农药室内生物测定技术与方法

农药室内生物测定技术与方法张宗俭农药室内生物测定技术与方法——～：■■一i，、．¨刁、7张宗俭(沈阳化工研究院农药生物测定中，tL,，沈阳110021)一、农药生物测定的含义及其用途农药生物测定是指利用靶标生物(昆虫、螨类、病原微生物、线虫、植物等)的活体或离体器官、组织、细胞或其代谢物等(如酶、蛋白质等)为试材，测试或鉴别生物活性物质的类型、反应症状或其活性大小的一种方法。简单地说，农药生物测定技术就是利用靶标生物等对药剂的反应来鉴别农药毒力或药效的一种技术。农药生物测定主要包括杀虫剂(杀螨剂)、杀菌剂(杀线虫或抗病毒剂等)、除草剂、杀鼠剂以及植物生长调节物质等的生物测定技术。它涉及靶标生物、测试物质(药剂)、反应症状及强度、测试环境条件等多方面的因素。一个好的生物测定技术或方法应具备易于操作、结果反应灵敏、重现性好、且使用物质的剂量与反应之间有良好的相关性。农药生物测定技术与农药的使用和开发同时产生，经过长期不懈创新、完善和发展，已经成为研究生理活性物质、靶标生物以及反应强度三者关系的一项专门技术，被广泛应用于新农药的筛选以及作用特性和应用技术评价等研究之中。纵观目前农药生物测定的研究概况，室内农药生物测定技术主要应用于以下几个方面：1．刨制农药生物活性筛选研究：随着农业生产的发展和人们对地球环境生态和人类健康等的要求不断提高，高效、低毒、环境友好型新农药的开发应用给人类社会和生产企业带来巨大的效益，但同时也由于新农药开发的难度与费用日益增加，如何利用生物测定技术快速高效地筛选新化合物，并准确评价其生物活性以及应用技术，估测其农药生物评价技术报告会市场前景及将来在市场上的占有率和利润额，是决定其创制农药研究成功与否的关键。利用生物测定方法研究同一类结构或同一作用类型化合物的化学结构与生物活性关系的规律(sAR)以及与靶标作用位点的结合关系，为定向创制新农药和计算机辅助设计新化合物提供基础数据和理论依据。生物活性筛选被称为农药创制的“眼睛”．对新农药开发研究起着举足轻重的作用。2．研究农药的理化性质、$,JN力NT类型、加工方法与其生物活性及其安全性之间的关系，为剂型加工和生产应用服务：农药制剂的加工及助剂的选择和应用与其有效成分的生物活性、安全性以及应用技术和田间使用效果密切相关，好的加工剂型与工艺不仅可改善有效成分的生物活性，增加对保护作物的安全性，并且可以减少对生态环境的污染。3．测定或比较不同农药对靶标生物或测试对象(昆虫、螨类、病原菌、杂草、鼠类等的毒力或药效，指导生产中农药的正确选择和应用。4．研究农药的作用方式、生理效应以及对植物的影响：杀虫剂有触杀、内吸、胃毒、不育、拒食、忌避、引诱等作用；杀菌剂是属杀菌作用(影响生长、萌发或附着胞的形成，引起菌体细胞膨胀、原生质体和线粒体瓦解以及细胞壁、细胞膜破坏等，如铜、汞制剂)，还是抑菌作用(抑制菌体生命活动的某个过程，如许多有机农药，尤其是内吸杀菌剂)。杀菌作用表现多是影响菌体的生物氧化，表现为孢子不能萌发；抑菌作用多是影响菌体的生物合成，孢子萌发后芽管或菌丝不能继续生长。也可用于研究杀菌剂的化学防治原理，是属于保护剂、治疗剂或化学免疫剂。化学保护剂应在植物感病之前使用，杀灭病原菌或防止病菌入侵；化学治疗剂则在植物发病后早期使用，以阻止病害农药室内生物测定技术与方法张宗俭发展而使植物恢复健康；化学免疫剂则主要是提高或诱导植物的抗病性，使其免于发病(如乙瞵铝，噻瘟唑等)。除草剂的杀草谱确定，使用技术(苗前、苗后)，作用方式或机理等研究也均离不开生物测定。5．研究有害生物的发育阶段(昆虫的卵、龄期等，病菌的发生入侵时期、侵染体状态等以及杂草的种群组成和发育时期)、生理状态(品：系、耐药性和生长情况等)以及环境条件(光照、温度、湿度、土壤水分、质地等)与农药药效的关系。以便正确制订使用时期、剂量以及施药方法等，做到科学用药，适时用药。6．筛选和测定农药混剂组合、配比以及农药增效剂。以提高药效，扩大防治谱、减少用药量、降低用药成本以及对环境的不良影响。7．测定、监测或预测有害生物对农药的抗性水平以及抗性发展，从丽克服或延缓抗性的发展，延长新品种的使用寿命、降低新农药开发研究风险。8．微量生物活性物质的定性、定量：利用生物测定技术以及特定化学物质的出现效应及其强度与其剂量的相关性，定性分析追踪生理活性物质的有无以及含量大小或者残留动态等。