胃泌素17检测试剂盒（免疫荧光层析法）.产品技术要求（G-17）

医疗器械产品技术要求胃泌素17测定试剂盒（免疫荧光层析法）江西健伟生物科技有限公司样本编号健伟测量程序企业选定测量程序116.2915.99230.9531.25324.2723.30425.5626.66517.2616.85615.3915.49720.3919.7982.282.37920.1219.221045.0844.391119.1918.381239.8039.351324.9325.341421.5621.251541.4239.61165.035.031710.3310.301811.1511.181941.2642.662035.4733.98213.923.74222.912.98233.613.482419.6619.92258.748.76267.617.622743.3141.692820.5519.652920.2420.313018.1318.683136.1334.533226.0226.423344.8746.94346.076.093524.0723.873637.4438.993734.2035.523846.0548.283933.2932.764047.4648.44图1：40例血清样本结果线性回归分析图线性回归方程为y=1.0091X-0.24,R2=0.9956,说明两者具有互换性。量值从公司工作校准品传递至制造商常设的测量程序本企业生产的G-17工作校准品，浓度为0.49pmol/L、12.76pmol/L.01pmol/L.37.53pmol/L>48.96pmol/L,用我司的胃泌素17检测试剂盒（免疫荧光层析法）和配套的江西健伟生物科技有限公司生产的川-98荧光免疫分析仪对工作校准品进行检测，得到的荧光信号值和工作校准品的浓度拟合校准曲线。将上述校准曲线作为胃泌素17检测试剂盒（免疫荧光层析法）的校准曲线刻录到ID卡中。ID卡批号与该产品批号相同。量值从制造商常设的测量程序传递至公司质控品用已校准的干式荧光免疫分析仪和同一批胃泌素17测定试剂盒（免疫荧光层析法）测定质控品，质控品溯源至工作校准品。经5次及以上反复测定，对质控品进行赋值。要求每次实验3个样本点的计算浓度变异系数（CV）小于10%oG-17产品检测质控品检测结果编号测定结G-17质控品1G-17质控品2测定结果14.8430.58测定结果25.1130.78测定结果34.8929.03测定结果45.1331.10测定结果55.1529.13平均值5.0230.12差0.150.97CV2.92%3.23%赋值浓度5.0230.12质控品赋值的确认以上述产品校准品的赋值结果和荧光信号值拟合校准曲线，和本试剂盒其他组分组成的检测系统和必欧瀚测试系统同时检测质控品，要求两种试剂测定值平均相对偏差＜5.0%o质控品1在必欧瀚检测系统的平均值与在必欧瀚检测系统平均值的相对偏G-17质控品1检测方法健伟检测系统必欧瀚检测系统G-17质控品2检测方法健伟检测系统必欧瀚检测系统测定结果15.014.91测定结果131.2929.07测定结果25.004.83测定结果229.2629.01测定结果35.115.04测定结果329.2530.61平均值5.044.93平均值29.9329.56相对偏差2.30%相对偏差1.25%差偏差为2.30%,没有超过5%,质控品2在必欧瀚检测系统的平均值与在必欧瀚检测系统平均值的相对偏差为1.25%,没有超过5%,本试剂盒质控品符合要求。制备参考校准品制备的方法，按照表A2的浓度范围制备质控品、内部质控品与参考A2质控品浓度要求标志物（胃泌素17）浓度pmol/L质控品内部质控品15内部质控品230参考品15参考品230注：质控品用于实验质控、参考品1与参考品2用于准确度检测、内部质控品1与内部质控品2用于精密度检测医疗器械产品技术要求编号：胃泌素17测定试剂盒（免疫荧光层析法）1产品型号/规格及其划分说明按功能命名：胃泌素17测定试剂盒（免疫荧光层析法）规格：25人份/盒L3划分说明：本试剂盒依据《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号），被划归为“II-1用于激素检测的试剂”，本试剂盒为第二类体外诊断试剂。