HPLC法测定酒石酸溴莫尼定滴眼液的

HPLC法测定酒石酸溴莫尼定滴眼液的 ３８ 食品与药品Food and Drug２００６年第８卷第０１Ａ期 ＨＰＬＣ法测定酒石酸溴莫尼定滴眼液的含量 税庆华１，刘 燕２，李小平１，于盛茂２ 济南２５００１４； 采用Ｃ１８柱。甲醇－０．０５　ｍｏｌ／Ｌ枸橼酸（三 （１．山东博士伦福瑞达制药有限公司，山东 ２．山东省生物药物研究院，山东 摘 要：目的 建立用ＨＰＬＣ法测定酒石酸溴莫尼定滴眼液含量的方法。方法 济南２５０１０８） 酒石酸溴莫尼定浓度在１０．６～１０５．６　ìg／ｍｌ范 乙胺调节ｐＨ　３．０）－水（１２：３０：５８）为流动相；检测波长为２４６　ｎｍ。结果此法可用于测定酒石酸溴莫尼定的含量。 关键词：ＨＰＬＣ；酒石酸溴莫尼定滴眼液；含量测定中图分类号：Ｒ９８８．１ 文献标识码：Ａ 围内与峰面积呈良好的线性关系（ｒ＝０．９９９　９）；最低检测限为０．１０　ｎｇ；平均回收率为１００．１％，ＲＳＤ为０．４４％。结论 文章编号：１６７２－９７９Ｘ（２００６）０１－００３８－０３ Ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｂｒｉｍｏｎｉｄｉｎｅ　ｔａｒｔｒａｔｅ　ｅｙｅ　ｄｒｏｐｓ　ｂｙ　ＨＰＬＣ ＳＨＵＩ　Ｑｉｎｇ－ｈｕａ１，　ＬＩＵ　Ｙａｎ２，　ＬＩ　Ｘｉａｏ－ｐｉｎｇ１，　ＹＵ　Ｓｈｅｎｇ－ｍａｏ２ （１．　Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ｂ＆Ｌ　Ｆｒｅｄａ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｃｏ．，　Ｌｔｄ．，　Ｊｉｎａｎ　２５００１４，　Ｃｈｉｎａ；２．　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｂｉｏｐｈａｒｍｃｅｕｔｉｃｌｓ　ｏｆ　Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ｐｒｏｖｉｎｃ，　Ｊｉｎａｎ　２５０１０８，　Ｃｈｉｎａ） Abstract: Objective To establish a HPLC method for the determination of the content of brimonidine tartrate eyedrops. Methods Waters Symmetry C18 column was used with the mobile phase consisting of a mixture ofmethanol(0.05 mol/L),citric acid(pH 3.0 adjusted by triethylamine) and water(12:30:58). The detection wavelengthwas at 246 nm. Results The detection limit was 0.10 ng(246 nm). The standard curve was linear in range from 收稿日期：２００５－０８－０７ 作者简介：税庆华（１９６０－），女，副主任药师 管长入，增加了眼台脱出的机率。因此我们认为，对行眼内容物剜除的患者，采用肌锥内眼台植入更为合理。 文献报道，眼台脱出的时间平均为２３个月，脱出率达２．６％。据我们的观察，本组３４只眼中，２例发生了眼台脱出，眼台脱出的时间从术后６个月到术后１８个月不等。可以采取自体颞肌筋膜或扩筋膜移植修补眼台。我们采取扩筋膜移植进行眼台修补，手术效果良好［１，３］，无１例患者再次发生眼台脱出或暴露。 眼台植入后会有不同程度的感染率，感染时间从术后１４　ｄ到术后３年不等［４］，如果术后持续眼疼、结膜充血，甚至有脓性分泌物流出，往往是感染的征象，合并感染者常须取出眼台，等感染控制后再行ＩＩ期眼台植入术，否则炎症不易控制。本组３４例患者无１例发生术后感染，证实采用这两种方法 进行眼台植入安全可靠。 采用异体巩膜壳包裹的眼台植入或眼台眼肌锥内植入术，手术方法简便易行，手术效果良好，可以根据临床需要选用。参考文献 ［１］Ｎｏｒｄａ　ＡＧ，　Ｍｅｙｅｒ－Ｒｕｓｅｎｂｅｒｇ　ＨＷ．　Ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ　ｗｉｔｈ　ｏｒｂｉｔａｌ ｉｍｐｌａｎｔｓ　ｉｎ　ｐａｒｔｉｃｕｌａｒ　ｗｉｔｈ　ｐｏｒｏｕｓ　ｈｙｄｒｏｘｙａｐａｔｉｔｅ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ［Ｊ］．　Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｅ，　２００３，１００（６）：　４３７－４４４． ［２］Ｒｏｂｅｒｔ　ＰＹ，　Ｒｕｌｆｉ　Ｊ，　Ａｄｅｎｉｓ　ＪＰ．　Ｎｅｗ　ｃｅｒａｍｉｃ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ　ｆｏｒ　ｕｓｅ ｉｎ　ａｎｏｐｈｔｈａｌｍｉａ　ｓｕｒｇｅｒｙ［Ｊ］．　Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｅ，　２００３，　１００（７）：５０３－５０６． ［３］Ｓａｇｏｏ　ＭＳ，　Ｏｌｖｅｒ　ＪＭ．　Ａｕｔｏｇｅｎｏｕｓ　ｔｅｍｐｏｒａｌｉｓ　ｆａｓｃｉａ　ｐａｔｃｈ ｇｒａｆｔ　ｆｏｒ　ｐｏｒｏｕｓ　ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ　（Ｍｅｄｐｏｒ）　ｓｐｈｅｒｅ　ｏｒｂｉｔａｌ　ｉｍ－ｐｌａｎｔ　ｅｘｐｏｓｕｒｅ　［Ｊ］．　Ｂｒ　Ｊ　Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ，　２００４　，　８８（７）：　９４２－９４６．［４］Ｙｏｕ　ＪＲ，　Ｓｅｏ　ＪＨ，　Ｋｉｍ　ＹＨ，　ｅｔ　ａｌ．　Ｓｉｘ　ｃａｓｅｓ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ　ｐｏｒｏｕｓ　ｏｒｂｉｔａｌ　ｉｍｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．　Ｊｐｎ　Ｊ　Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ，　２００３，　４７（５）：５１２－５１８． 食品与药品Food and Drug２００６年第８卷第０１Ａ期 ３９ 酒石酸溴莫尼定是一种新型、高效á2受体选择性的降眼压药物，对á2受体的亲和力为á2受体的１　０００倍，对á2受体的选择性比可乐定高７～１２倍，比阿普可乐定高２３～３２倍［１］。溴莫尼定除具有较好的降眼压效果外，还有潜在的神经保护作用，这无疑对治疗青光眼及保护视神经是一个福音［２］。本品可单独应用、替代或与其它抗青光眼药联合应用，长期使用安全、有效，且具有较好的耐受性［３］。我们建立了用ＲＰ－ＨＰＬＣ法测定酒石酸溴莫尼定滴眼液含量的方法，此方法简便，专属性强，结果准确。１ 仪器与材料 Ｗａｔｅｒｓ高效液相色谱仪；Ｗａｔｅｒｓ　９９６　ＰＤＡ检测器；Ｍ ３２ 图１　对照品色谱图 １．１仪器 色谱软件。 图２　供试品色谱图 １．２试药及试剂 酒石酸溴莫尼定对照品和酒石酸溴莫尼定滴眼液（山东博士伦福瑞达制药有限公司）。 甲醇为色谱纯，其他试剂为分析纯。２２．１ 方法与结果对照品溶液的制备 精密称取经１０５℃干燥至恒重的酒石酸溴莫尼定对照品适量，加水溶解并稀释制成每１　ｍｌ中含２０ìg的溶液，摇匀，即得。２．２ 供试品溶液的制备 精密量取本品适量，加水稀释并制成每１　ｍｌ中约含２０ ìg的溶液，摇匀，即得。２．３色谱条件 色谱柱：Ｗａｔｅｒｓ　Ｓｙｍｍｅｔｒｙ　Ｃ１８　，５　ìm，３．９×1５０ｍｍ不锈钢填充柱；柱温：３５℃；流速：１．０　ｍｌ／ｍｉｎ；流动相：甲醇－０．０５　ｍｏｌ／Ｌ枸橼酸（三乙胺调节ｐＨ３．０）－水（１２：３０：５８）；检测波长：２４６　ｎｍ；进样量；２０　ìl。理论板数按酒石酸溴莫尼定应不低于２０００。对有条件性破坏的供试品（高温、光照、强酸、强碱、氧化），其主峰与杂质可获得基线分离。酒石酸溴莫尼定对照品、供试品及高温破坏后测定的ＨＰＬＣ图谱见图１～３。流动相及空白辅料溶液无干扰测定。 图３　供试品高温破坏色谱图 ２．４检测波长的确定 由Ｗａｔｅｒｓ　９９６　ＰＤＡ检测器于２００～４００　ｎｍ范围内绘制的紫外光谱图显示，酒石酸溴莫尼定对照品及供试品均在２４６　ｎｍ处有最大吸收峰，因此确定检测波长为　２４６　ｎｍ。２．５线性关系试验 精密称取酒石酸溴莫尼定对照品５２．８　ｍｇ，置５０　ｍｌ量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，分别量取０．５０，　０．７５，　１．００，　１．２５，　２．５０，　５．００　ｍｌ于６个２５ｍｌ量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，分别取２０　ìl注入液相色谱仪，色谱图及峰面积（见１），以峰面积（Ａ）对浓度（Ｃ）作回归分析，得线性回归方程为Ａ＝　６９　２５９．