尤其是一些天然产物或新的特异性化学物质，在未建立化学分析方法之前，常利用灵敏度较高的生物测定方法进行定性、定量分析。9．测定农药对植物的药害症状和影晌程度、对非靶标生物(高等动物、天敌昆虫、土壤微生物等)的毒性以及影响。综上所述，农药生物测定及其应用范围十分广泛。随着农药科学及其农药工业的迅速发展，农药生物测定作为新农药创制和合理科学使用农药以及农药药理学、毒理学及环境毒理学等研究的重要手段，得到了极大的丰富和发展。国外大型农药研究机构不断投入资金和技术，发展、健全其农药筛选机构。改进筛选方法，模拟各种环境条件，农药生物评价技术报告会改进和强化其试验设备和仪器，建立国际性的农药大田试验网．提高和培训农药生测技术人员，以促进新农药的研制和开发。许多农药公司增设了高效快速筛选技术以及分子生物学和基因研究部门，以满足现代农药研究的需要。我国也于近年相继建成农药国家工程研究中心(沈阳、南开)和国家南：)亨农药创制中心(上海、南京、浙江、湖南基地)，投入大量资金和经费，建立了较高水平的生测试验室，以适应我国创制农药发展的需要。但由于我国新农药创制起步晚，虽然在农药生测研究方面也做了许多工作，但就创制化合物活性筛选方面与国外发达国家相比差距仍然很大：就生测筛选的条件建设，仪器配置以及方法建立，尤其是化操作程序(SOP—StandardOperationProcedure)和GLP(GoodLaboratoryPractice)建立方面还需做很多努力；有关生测技术人员的培训以及创制农药研究体系的建设和运做等方面仍需加大投入力度，以确保创制农药研究的快速、健康发展。二、农药生物测定的基本原理和方法在农药生物测定研究中，靶标生物的种类、发育阶段和生理状态等对农药的毒力或药效影响很大；药剂本身的理化特性、加工剂型、助剂种类与含量等也影响药效：而测试环境条件对靶标生物以及靶标生物对药剂的反应程度也存在根大的影响。环境条件、供试药剂、靶标生物三者之间相互作用，相互影响。所以，在进行农药生物测定试验对，必须严格控制各种影响因子，以确保试验结果的可靠性，可比性以及重现性。在设计和进行农药生物测定试验研究时，必须掌握和了解以下基本原则：1．标准化靶标试材的选择及繁育：不同靶标生物对药剂的反应各不相同，原则上任何生物体或其活体器官、组织、细胞等均可以作为农药室内生物测定技术与方法张宗俭45生测靶标选择或用于测试。在农药生物测定研究中，靶标生物的选择应具备以下几个条件：①在分类学上，经济上或地域上有一定代表性的昆虫、病菌或杂草等。②对药剂敏感性符合要求，且对药剂的反应以及程度便于定性、定量测定，且与剂量有良好的相关性。⑧易于移取、控制和进行试验操作。④易于大规模工业化培养、繁育和保存，以便保证终年供给。不园地区或季节的限制而影响试验的开展。⑤种群纯正，个体间差异小，生理标准均一。2．明确药剂的结构、组成及其有效成分含量：所有测试试验的物质均应是纯品或原药(原油或原粉)，结构明确：若为制剂应了解确切的有效成分含量，若有添加剂和助剂也应了解其成分和含量：以保证试验的重现性。并且，应使用精密的施药机械和正确的使用技术，以确保靶标受试药量的准确性和均一性。3．严格控制的、相当均一的环境条件：农药生物测定大部分是测定靶标生物的反应程度(死亡率、抑制率等)，随药剂荆量的变化关系。药剂剂量(或浓度)为自变量，对靶标死亡率或抑制率为因变量。在没有其它因子影响的情况下，二者里良好的正相关关系，其试验结果也便于测定和分析。而在生测试验中，环境条件(如光照、温度、湿度等)不仅影响靶标生物的生理状态，也影响药剂的吸收、输导以及毒力或药效的高低。所以在进行生测试验时，应严格控制测试环境，以保证所有处理在相对一致的环境下测试。室内试验可以在人工气候箱、光照培养箱、恒温、恒湿箱中进行。田间试验应选有代表性的田块，最好有相对控制的小气候环境(尤其是杀菌剂试验)，田块平整，肥力均一，病虫草害分布均匀且有代表性，作物长势、管理条件等均力求一致，以减少试验误差。4．必须设立对照：由于生物的复杂性和易变性，常会产生一些难农药生物评价技术报告会以预料的结果，所以，正确设立空白对照，对于取得可信的试验数据非常重要。～般常用农药生物测定试验的对照设立有3种：①不作任何处理的空白对照。以了解供试靶标生物的自然死亡率、生物量变化等．消除供试生物本身的变化对测定结果的影响。