2.性能指标2.1物理性状2.1.1外观试剂盒表面应整洁完整、无毛刺、无破损、无污染、无锋棱，上下盖附着应牢固，拔脱应轻松。标签应字迹清晰，缓冲液应无悬浮物、絮状物及沉淀。2.1.2宽度检测膜条宽度应为4±0.2mm。2.1.3移行速度在检测卡的加样孔上滴加缓冲液，应5min内液体前沿应到达检测窗口的最前端。2.1.4缓冲液容量缓冲液容量应不小于5mlo2.2检出限应不大于0.50pmol/Lo3准确度用参考物质作为样本进行检测，其测量结果的相对偏差应在±15%范围内。2.4线性范围及相关系数各指标的线性范围见表2-4-lo在线性范围内标志物的相关系数r应三0.9900o表2-4-1本品检测的线性范围2.5精密度标志物线性范围浓度单位胃泌素170.50〜50pmol/L2.5.1每个标志物的批内测定值的变异系数(CV)应W15%。2.5.2每个标志物的批间测定值的变异系数(CV)应W15%。2.6稳定性6.1热稳定性：把一个批次的试剂盒放入37℃恒温培养箱中，存储满7天后,分别检测物理性状、检出限、准确度、线性范围、批内精密度、应分别符合2.1、2,2、2.3、2.4和2.5.1的要求。6.2效期稳定性：试剂盒的有效期为18个月。取超出有效期不超过3个月的试剂盒，分别检测物理性状、检出限、准确度、线性范围、批内精密度、应分别符合2.1、2.2、2.3、2.4和2.5.1的要求。7校准品溯源性生产企业应根据GB/T21415-2008及有关规定提供所用胃泌素17校准品的来源、溯源的赋值过程和相应要求。3.检验方法1物理性状：1.1外观：在自然光下目视检查，应符合2.1.1的要求。1.2宽度：使用游标卡尺，随机检测3条胃泌素17试纸条的宽度，应符合2.1.2的要求。1.3移行速度：取3个检测卡，吸取80uL缓冲液垂直滴加至检测卡加样处，测定液体移行速度，结果应符合2.1.3的要求。1.4稀释液容量用经检定的量具对待测稀释液进行测量，测量3次，测定结果均应符合2.1.4的要求。检出限：用5份浓度近似LOD的低值样本进行检测，每份样本检测5次，对检测结果按照大小进行排序，符合如下条件，即可认为生产企业提供的空白限（0.05pmol/L）和检出限的设置基本合理，结果应符合2.2的要求。a）低于生产企业提供的空白限数值的检测结果的数量应小于或等于3个b）适用时，无高于生产企业提供的参考区间下限的检测结果。准确度：分别用公司制备的参考物质（即参考品1与参考品2）作为样本，按照说明书的步骤进行检测，对每个浓度的内部参考品重复测定3次，根据公式（2）分别计算相对偏差（B。，如果3次结果都符合要求，即判为合格；如果22次的结果不符合，即判为不合格；如果1次结果不符合要求，则应重新连续测试20次，并按公式（2）计算相对偏差（BQ，如果19次结果符合要求，则结果符合2.5的规定。Bn=(M,~T)/TX100%(2)式中：Bn——相对偏差(n=l,2,3,…,20)；Mn——测量结果(n=l,2,3,…,20)；T——理论值。线性范围：在接近线性范围上限的高值样本按一定比例稀释为至少5种浓度，其中低值浓度的样本须接近线性范围的下限，按试剂盒说明书的步骤进行操作，对每一浓度的样本均重复检测3次，计算其平均值，以稀释浓度(X。为自变量，以测定结果均值(y)为因变量用最小二乘法进行直线拟合，并计算线性相关系数r,结果应符合2.4的要求。5精密度：1批内精密度：用1个批次的试剂盒分别检测内部质控品1和内部质控品2,各重复检测10次。根据公式(2)和公式(3)计算每个质控品的10次测量浓度结果的平均值(M)和标准差(SD),再根据公式(4)得出批内变异系数(CV),计算出来的结果应符合2.5.1的要求。3.5.2批间精密度：用3个批号的试剂盒，检测内部质控品2,每批重复检测10次，根据公式(2)和公式(3)计算3个批次30个测量结果的平均值(M)和标准差(SD),再根据公式(4)得出批间变异系数(CV),计算出来的结果应符合2.5.2的要求。