DNA电泳的基本原理
DNA电泳是基因工程中最基本的技术,DNA制备及浓度测定、目的DNA片段的分离,重组子的酶切鉴定等都需要电泳完成。根据分离DNA大小及类型的不同,DNA电泳可分为以下两种: 1、聚丙烯酰胺凝胶电泳适合分离1kb以下的片段,最高分辨率可达1bp,也用于分离寡核苷酸,在引物的纯化中也常用此种方法进行纯化,也称PAGE纯化。
2、琼脂糖凝胶电泳可分离的DNA片段大小因凝胶浓度不同而异,胶浓度为0.5~0.6%的凝胶可以分离的DNA片段范围为20bp~50kb。电泳结果用溴化乙锭(EB)染色后可直接在紫外下观察。并且可观察的DNA条带浓度为纳克级,而且整个过程一般1小时即可完成,由于该方法操作简单快捷,在基因工程中较为常用。
利用DNA在泳动时的分子筛效应和电荷效应,可达到分离混合物的目的。DNA在高于其等电点的溶液中带负电,向阳极移动,其迁移速率与其相对分子量成反比。
DNA电泳一般选用TAE缓冲液,其电泳的时间较快,成本较低。