②不含有效成分的对照。即除不含农药有效成分外，一切处理均与其它药剂处理一样进行，主要目的是了解溶剂、乳化剂、助剂等以及处理方法对测试靶标的影响。③标准药剂对照。即选择同类已知对测定靶标有明确影响的化含物或商品化品种作对照，以消除偶然因素的影响，同时也便于比较和评价未知供试化合物的活性。在新化合物筛选试验或其它长期进行的试验中，用于监测靶标生物的生理状态变化以及耐药性水平的变化趋势，以跟踪和消除不同批次试验间的误差。5．设置重复，随机排列：生物测定试验的对象是靶标生物，而靶标生物种群中个体之间的大小、生理状态以及耐药性等均存在一定的差异。在生测试验取样时，应有一定的数量，并设置重复，以保证其代表性和结果的可靠性。但重复也不能过多，应根据试验的目的和工作量确定重复次数。一般试验至少应重复3次，田间小区试验应重复4—5次。’其试验设置应用随机区组法排列，以控制处理间的误差，并便于对调查数据进行统计分析。6．应用生物统计的方法分析试验结果：对试验结果用生物统计工具进行比较和分析，对于消除试验误差，了解错纵复杂的大量数据之间的内在规律，揭示供试化合物与靶标之间的内在关系等非常重要。尤其是目前计算机的普及和许多生测统计软件的应用，使得生测试验的统计分析、数据处理和保存更加方便和快捷。三、杀虫剂的生物测定方法1．杀虫剂生物测定常用靶标昆虫农药室内生物测定技术与方法张宗俭472．杀虫剂毒力测定方法杀虫剂的毒力测定方法很多，根据试虫、供试化合物以及测定目的不同，可以选用不同的试验方法或自行设计试验方法和技术，常用的新化合物杀虫活性筛选方法和杀虫剂作用方式测定方法有以下几种：初步杀虫活性测定比较或筛选试验方法：这类方法主要用于确定或比较供试化合物是否具有杀虫活性及其活性高低，多用于筛选试验和毒力或药效比较试验。主要有3类常用方法：喷雾(粉)法：利用喷雾或喷粉装置，将定量的药剂直接喷布于盛48农药生物评价技术报告会有目标昆虫及其饲料的器皿内，使药剂直接与昆虫或食料接触，然后在培养箱或观察室内定期观察记录昆虫的生长、发育和死亡情况，比较或确定化合物的毒力。这类试验对喷雾装置的要求较高，要求雾滴大小基本一致，喷雾均匀，单位面积上药剂沉积量一致。常用喷雾装置有履带式或天车式喷雾机、喷雾喷粉两用沉降塔、颇特喷雾器等。其特点是速度快、便于操作、用药量准确；但需特定设备。浸渍法：将一定数量的目标昆虫(用于净纱布袋或纱笼装起来)，或将饲料植株、叶片或带虫叶片(如蚜虫、红蜘蛛等)，直接浸润于一定浓度的药液中3—5秒钟，取出后用滤纸吸去多余药液，将试虫及饲料置于干净器皿中饲养，并补充新鲜饲料，观察、记录试虫死亡率。特点是快速、方便、不需特殊仪器、设备，但操作中人为因素影响大，用药量不够准确。饲料混药法：将一定量的药剂充分与试虫食料混匀，试虫取食时接触或摄入药剂而死亡。多用于贮粮害虫、家蝇、蜚蠊、蚊子或人工饲料饲养的昆虫的生物测定试验。上述方法比较粗放，主要用于判断化合物是否有杀虫活性，并初步比较其活性大小，多用于常规筛选研究。如目前大部分研究机构采用喷雾法或浸渍法筛选新化合物的杀虫活性。3．杀虫剂作用方式测定方法了解杀虫剂的作用方式，对于准确评价其杀虫活性以及正确有效地使用杀虫剂具有十分重要的意义。通常根据杀虫剂进入虫体的部位和途径，将杀虫剂可分为胃毒剂、触杀剂、熏蒸剂、内吸剂、忌避与拒食剂、不育剂、引诱剂等。椐其不同的作用方式可以选择或设计相应的生物测定技术。置童佳围型定垫!Q堡垫h墼!iQ血：使供试药剂随食物～起被目标农药室内生物测定技术与方法张宗俭昆虫吞食进入消化道而发挥毒杀作用。常用方法有：，饲料混药饲喂法：如贮粮害虫测定等。无限量取食法≮培养基混药法：人工饲料饲喂的昆虫等，如果蝇。。土壤混药饲虫法：以金针虫、蛴螬、蝼蛄、地老虎等地下害虫，土地混药后接虫。r一叶片夹毒法：利用喷粉(雾)或点滴法定量制做夹毒叶片。定量取食法<l液滴饲喂法：家蝇、果蝇、蜜蜂等舐食性昆虫。【、口腔注射法：难度大，很少使用。无限量取食法操作方便，易于大规模进行试验，但很难排除其它毒杀作用(如触杀、熏蒸等)的影响。定量取食法测试结果EE较准确，且便于对昆虫的取食药量进行定量分析，如夹毒叶片法是目前常用的测定胃毒作用的经典技术。筮苤往旦型定(!业!堂!堑!i!生：药剂通过昆虫体壁进入虫体而产生毒杀作用——触杀毒力。