维生素C综述

药物分析设计性实验维生素C及其制剂的质量控制研究2015年4月维生素C及其制剂的质量控制研究摘要：维生素C又叫L-抗坏血酸，是一种水溶性维生素，能够治疗坏血病并且具有酸性,所以称作抗坏血酸。维生素C广泛存在于各种食品、药物之中，特别在新鲜的水果和蔬菜中含量丰富。它影响胶元蛋白的形成，参与人体多种氧化-还原反应。维生素C主要作用是维持血管弹性，增强毛细血管抵抗力，降低其脆性与通透性，并促进其细胞增生和防止血细胞凝集。在提高免疫力，预防癌症、心脏病、中风，保护牙齿和牙龈等起来很重要的医疗保健作用。因此，在维生素C药物生产过程中需做好质量控制研究，产品的含量测定也应严格把关。《中国药典》（2010年版）收载有维生素C原料药及其片剂、泡腾片、颗粒剂和注射剂。维生素C的含量测定方法有碘量法，2，6—二氯靛酚滴定法，紫外分光光度法等。本文对近年来有关维生素C的测定方法进行了综述。 关键词：维生素C；含量测定；制剂；质量控制维生素C是人体的一种不可缺少的营养物质，人体正常每天最低需摄入量为75mg，中、晚期孕妇及乳母每天维生素C的摄入量甚至达130mg。维生素C在体内参与多种生物代谢反应，如参与氧化还原过程，在生物氧化和还原作用以及细胞呼吸中起重要作用。另外也可用于增强机体抵抗力，预防和治疗各种急、慢性疾病，坏血病等。此外，作为病后恢复期和过敏性疾病的辅助治疗也有一定的疗效。维生素C主要存在于各种新鲜水果及蔬菜中，含量各不相同。水果中以猕猴桃含量最多，在柠檬、桔子和橙子中含量也非常丰富；蔬菜以辣椒中的含量最丰富，在番茄、甘蓝、萝卜、青菜中含量也十分丰富，野生植物以刺梨中的含量最丰富，每100克中含量达841.58～3541.13毫克，是柑橘的50倍，猕猴桃的10倍，素有“维生素C王”之称[1]。维生素C广泛用于人群中，所以非常有必要对它进行严格规范管理和质量控制。 1、维生素C中文名称：维生素英文名称：vitaminC其他名称：抗坏血酸(ascorbicacid)分子式：C6H8O6分子量：176.13IUPAC名：2，3，5，6-四羟基-2-己烯酸-4-内酯本品为L-抗坏血酸，含C6H8O6不得少于99.0%1.1性状：本品为白色结晶或结晶性粉末；无臭，味酸；久置色渐变微黄；本品在水中易溶，水溶液显酸性。在乙醇中略溶，在三氯甲烷或乙醚中不溶。还原性：分子中的烯二醇基具有还原性，能被I2定量地氧化成二酮基。熔点：本品的熔点（附录VIC）为190-192。C。熔融时同时分解。比旋度：取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.10g的溶液，依法测定（附录VIE），比旋度为+20.5。至+21.5。。紫外吸收：本品具有共轭结构，在稀盐酸溶液中于243nm波长处有最大吸收，E1%1cm为560，可用于鉴别和含量测定。若在中性或者碱性条件中，最大吸收波长红移至265nm。1.2鉴别取本品0.2g，加水10ml溶解后，照下述方法试验。1.2.1取溶液5ml，加硝酸银试液0.5ml，即生成银的黑色沉淀。1.2.2取溶液5ml，加二氯靛酚钠试液1-2滴，试液的颜色即消失。1.2.3本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（中国药典光谱集450图）一致。1.3检查1.3.1溶液的澄清度与颜色取本品3.0g，加水15ml，振摇使溶解，溶液应澄清无色；如显色，将溶液经4号垂熔玻璃漏斗滤过，取滤液，照分光光度法，在420nm的波长处测定吸收度，不得过0.031.3.2草酸取本品0.25g，加水4.5ml，振摇使维生素C溶解，加氢氧化钠试液0.5ml、稀醋酸1ml与氯化钙试液0.5ml，摇匀，放置1h，作为供试品溶液；另精密称取草酸75mg，置500ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，加稀醋酸1ml与氯化钙试液0.5ml，摇匀，放置1h，作为对照溶液。供试品溶液产生的浑浊不得浓于对照溶液（0.3%）1.3.3炽灼残渣炽灼残渣不得过0.1%。1.3.4铁取本品5.0g两份，分别置25ml量瓶中，一份中加0.1mol/L硝酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液(B)；另一份中加标准铁溶液（精密称取硫酸铁铵863mg，置1000ml量瓶中，加1mol/L硫酸溶液25ml，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀）1.0ml，加0.1mol/L硝酸溶液溶解并稀释至刻度，作为对照溶液(A)。照原子吸收分光光度法，在248.3nm的波长处分别测定，应符合规定。1.3.5铜取本品2.0g两份，分别置25ml量瓶中，一份中加0.1mol/L硝酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液(B)；另一份中加标准铜溶液（精密称取硫酸铜393mg，置1000ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀）1.0ml，加0.1mol/L硝酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液(A)。