６　Ｃ　＋３５　５４３．２６（ｎ＝５），ｒ　＝０．９９９　９。表明酒石酸溴莫尼定在１０．６ìg／ｍｌ～１０５．６　ìg／ｍｌ 的浓度范围内线性关系良好。 ４０ 食品与药品Food and Drug ３ ２００６年第８卷第０１Ａ期样品测定 取３批样品，按２．２方法制备供试品溶液并测 经测定酒石酸溴莫尼定的检测限为０．１０　ｎｇ（Ｓ／Ｎ＝３）。 表１ 线性试验结果 定其含量，结果见表３。 表３　　各样品含量的测定结果 ＃　峰面积为两次测定的平均值２．６精密度试验 取线性关系试验项下的３号溶液，连续进样６次，记录色谱图及峰面积。经计算平均峰面积为１ ４ 讨论 文献［４］中提供的流动相为乙腈－０．１　ｍｏｌ／Ｌ三乙胺 ５２８　４８６，相对偏差为０．６３％，表明此色谱条（磷酸调节ｐＨ为３．２）（１０　：　９０）。为避免使用价格件精密度较好。较高的乙腈，我们重新选择流动相，并对磷酸二氢２．７稳定性试验 取精密度试验项下的溶液，分别于配制后０，　２，４，　８，　２４　ｈ测定，记录色谱图及峰面积，结果供试品 氨及枸橼酸系统进行了对比研究。结果发现，选用枸橼酸系统为流动相时，酒石酸溴莫尼定主峰对称性好、柱效高、出峰时间较短。系统适用性和专 溶液配制后２４　ｈ内稳定，其相对标准偏差为０．６５％。属性实验表明，本法可满足酒石酸溴莫尼定滴眼液２．８重现性试验含量的测定。经测定有条件（高温、光照、强 取同一批样品，按“2．２”项下的方法制备６份供试品溶液，按上述色谱条件测定含量，结果６份样品的平均含量为９９．０７％，相对标准偏差为０．５２％。２．９回收率试验 精密称取对照品适量，加水溶解并稀释制备成每１　ｍｌ中含２０　ìg的溶液，摇匀；另精密称取酒石酸１００％、１２０％的供试品溶液，再分别用水稀释制成每１ｍｌ中分别约含１６，　２０，　２４　ìg的溶液（共９份），摇匀；依法测定，平均回收率为１００．１％，相对平均偏差为０．４４％，结果见表２。 表２ 回收率试验结果 酸、强碱、氧化）破坏的供试品，其主峰与杂质峰可获得基线的分离，各破坏样品项下的分离度均大于１．５，符合中国药典２００５年版二部对分离度的要求。参考文献 ［１］张翠莲．　酒石酸溴莫尼定［Ｊ］．　青海新闻网，　２００１，５：２１． ２０００，３６（３）：１９２－１９６． ［３］Ｌｅｅ　ＤＡ，　Ｇｏｒｎｂｅｉｎ　Ｊ，　Ａｂｒａｍｓ　Ｃ．　Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ　ａｎｄ　ｓａｆｅｔｙ ｏｆ　　ｂｒｉｍｏｎｉｄｉｎｅ　ａｓ　ｍｏｎｏ－，　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ，　ｏｒ　ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔｔｈｅｒａｐｙ　ｆｏｒ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｐｒｉｍａｒｙ　ｏｐｅｎ－ａｎｇｌｅ　ｇｌａｕｃｏｍａ　ｏｒｏｃｕｌａｒ　ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ：　Ａ　ｐｏｓｔ　ｈｏｃ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ａｎ　ｏｐｅｎ－ｌａｂｅｌｃｏｍｍｕｎｉｔｙ　ｔｒｉａｌ　［Ｊ］．　Ｊ　Ｏｃｕｌ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，　２０００，　１６（１）：　３－１８．［４］Ｋａｒａｍａｎｏｓ　ＮＫ，　Ｌａｍａｒｉ　Ｆ，　Ｋａｔｓｉｍｐｒｉｓ　Ｊ，　ｅｔ　ａｌ．　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ　ａｎ　ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ　ｔｈｅ　ａｌｐｈａ　２－ａｄｒｅｎｅｒｇｉｃｒｅｃｅｐｔｏｒ　ａｇｏｎｉｓｔ　ｂｒｉｏｍｉｎｉｄｉｎｅ　ｉｎ　ｂｌｏｏｄ　ｓｅｒｕｍ　ａｎｄ　ａｑｕｅｏｕｓ　ｏｆｔｈｅ　ｅｙｅ　［Ｊ］．　Ｂｉｏｍｅｄ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．　 １９９９，　１３：　８６－８８． 溴莫尼定原料适量，加辅料溶液制成处方量８０％、［２］葛坚．　青光眼的研究进展与发展趋势［Ｊ］．　中华眼科杂志，