其测定方法有直接施药法和局部施药法：r喷粉或喷雾法：定量药液直接喷布至虫体。直接施药法<浸渍法：筛选试验。蚜虫、螨等小型不活动昆虫。L浸玻片法：螨、蚜虫测定。r药膜法(residualfilm)：爬行昆虫、卫生害虫。局部施药法J【点滴法(topicalapplication)：用药精确、应用广泛。直接施药法常无法排除胃毒等的干扰，但主要为触杀作用。恿苤佳旦型定(￡!堡ig煎i!!丝!i!吐：测试杀虫剂从气孔或气门进入呼吸系统而引起昆虫中毒，．测定时应注意密闭以及温度、湿度的影响。常用方法二重皿法、广口瓶法、三角瓶法等：也可用钟罩、干燥农药生物评价技术报告会器等进行试验。内堕丝旦型室(!!§±盟i!熟!i塑2：内吸杀虫剂指通过植物根、茎、叶及种子等部位渗入植物内部组织，随体液传导至整株，而对害虫起很高毒效的化学物质。测定方法很多，也可以自行设计。如根系内吸、叶部内吸、茎叶内吸和种子内吸等。基宣往旦左式型庭：拒食、避忌、不育，激素等测定见有关资料。四、杀菌剂生测方法I．杀菌剂生测常用靶标病原菌的菌种及其选择杀菌剂生物测定主要是测试供试化合物对细菌、真菌或其它病原生物的作用大小或对植物病害发生、发展的控制作用。对其靶标的选择应注意：①在分类上具代表性的重要病害的病原菌；②菌种的纯菌株或品系；⑨容易培养和繁殖，致病力稳定。④便于试验操作和结果调查。根据地区、测试目的以及药剂的作用对象，选择靶标菌种，寄主植物及其培养方法。常用靶标有：中文名称拉丁学名马铃薯晚疫病菌水稻稻瘟病菌小麦赤霉病菌水稻胡麻叶斑病菌玉米大斑病菌梨黑斑病菌黄瓜霜霉病菌葡萄霜霉病菌黄瓜白粉病菌番茄旱症病菌黄瓜角斑病菌水稻白叶枯病菌PhytophthoraJnfestansPiticul8riaoryzaeGibberellazea幻曲liobolusmiyabeanusHeiminthosporiumturcic∞A1ternariakikuchianaPseudoperonosporacubensisplasmopaT8viticoi88phaerothecafuligineaAjternari8soi8niPseudomonasIliarginalispv．marginalisXan曲OmOnaScampestrispv．OryZ∞堡垫至塑兰塑型塞塾查皇查堡堡量堡翌小麦锈病菌小麦白粉病菌黄瓜灰霉病菌水稻纹枯病菌PueeiniastriiformisErysiphegraminisBotrytiscinereaRhizoctoniasolani2．杀菌剂生测试验方法离体试验：塑王莹筮造：平板法、悬滴法等。(invitrotest)盒壹佥厦逵：①水平扩散法(抑菌圈法)②生长速率法③最低抑制浓度法(培养基稀释法)活体试验：吐丘量差这：以离体叶片或叶蝶为试材、测定杀菌(如vivotest)剂活性。坌筮这坠洼：盆栽条件下，模拟自然条件，接种并用药，测定其防效。离体试验方法快速、简便、容易操作、不需大型设备和人工气候室(仅涉及药剂与病原生物，不包括寄主植物)，但测试结果与田间实际情况差异大，因有些化合物必须在植物体内活化后或通过改变寄主的抗病性而起防病作用，这些化合物在离体条件下不表现毒力。活体测定试验则包括病原生物、寄主以及药剂三者的统一体，所以活体筛选试验更接近于杀菌剂实际田间应用条件。并且，可以在控制条件下，研究杀菌剂的作用方式以及特性(保护、治疗、抗雨水冲刷、持效期等)，试验结果重现性好，便于大规模进行新化合物筛选以及进行毒力比较研究。但这类试验对病原菌等要求严格，且需要较好的温室、接种室以及施药设备，占用空间大，工作周期较长。杀菌剂根据其防治原理可以分为化学保护、化学治疗以及化学免疫三大类型。这种作用原理的确定也必须以盆栽试验为基础进行研究，所以，活体试验是目前在杀菌剂研究和筛选中使用的主要技术。农药生物评价技术报告会五、除草剂生物测定技术与方法除草剂的生物测定方法有关文献报道很多。主要是利用活的生物体(植物、单细胞藻类或微生物等)或其器官、组织、细胞等在生长、形态以及生理等方面对化学物质的反应来确定除草活性的有无和大小。除草剂的生测方法很多，并不断有新的方法被建立。其应用也非常广泛，常用的主要是新除草剂筛选：除草剂作用特性(选择性、杀草普、土壤吸附、淋溶、光解、挥发、持效、残留等)研究：除草剂定性、定量分析(尤其适用于超高效除草剂研究或缺乏精密仪器等测试条件的基层单位)：除草剂作用方式研究以及除革剂药害研究等。