P53和Ki67检测结直肠癌组织的病理诊断探讨

     P53和Ki-67检测结直肠癌组织的病理诊断探讨                  摘要：目的：对p53和Ki-67检测结直肠癌组织病理诊断进行分析。方法：以2018年1月至2020年10月本院病理科存档结直肠癌手术标本76例作为研究对象，分析其临床资料。结果：在结直肠癌组织中，P53蛋白存在65.8%(50/76)的阳性表达率；Ki-67蛋白的结直肠癌组织有94.7%(72/76)的阳性表达率。结论：本研究联合检测P53和Ki-67对评估结直肠癌进展、预后、新辅助及辅助化疗效果有利，这成为结直肠癌的个性化治疗及分子靶向治疗的科学依据。关键词：p53和Ki-67检测；结直肠癌；组织；病理诊断近年来，伴随着经济的快速发展和人们饮食结构的不断变化，导致大肠癌的发病率在我国呈现不断升高的趋势。结直肠癌的产生与发展是与肠上皮细胞的凋亡和增殖速度关系密切，这个过程有多种基因和信号蛋白参与，P53基因在其中的作用，其通过细胞周期的调控来增殖与分化细胞，这对肿瘤的形成与发展作用极大。Ki-67是核抗原，关系到细胞增殖，对人体组织和细胞增殖的评估，这是一项简单而可靠的。在肿瘤细胞的增殖与分化过程中，均有3、Ki-67的参与[1]。本研究对结直肠癌组织中P53及Ki-67蛋白的表达采用免疫组化法检测法，并对其与临床病理特征之间的关系做进一步的分析。⒈资料与方法1.1一般资料以2018年1月至2020年10月本院病理科存档结直肠癌手术标本76例作为研究对象，术前全部病例未行放疗、化疗等临床治疗。并选取同病例癌旁正常肠黏膜76例进行对照。临床病理分期是以国际抗癌联盟/美国癌症联合会(UICC/AJCC)第8版消化道肿瘤TNM分期系统为依据。1.2试剂与方法常规采用4%甲醛溶液充分固定所送检手术标本，石蜡包埋后4μm厚连续切片，再作出苏木素-伊红(HE)染色及免疫组化标记。应用S-P免疫组化法，对每例EGFR(克隆号SP9)、P53(克隆号SP5)、Ki-67(克隆号MIB-1)蛋白表达进行分别检测，再进行阴性对照。本研究从福州迈新生物技术开发公司购入所用抗体及免疫组织化学试剂盒。1.3结果判断细胞核为P53和Ki-67阳性表达的定位。①依据染色强度和阳性细胞数对P53阳性程度判读进行评分：淡棕色1分、棕黄色2分，棕褐色3分；1分阳性细胞数≤25%、2分为26%～50%、3分为51%～74%、4分为≥75%；染色程度评分与阳性细胞数评分相加:阴性(-)为0～1分、弱阳性(+)为2～3分、中度阳性(++)为4～5分、强阳性(+++)为6～7分。②Ki-67阳性细胞按3个等级划分:阳性细胞数＜10%(-)为I级、10%～50%(+)为Ⅱ级，＞50%(++)为Ⅲ级。病理科医生2名独立完成评分过程。1.4统计学方法对χ2检验或Fisher的精确检验法、Pearson相关分析采用SPSS19.0软件。2结果2.1P53和Ki-67在结直肠癌和癌旁组织的表达在结直肠癌组织中，P53蛋白存在65.8%(50/76)的阳性表达率,但在癌旁正常肠黏膜组织的表达仅仅为5.3%(4/76)，其差异具备统计学方面的意义（χ2=70.908，P=0.000)。而Ki-67蛋白的结直肠癌组织有94.7%(72/76)的阳性表达率，在癌旁正常肠黏膜组织内，细胞核染色在腺体颈部极少，其有3.9%(3/76)的阳性表达率，其差异具备统计学方面的意义（χ2=158.703，P=0.000)。P53与Ki-67蛋白在结直肠癌组织有23例(30.3%)的同时阳性表达。2.P53和Ki-67蛋白表达与结直肠癌临床病理特征之间关系P53和Ki-67蛋白阳性表达与肿瘤分化程度、TNM分期及淋巴结有无转移有显著相关性，也就是其阳性表达率随肿瘤进展而增高(P＜0.05)；与患者年龄、性别、大体类型不存在相关性(P＞0.05)。详见下表1。表1P53和Ki-67蛋白阳性表达与临床病理特征的关系(n)临床病理参数n阳性χ2值P值阳性χ2值P值性别0.160.7450.2070.649男362235女403141年龄0.6530.4190.9260.336≥60442022323354大体类型4.4840.1060.4560.796隆起型17515溃疡型433844浸润型161017分化程度7.6380.02215.4930.000高分化344中分化603559低分化131313TNM分期8.6640.03412.9220.005I423II302531II392442IV32淋巴结转移0.0180.0240.0260.041无302328有4630482.3P53与Ki-67表达的相关性在结直肠癌组织中Ki-67与P53表达不存在相关性（r=0.049,P=0.654）。3讨论P53基因对人体细胞增值与凋忘非常重要，存在野生与突变两个分型。在人体正常细胞中，野生型P53基因发挥重要的抑癌作用，其通过与细胞周期蛋白结合形成复合体形成作用机制，蛋白激酶(CDK)活性受到抑制细胞的周期性依赖，细胞在G1期停滞或导致细胞程序性死亡[2]。因半衰期比较短,野生型P53不易被免疫组织化学检测。一旦机体细胞改变自身机体或遭到物理、化学因素刺激，野生型P53基因就会改变自身空间结构,向癌基因(即突变型P53)转变，CDK活性的功能受到抑制,其调控机体细胞增殖、凋亡和DNA修复机能丧失,带来抑制肿瘤形成的生物学特性丧失,机体细胞增殖及恶性转化加剧。由此可把突变型P53作为结直肠癌浸润、转移能力的一项判断指标。因突变型P53蛋白的半衰期长且难水解，目前，仅有突变型P53可被S-P免疫组化法检测到。本研究结果证实，P53蛋白表达水平与结直肠癌的分化程度、TNM分期、淋巴结转移呈显著相关性。Ki-67属于核基质，为MKI-67基因编码核蛋白，对染色体支架的组成有参与性，是DNA复制基础，具有非组蛋白特点，其功能与细胞关系密切。本研究证实，在肿瘤细胞中，Ki-67表达是伴随肿瘤细胞分化程度表达从高到低、TNM分期增高及淋巴结转移，显著增高Ki-67的表达指数。Ki-67表达水平是肿瘤细胞增殖状态的反映，可成为一项判断结直肠癌生物学行为的指标。本研究联合检测P53和Ki-67对评估结直肠癌进展、预后、新辅助及辅助化疗效果有利，这成为结直肠癌的个性化治疗及分子靶向治疗的科学依据。参考文献[1]温玉婷，王艳华.结肠癌P53、nm23免疫组化表达特征及与临床病理的关联分析[J]．标记免疫分析与临床，2018;4(25):552-5.[2]焦俊霞，叶晓霞.EGFＲ、P53、Ki-67在结直肠癌中表达及临床病理学意义[J].中国老年学杂志,2020(10):2065-2068. -全文完-