(组织、尿样)莱克多巴胺快速检测试剂盒说明书

(组织、尿样)莱克多巴胺快速试剂盒说明书 瑞 森 生 物 以 领 先 技 术 提 供 优 质 服 务 RS—RAC—10 广州瑞森生物科技有限公司 莱克多巴胺,Ractopamine,快速检测试剂盒说明书 【原 理】 所需仪器:微孔酶标仪、氮气吹干装置、打印机、均质器 、 振荡器、离心机、恒温箱、天平(感量0.01g)、本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测猪尿和猪肝等样 刻度移液管、微量移液器(单道20µl-200µl、本中的莱克多巴胺，在微孔条上预包被上偶联抗原，利用抗 100µl-1000µl、多道250µl) 原与抗体的特异性免疫化学反应的原理来进行的，样本中的 所需试剂:氢氧化钠、乙酸乙酯、浓HCl、磷酸二氢钾、乙莱克多巴胺和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗莱克多巴胺 腈、 抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样品中的莱克多 【样本前处理】 巴胺含量与样品的吸光度值呈反比，与标准曲线比较即可得 出样本处理前须知:莱克多巴胺含量。 (1)实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要【试剂盒组份】 更换吸头。 (2)实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对1、 酶标板:8孔/条，12条/板 实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。 2、 莱克多巴胺标准溶液(1ml/瓶): 0ppb、0.1ppb、0.3ppb、 尿样、血清样品的处理 0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb 3、 酶标记物…………………………………12ml 清亮尿样或血清直接测定，如尿样或血清浑浊须过滤或4、 抗体工作液 ………………………………7ml 离心10min(15?，4000r/min)直至清亮，暂不使用样本应5、 显色剂A …………………………………7 ml 冷冻保存，但避免反复冻融。 6、 显色剂B …………………………………7 ml 组织样品(包括肌肉、肝脏和肾脏)前处理(稀释倍数1) 7、 终 止 液 …………………………………7 ml 1、 称2?0.05g组织，加入6ml乙腈-0.1MHCl水溶液 (体8、 20倍浓缩洗液 ……………………………50ml 积比84:16)。 9、 使用说明书 ………………………………1 份 2、 振荡10min,室温4000r/min以上离心10min。 10、封板膜: …………………………………1张 3、 取上清3ml，加入2ml 0.1M NaOH，加入6ml乙酸乙酯，11、封口袋:……………………………………1 个 振荡10min，室温4000r/min 以上离心10min。取全部 上清于50?氮气或空气吹干。 【试剂盒技术指标】 4、 加入1ml三蒸水复溶，取50µl进行分析。 试剂盒灵敏度: 0.1ppb 饲料样品的处理(稀释倍数11) 样本检测下限: 1、 称 2 克饲料样品，加入2mL 1M盐酸。 尿样、血清 ……………………………………0.1ppb 2、 加入 18mL 双蒸去离子水，混匀，涡旋3分钟。在摇组 织 ……………………………………0.1ppb 床震动15分钟。 饲 料 ……………………………………10ppb 3、 在 2000rpm下离心20分钟。 交叉反应率: 4、 取出上清液加入1mL 1M 氢氧化钠，用盐酸调整pH值化合物名称 %交叉反应性 至7-9 之间。 莱克多巴胺 ……………………………………100 5、 在 2000rpm下离心20分钟，取上清液50µl进行检测。 沙丁胺醇 ……………………………………<0.01 【检测程序】 克伦特罗 ……………………………………<0.01 1、 使用前将试剂盒置于室温(20-25?)平衡30min以上，卡布特罗 ……………………………………<0.01 注意每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的酶回收率: 标板微孔条插入框架中，将不用的微孔条放入自封袋，尿样、血清 ……………………………95%?15% 保存于2-8?不要冷冻; 组 织 ………………………………95%?15% 2、 编号:将样品和标准品对应微孔按序编号，每个样品和饲 料 ………………………………95%?15% 标准品均需做2孔平行; 批间、批内变异系数:CV?10% 【 所需仪器和试剂】 瑞 森 生 物 以 领 先 技 术 提 供 优 质 服 务 RS—RAC—10 往酶标板微孔中加入标准溶液或试样液50µl/孔，然后3、5、 室温低于20?或试剂及标本没有回到室温(20-25?) 加入莱克多巴胺抗体工作液50µl/孔，用盖板膜封板，会导致所有标准的OD值偏低。 37?反应40min。 6、 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会伴随着出4、 倒出孔中液体，将酶标板倒置在吸水纸上拍打，去除孔现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍 中液体。加入250µl/孔稀释后洗液(将20×浓缩洗液干后应立即进行下一步操作。 用蒸馏水稀释20倍)，15s后倒出孔中液体，用吸水纸7、 混合要均匀，否则会出现重复性不好的现象。 拍干，如此重复操作共洗板5次。 8、 反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。 5、 酶标记物:加入酶标记物100µl/孔，用盖板膜封板，37?9、 不要使用过了有效日期的试剂盒，稀释或搀杂使用会引 反应20min。取出酶标板，如前述洗板5次; 起灵敏度、OD值的变化。不要交换使用不同批号的盒6、 显色:每孔加入A、B显色剂各50µl，轻轻振荡混匀，中试剂。 37?避光显色10min; 10、 不用的微孔板放进自封袋重新密封;标准物质和无色的7、 测定:每孔加入终止液50µl，轻轻振荡混匀，设定酶标发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。 仪于450nm处(建议用双波长450/630nm检测)，测定11、 显色液若有任何颜色明变质，应当弃之。0标准的吸 每孔吸光度值(OD值)。 光度值小于0.5时，表示试剂可能变质。 12、 【规 格】 96T 【结果判定】 1、定性判定: 13、 【贮 藏】 2,8?，避光保存 用样品的平均吸光度值与标准值比较即可得出样本所14、 【有 效 期】 一年 (有效期及批号见包装盒) 含莱克多巴胺浓度范围(ng/ml)。假设样品1的吸光度值为 0.313，样品2的吸光度值为1.032，标准液吸光度值分别是:15、 【生产企业】 广州瑞森生物科技有限公司 0ppb为1.892;0.1ppb为1.501;0.3ppb为1.175;0.9ppb为 16、 【地 址】 广州市番禺市新路新水坑6号B座5楼 0.751; 2.7ppb为0.421; 8.1ppb为0.198。则样品1的浓 度范围是1.35ppb-4.05ppb;样品2的浓度范围是17、 【电 话】 020,34697803 0.15ppb-0.45ppb。(再乘以相应的稀释倍数) 18、 【传 真】 020,34697836 2、定量判定: 所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值 (B)除以第一个标准(0标准)的吸光度值(B0)再乘以 100%，即百分吸光度值。 B 百分吸光度值(%), ×100% B0 B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值 B0—0ng/ml标准溶液的平均吸光度值 以标准品百分吸光率为纵坐标，以莱克多巴胺标准品浓 度(ng/ml)的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本 的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对 应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中莱克多巴胺实 际浓度。 若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样品 的准确、快速分析。 【注意事项】 1、 用前将所有试剂温度回升至室温20-25?。 2、 用之后立即将所有试剂放回2-8?冰箱。 3、 在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一 致性，仔细按照推荐的洗板顺序操作是ELISA测定程序 中的要点。 4、 所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜封住微 孔板。