一般来说，除草剂生测方法专～性较强，不同方法测定内容和应用范围不同；试验周期较长，费时，一般需3～7天，盆栽试验则需要15～30天或更长；对测试环境条件、光、温度、湿度、土壤特性等要求较严；对药剂的纯度以及助剂等也有较严格的要求。I．除草剂生测靶标的选择和培养除草剂生测靶标试材的选择范围很广，根据测定药剂以及研究目的不同，可以选择相应的靶标生物或其组织、细胞或细胞器(线粒体、质体等)。从真菌、藻类、苔藓等低等植物到杂草、栽培作物等，均可以作为除草剂生测靶标试材而使用。作为新化合物除草活性筛选靶标，最好选择生长迅速、代表性强、种子量大、无休眠习性、对光、温期不敏感、易于终年大量培养、对药剂反应敏感的试材进行试验。作为除草剂作用方式或特性研究，则应选择敏感性高，反应稳定的试材进行测定。应用范围以及禁用对象的研究则应选择大面积栽培的作物以及当地的主要品种进行试验。农药室内生物测定技术与方法张宗俭目前常用的除草剂生测的代表性靶标杂草名称科名种名学名苹科芷Marsileaquadrifolia蓼科卷茎蓼Poiygonumconvolvulus红蓼P．orientaIe齿果酸膜Rumexdentatus藜科篓ChenopodiuiRalbum地肤Kochiaalbum苋科反枝苋Amaranthusretrof]exus石竹科蘩缕ste|iariamedia十字花科荠菜Capse]]abursa-pastoris独行菜Lepidiumapetalum豆科田皂角Aeschynomeneindica大巢菜Viciasativa锦葵科苘麻Abutilontheophrasti旋花科田旋花Convolvulusarvens]a圆叶牵牛Pharbirispurpurea茄科龙葵SOIanumnigrum曼陀罗肪tufastramonium玄参科婆婆纳Veronicadidyma茜草科猪殃殃白liumaparine菊科鬼针草Bidensbipinnata鳢肠Ecliptaprostrata苍耳xanthiumsibiricum禾本科野燕麦AV￡'aafa￡∞看麦娘Alopecurusaequalis马唐Digitariasanguinalis稗草Echinochloacrus-galli狗尾草Setariavi“dis假高粱Sorghumhalepense莎草科香附子CyperusTOtundus水莎草JuncelIusserotinus三棱草$cirpusplaniculmis达挝盈王丞塞：堡在塑揸差：除草剂生测试材中的作物靶标，应选择大面积栽培的、高纯度的主栽品种，要求种子成熟度好、发芽率高、萌发整齐一致，未经任何药剂处理的种子。杂草靶标试材最好能农药生物评价技术报告会人工种植栽培、统一采集、收藏。若无人工栽种条件。则需定期采收、清选、用物理方法(变温、层积、浓硫酸等)处理破除休眠后，在种子库内保存。要求发芽速度快、发整齐一致、易于培养。作物、杂草等的发芽、生长均需一定的水分、温度、氧气以及光照等条件，温室条件要求温度、湿度和光照均可人工控制，以便保证试材的正常生长及其生理状态的一致性。2．除草剂生物测定方法叠王莹筮测定鎏t以指示植物种子在药剂处理后的萌发率或萌发后幼根、芽的伸长量或形态为指标进行测试。常用方法有：黄瓜幼苗形态法：(激素型除草剂)小杯法：(根、茎、胚轴伸长等，二苯醚、氨基甲酯、二硝基苯胺、酰胺类除草剂等)高粱法：(皿内法)：幼根、幼芽伸长萝h子叶法等擅挂垒量量鉴室鎏；测定药剂处理(土壤、植株)后的植株生长量(高度、鲜重、干重、叶面积等)，苗后茎叶处理剂以及光合抑制剂等常用方法。常用方法有：去胚乳小麦幼苗法(脲类、三氮苯类等)。番茄法(称量或目测再生根)。燕麦法(激素类)。菜豆叶片法。叶鞘漓注法等。生理堂拯测定法：处理后测分生组织的有丝分裂指数、光合、呼吸量、膜适性、酶活力、叶绿索、糖、蛋白等含量。评价活性大小。常用方法有：浮萍法农药室内生物测定技术与方法张宗俭单细胞藻法叶圆片漂浮法酶联免疫法光合呼吸仪测定法组织压片法等六、农药生物测定试验结果的评价及数据处理农药生测试验依据试验内容、性质以及所用靶标生物等的不同，药效结果的调查评价方法以及数据记录和处理方法等也不尽相同。但～般试验结果记录和评价多与空白对照进行比较，根据反应症状形态、死亡率、抑制程度等评价药效的高低。