相关公式如下：M=———n(2)(3)(3)SD=收(M--1)CV=SD/MX100%(4)6稳定性热稳定性：把一个批次的试剂盒放入37c恒温培养箱中7天后分别进行.2、3.3、3.4和3.5.1的试验，结果应符合2.6.1的要求。效期稳定性：取超出有效期不超过3个月的试剂盒，以3.1、3.2、3.3、4和3.5.1的方法进行实验，结果应符合2.6.2的要求。7校准品溯源性常看附录A,结果应符合2.7的要求。4.术语4.1检出限：是指检测方法可检测出的最低被测量浓度。2线性：在给定测量范围内，给出的测量结果与样品中被测量的值直接成比例的能力。3精密度：在规定条件下，相互独立的测试结果之间的一致程度。精密度的程度是用统计学方法得到的测量不精密度的数字形式表示，如标准差(SD)和变异系数(CV)o附录A溯源与赋值A研究择要用于胃泌素17测定试剂盒（免疫荧光层析法）的质量控制及评价。依据GB/T21415-2008/ISO17511:2003“体外诊断医学器具一生物样本中量的测量一校准物质和质控物质定值的计量学溯源”；ISO15193”体外诊断医学器具一生物样本中量的测量一参考测量程序的表述"；ISO15194”体外诊断医学器具一生物样本中量的测量一参考物质的描述”，江西健伟生物科技有限公司制定胃泌素17测定试剂盒（免疫荧光层析法）配套产品校准品、质控品溯源性文件。B缩略语胃泌素17—G-17L校准品、质控品配制及溯源赋值G-17无参考物质，也无国际约定参考测量程序，按GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》规定，属于标准5.6项所述既无参考测量程序，也无用于校准的参考物质不能在计量上溯源至SI的情况。此种情况下，溯源途径如下图：计量学溯源制造商和（成〉终端用户j）终潴用户常规测量程序f）制造商选定测量程序校准ev物质赋值一—程序实厩g）制造商工作校准品，常规样品终埼用户终蜡用户图1：G-17的计量溯源链（无参考测量程序和参考物的量值溯源等级图）.原料说明工作校准品、质控品中主要原料为G-17重组抗原，纯度均不低于90机.研究工作校准品、质控品制备3.1.1产品组成主要组成成分为G-17重组抗原、蛋白稀释液（PBS+4%BSA）03.1.2企业工作校准品、质控品的配制为了克服因纯标准液和病人样品间的基体差异，对检验结果的严重误差,20年前开始引用具有与病人样品基体相似的工作参考品替代标准品，用于日常工作。故本公司以GT7重组抗原用PBS+4%BSA稀释，充分混匀、过滤除菌。检验合格后，每管1.5ml分装后制备成冻干粉，置于-20℃保存。来作为试剂的工作校准品、质控品。3.2工作校准品赋值方法3.2.1检测试剂及仪器a.公司选定参比程序：必欧瀚生物技术（合肥）有限公司的免疫荧光检测仪及配套的胃泌素17测定试剂盒（免疫荧光层析法）（以下简称必欧瀚测试系统）b.我司的胃泌素17测定试剂盒（免疫荧光层析法）c.配套的江西健伟生物科技有限公司生产的JW-98荧光免疫分析仪3.2.2量值从企业选定的测量程序传递至公司工作校准品使用PBS+4%BSA溶液将G-17重组抗原稀释成0.5、12.5、25、37.5、50pmol/L5个浓度，配制成企业工作校准品，用必欧瀚测试系统测定G-17工作校准品，每个浓度检测3次，对工作校准品进行赋值。工作校准品可溯源至必欧瀚测试系统测值。G-17工作校准品检测结果企业工作校准品参比系统重复1重复2重复3平均值CV工作校准品10.520.480.480.494.68%工作校准品213.1012.9712.2112.763.77%工作校准品324.2024.7826.0525.013.78%工作校准品436.0139.0237.5737.534.01%工作校准品549.8148.8248.2548.961.61%3.3工作校准品赋值的确认以上述工作校准品的赋值结果和荧光信号值拟合校准曲线，和本试剂盒其他组分组成的检测系统和必欧瀚测试系统同时检测40例新鲜人临床G-17样本,它们的值尽可能的分布于测量区间的整个范围。将两组数据进行线性回归分析,检测结果如下表：