开发有限公司 生产地址,深圳市龙岗区龙坪西路32号东坪兴创新科技园4楼 销售服务中心, 广州市广州大道北云景国际商务中心云峰大厦401B 电话, 86-20-87207420 传真, 86-20-87207439 E-mail,market@pearlbio.com