由于试验结果与药剂、靶标、测试条件等多种因素相关。故在记录和评价药效时，要有详细的试验原始记录，并随试验结果一起归档保存。1．原始记录的内容：原始记录应准确记载药剂的特性、剂型、含量、配制方法、生产厂家、生产日期、施药方法(施药器械、压力、喷头型号等)、靶标生育期、培养或饲养条件(温、湿、光等)、雾滴展布情况等基础数据。处理后的培养条件及管理方法，结果调查方法与调查结果等均应进行详细记录。所有原始记录均应一式两份，分别保存。2．试验结果的调查方法旦趔洼：目测估计处理后对试虫、病菌、杂草的杀伤或抑制效果的方法称目测法。目测法与计数或测量等定量调查方法相比，省工、省时，尤其是在试验处理数量大，或有害生物发生量大时，可以简化调查程序，综合评价处理的药效。在新农药筛选以及田间试验中被广泛应用，但目测法常因主观人为因素的影响和干扰较大，故应制订详细的调查标准，并采用多人评价，取其中间值等方法以减少试验的人为误差。农药生物评价技术报告会盐蓥垦鎏：直接计数调查药剂处理后，靶标试虫、病菌、杂草等的死亡数或减少数目，也可按一些相应的分级标准或调查指标进行计数，调查药剂的作用效果和影响程度。定量型量蓬：用仪器测量、计算药剂处理后靶标的重量(干重、鲜重)；大小或高度(株高、病斑或菌落直径、昆虫龄期变化等)；或测量一些生长、发育进程或生理生化指标等，以衡量药剂活性的有无和大小。3．数据处理和统计分析对于试验得到的大量数据，只有通过一定的处理和比较才能发现其内在关系与规律，正确阐述测定结果的科学性。统计分析是生物测定试验结果分析的重要工具，被广泛应用到药剂的毒力或药效比较之中。而其中最常用的是回归分析法、方差分析法、邓肯氏(Duacaa)新复极差分析法、主因子分析法等。计算机的普及和应用使得数据处理和统计分析法的应用更加普遍和易于进行。农药室内生物测定技术与方法作者：张宗俭作者单位：化工研究院农药生物测定中心相似文献(10条)1.学位论文方剑锋过氧化氢降解有机磷及氨基甲酸酯农药的研究2003过氧化氢(H<,2>O<,2>)是一种安全高效的活性物质,有着非常广泛的用途.该文研究了H<,2>O<,2>对有机磷和氨基甲酸酯农药的降解作用.结果表明,H<,2>O<,2>对机磷和氨基甲酸酯农药有良好的降解作用.10mL/LH<,2>O<,2>对10μg/mL甲胺磷、10μg/mL毒死蜱和100μg/mL久效磷三种有机磷农药的12h降解率分别为30.42﹪、10.89﹪、37.53﹪,与其自然降解率2.87﹪、1.89、2.80﹪相比,提高了5～13倍.对10μg/mL灭多威和10μg/mL克百威的降解率分别从2.16﹪、1.76﹪增加到9.41﹪和21.76﹪,分别提高4倍和13倍.光照对H<,2>O<,2>降解农药有显著影响.紫外光下,H<,2>O<,2>降解有机磷和氨基甲酸酯农药的效果比其在黑暗和普通光下的效果明显要好.10mL/LH<,2>O<,2>的浓度处理条件下,H<,2>O<,2>紫外光催化降解10μg/mL甲胺磷的12h降解为100﹪,比普通光下的降解率提高3倍;10μg/mL毒死蜱12h降解率为95.28﹪,比普通光下的降解率提高9倍;100μg/mL久效磷的12h降解率也提高了3倍.10μg/mL灭多威和10μg/mL克百威的12h降解率也分别提高近5倍和10倍.该文还讨论了H<,2>O<,2>光催化降解农药的机理、农药降解与农药结构的关系及农药催化降解的应用等问，并提出H<,2>O<,2>处理田间残留农药的.2.期刊论文方剑锋.曾鑫年.杜利香.熊忠华.于飞过氧化氢降解有机磷农药的研究Ⅲ.去除残留农药的研究-华南农业大学学报(自然科学版)2004,25(3)研究了过氧化氢降解田间农药,并对过氧化氢降解农药的室内生物活性进行测定.结果表明,经H2O2处理后田间农药残留量明显下降,经10mL/LH2O2处理1d后,甲胺磷和毒死蜱的残留量下降率分别为10.57%和16.95%,处理3d后残留量下降率分别为39.62%和30.49%,而处理7d后则为45.21%和64.05%.室内生物测定表明,H2O2溶液浸泡处理60min内,对植物表面的甲胺磷、毒死蜱和久效磷的毒力有微弱降低作用.3.学位论文周青春农药生物测定的一种新方法——利用昆虫细胞测定农药毒力的研究19954.期刊论文严铁.马建义.王品维有机溶剂在农药生物测定中对靶标生物的影响-浙江农业科学2004(2)有机溶剂广泛应用于水不溶性农药的毒性测定和新农药的生物筛选研究.溶剂与被测化合物存在着相加作用、协同效应或拮抗效应使毒性(或活性)数据偏高或偏低而影响生物测定结果.综述了常用农药溶剂对藻类生长的影响和溶剂-农药的联合作用对生物测定数据的影响,并举例说明如何通过克服上述问题获得较为准确的生物测定数据.5.学位论文简勇新型蟑螂防治乳油及诱杀毒饵的研制2007本研究在前人研究的基础上，通过七种在中药上应用较多，但在农药上应用较少的植物和多种农药为研究材料，以德国小蠊(Blattellagermanlca)为试虫，通过生物测定选出效果较好的植物提取物和化学农药，通过加工复配最终筛选出对德国小蠊有较好防治效果的乳油、诱杀毒饵产品。研究结果如下：1、对七种植物性物质对德国小蠊的生物活性进行筛选。经过药膜法生物测定：在本试验0.150mg/cm<'2>剂量下，ACG、高良姜和蛇床子的触杀作用最好。其中在24h内ACG植物提取物对试虫的校正死亡率达到95％以上。随着处理时间的延长，德国小蠊的死亡率不断增加。处理72h后毒力回归方程及LD<,50>分别为：Y=11.29+4.09x，0.03mg/cm<'2>。2、常用化学农药对德国小蠊的药膜法和喷雾法生物测定。筛选出触杀效果最好的化学药品为溴氰菊酯，药膜法处理72h后毒力回归方程及LD<'50>分别为：Y=7.42+2.34x，0.06μg/cm<'2>。3、优选植物提取物与优选化学农药进行复配后结果表明：溴氰菊酯与ACG植物提取物混合后有明显的增效作用，当ACG植物提取物与溴氰菊酯200:1时，增效最显著，其增效倍数为3.81倍。4、植物杀虫剂乳油和粉剂的加工工艺。乳油加工工艺结果：筛选了溶剂无水乙醇、乙酸乙酯、乳化剂农乳100＃，并且确定了各个组分的比例，以Y1、Y2配方的效果最好，并且通过了质量检验。5、优选出的乳油配方对德国小蠊进行室内防效试验。乳油配方Y1、Y2对德国小蠊击倒速度最快，24h后德国小蠊的死亡率和20d后抑制率均达到100％。6、德国小蠊诱饵的筛选。通过对粉类、油类和其它食物的筛选，确定面粉与奶粉比例8:2的混合物为德国小蠊最喜欢取食。7、德国小蠊毒饵的确定。通过对植物提取物和化学农药的筛选，确定敌百虫：蛇床子素：硼酸：饵料(面粉：奶粉=8:2)=1:1:1:100。6.期刊论文于宏坤.梁革梅.任明勇.张永军.常洪雷.吴孔明.郭予元.YUHong-kun.LIANGGe-mei.RENMing-yong.ZHANGYong-jun.CHANGHong-lei.WUKong-ming.GUOYu-yuan防治棉铃虫的高毒农药替代品种研究-农药学学报2006,8(4)采用室内浸卵、浸叶和点滴法以及田间小区试验,对19种杀虫剂防治棉铃虫的作用特点和效果进行了系统研究.室内生物测定结果表明:多杀菌素对棉铃虫卵孵化有较好的抑制作用,90.40mg/L多杀菌素处理后棉铃虫卵的孵化率仅为42.86%;多杀菌素、甲氨基阿维菌素、高效氯氟氰菊酯、辛硫磷、丙溴磷、毒死蜱和高效氯氰菊酯对棉铃虫初孵幼虫的毒杀作用明显,原药稀释1,0×104～2.0×104倍时可使初孵幼虫死亡率达100%;昆虫生长调节剂--氟啶脲、氟铃脲、甲氧虫酰肼原药稀释1000倍对棉铃虫初孵幼虫的致死率大于70%,且幼虫的生长受到明显抑制;甲氨基阿维菌素、高效氯氟氰菊酯、多杀菌素、毒死蜱、高效氯氰菊酯、丙溴磷、辛硫磷对低、高龄棉铃虫幼虫均具有较好的毒杀效果.田间小区试验结果表明,甲氨基阿维菌素、高效氯氟氰菊酯、丙溴磷、高效氯氰菊酯作用效果快且防治效果好,尤其是4000倍甲氨基阿维菌素和5000倍高效氯氟氰菊酯处理后第三天,其对棉铃虫的致死率达100%;多杀菌素和甲氧虫酰肼作用效果稍差.若在棉铃虫卵高峰期适时施药,供试的6种药剂均可作为防治棉铃虫的高毒农药替代品种.7.学位论文杨国荣印楝固体组织培养条件及对印楝素含量的影响2005本论文主要进行了细胞工程开发印楝活性物质——印楝素的前期研究工作，研究发现，印楝叶片、茎段的愈伤组织诱导率都较高，放置半年以上的种仁的愈伤组织诱导率则较低。综合考虑愈伤组织诱导率和生长情况，以采用MS培养基为最好；固体培养最佳的因素组合是B5+NAA(1.0)+IBA(1.0)+ABA(1.0)。各种外植体来源的愈伤组织都出现了较高的印楝素含量，但它们所要求的培养条件不同。MS培养基培养的愈伤组织的印楝素含量对影响因子表现出较大的变化范围；而B5条件下则变化范围较小。ABA是影响愈伤组织生长和印楝素含量的一个关键因子。印楝的组织培养pH值在6.0附近最好，光照采用14h光照/10h黑暗最好。8.会议论文赵德.刘峰.慕卫.马超.陈召亮生物测定中30种杀虫剂母液的配制方法本文介绍了浸渍法生物测定中30种常用杀虫剂母液的配制方法。文章指出，对于杀虫剂原油以及在环己酮中溶解度高的固体原药可配制成1﹪的水乳剂或微乳剂母液；对于选择溶剂困难的固体原药可配制成1﹪水悬浮剂母液。上述母液体系组成简单,减少了有机溶剂、表面活性剂等对毒力测定结果的干扰,便于提高生测结果的可靠性和可比性。9.学位论文王一杰多种杀虫剂的生物测定及微乳液的研制2006本论文来源与高毒农药替代项目，主要以农业部药检所提供的高效低毒杀虫剂为主要研究药剂，在山东省农业科学院植物保护研究所进行了这些药剂防治棉蚜和棉叶螨的生物活性测定。由于我国农药剂型大多数为乳油和可湿性粉剂，不仅浪费了大量的能源也给环境造成了巨大的危害，所以作者又进行了环保型剂型——微乳剂的研制。其主要研究内容如下：1筛选出了防治棉蚜生物活性最高的药剂有：阿维菌素、吡虫啉、丁硫克百威、啶虫脒、甲胺基阿维菌素和丁醚脲，它们的LC50都在10mg/L(10ppm)以下，防治蚜虫生物活性比较好的药剂有霸螨灵、双甲脒、丙溴磷、喹硫磷、吡蚜酮、三唑磷和倍硫磷。上述说的各种药剂对蚜虫的生物活性均高于甲基对硫磷、久效磷和甲胺磷，所以这些药剂均可以作为防治棉蚜的高毒农药替代的备选药剂。2筛选出了防治棉叶螨生物活性最高的药剂有：阿维菌素、噻螨酮、甲胺基阿维菌素、霸螨灵、哒螨灵、浏阳霉素和多杀菌素，它们的LC50都在10mg/L(10ppm)以下，防治棉叶螨很好的药剂有：联苯菊酯、双甲脒和四螨嗪。上述说的各种药剂的对蚜虫的生物活性均高于甲基对硫磷、甲胺磷，所以这些药剂均可以作为防治棉叶螨高毒农药替代的备选药剂。3根据单剂的筛选LC50结果，又进行了阿维菌素和毒死蜱、喹硫磷和啶虫脒、喹硫磷和双甲脒、啶虫脒和吡蚜酮、啶虫脒和丁醚脲、阿维菌素和喹硫磷、霸螨灵和喹硫磷、阿维菌素和霸螨灵等药剂的8种混配试验，试验结果表明，喹硫磷和双甲脒、阿维菌素和霸螨灵、阿维菌素和喹硫磷三种二元混配的共毒系数都大于120，均表现出了良好的增效作用，阿维菌素和毒死蜱、啶虫脒和吡蚜酮、喹硫磷和啶虫脒只有在特定的比例下才显示出了增效作用，而啶虫脒和丁醚脲、霸螨灵和喹硫磷的各种比例都是完全拮抗的，其共毒系数均小于80。4根据啶虫脒和吡蚜酮的增效作用，把配置好的水剂进行了田间药效试验，实验结果表明基本上与室内毒力测定的结果相符。5根据阿维菌素和毒死蜱特定比例的增效作用，以及阿维菌素和毒死蜱的理化性质符合配置微乳剂的要求，作者进行了阿维菌素和毒死蜱微乳剂的研究和配制，确立了配制阿维菌素·毒死蜱微乳剂的较佳的配方组成及质量控制指标，并对阿维菌素·毒死蜱微乳剂HPLC分析方法进行了研究。10.期刊论文董向丽.高晓明.邢小霞.李桂舫.才秀华.王思芳.DONGXiang-li.GAOXiao-ming.XINGXiao-xia.LIGui-fang.CAIXiu-hua.WANGSi-fang敏感指示菌用于农药残留检测初探-莱阳农学院学报2006,23(4)本研究测定了酵母菌株A、B、C及苹果腐烂病菌(Valsamali)对硫酸铜(铜离子)、多菌灵和代森锰锌的敏感性.结果表明:酵母菌株A、B、C对代森锰锌均较敏感,EC50分别是0.13mg/L、0.06mg/L和0.06mg/L,远低于GB16333-1996中规定的水果蔬菜中35mg/kg的最大残留限量;苹果腐烂病菌对多菌灵具有较高的敏感性,EC50为0.0225mg/L,远低于GB14870-94中规定的最大残留限量0.5mg/kg;酵母菌株A、C及苹果腐烂病对Cu2+敏感,其EC50均小于我国食品卫生标准中规定的水果蔬菜中最大残留限量10mg/kg.这些结果表明,应用敏感菌系检测农产品中农药残留是否超标是可行的.本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Conference_222850.aspx下载时间：2010年5月20日