照原子吸收分光光度法，在324.8nm的波长处分别测定，应符合规定。1.3.6重金属取本品1.0g，加水溶解成25ml，依法检查（《中国药典》附录ⅧH第一法），含重金属不得过百万分之十。1.3.7细菌内毒素取本品，加碳酸钠（170度加热4h以上）适量，使混合，依法检查（中国药典），每1mg维生素C中含内毒素的量应小于0.02EU（供注射用）[2]。1.4含量测定本品为L-抗坏血酸。含C6H8O6不得少于99.0%。取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液(0.1mol/L)滴定，至溶液显蓝色并在30秒钟内不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6。1.5贮藏遮光，密封保存。1.6制剂（1）维生素C片（2）维生素C泡腾片（3）维生素C泡腾颗粒（4）维生素C注射液（5）维生素C颗粒中西药分类：西药（包括化学药品、生物药品、抗生素、放射性药品、药用辅料）药理作用：维生素类药2、维生素C片2.1碘量法本品为白色或略带淡黄色片。含维生素C（C6H8O6）应为标示量的93.0%--107.0%。取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于维生素C0.2g），置100ml量瓶中，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml的混合液适量，振摇使维生素C溶解并稀释至刻度，摇匀，经干燥滤纸迅速滤过，精密量取续滤液50ml，加淀粉指示液1ml，用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至溶液显蓝色并持续30秒不褪。每1ml碘滴定液（0.05mol/L）相当于8.806mg的C6H8O6[3].计算方法：--TVFW/W标示量%=————————*100%标示量碘量法是一种传统的容量分析法，主要利用维生素C在酸性条件下，可被碘定量氧化，根据消耗碘滴定液的体积，从而计算出维生素C含量。该方法可使用淀粉作为指示剂，当淀粉的溶液显蓝色时，即指示滴定终点。该方法操作简单，但应迅速完成，防止维生素C被空气所氧化，影响测定的精确度。另外，手工控制误差较大，且该反应需要特定指示剂为淀粉溶液。2.2紫外分光光度法2.2.1供试品溶液取本品20片精密称定，研细，精密称取适量(约相当于维生素C(0.05g)，置100ml量瓶中，加0．005mol/L硫酸液适量，振摇使维生素C溶解，加0.005mol/L硫酸液至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液；精密量取续滤液5ml置250ml量瓶中，用0．005mol/L硫酸液稀释至刻度，摇匀，即得2.2.2样品测定取供试品溶液，照紫外分光光度法在243nm波长处测定吸光度，按为560计算含量与《中国药典》采用的碘量法比较用紫外分光光度法测定维生素C片含量，方法操作简单、快速，结果准确，但操作费时[3]2.3薄层扫描法　2.3.1对照品溶液的配制精密称取维生素C标准品100mg，用缓冲溶液配成lmg/ml的标准溶液。精密称取维生素C标准溶液1、2、3、4、5ml，分别置于10ml容量瓶中，用缓冲溶液稀释至刻度。2.3.2样品的含量测定取维生素C片1O片，研细，精密称取平均片重一片的粉末，放入l00ml容量瓶中，加缓冲液至刻度，振摇，使维生素C溶解，放置、澄清，用吸液管取3ml移至10ml容量瓶中，用缓冲稀释至刻度。用5μl定量毛细管点样品溶液与不同浓度的标准液于同一试纸上，然后扫描测定峰面积，由工作曲线法计算维生素c片中的维生素C含量[4]用薄层扫描法测定维生素C片中的维生素C的含量，结果准确，重现性好，样品中的其它辅料不干扰。2.4红外分光光度法2.4.1样品的制备根据维生素C在水中易溶，在乙醇中略溶的性质，选择以无水乙醇做溶剂提取维生素C，取维生素C片1O片，研细，置锥形瓶中，加无水乙醇8OmL振摇使溶解，滤过，滤液水浴蒸干，残渣置硅胶干燥器内。2．4.2样品的含量测定取维生素C对照品及”2．4.1”项下样品，用溴化钾压片，测定红外吸收光谱。维生素C片与维生素C对照品的红外吸收光谱完全一致，并与国家药典委员会颁布的《药品红外光谱集》第一卷(1995年)中的维生素C标准光谱一致，因此，本法可作为维生素C片的鉴别方法之一[4]3、维生素C泡腾片3.1碘量法取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于维生素C0.2g），置100ml量瓶中，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml的混合液适量，振摇使维生素C溶解并稀释至刻度，摇匀，经干燥滤纸迅速滤过，精密量取续滤液50ml，加淀粉指示液1ml，用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至溶液显蓝色并持续30秒不褪。每1ml碘滴定液（0.05mol/L）相当于8.806mg的C6H8O6.3.2高效液相色谱法色谱条件：色谱柱:ApolloC18column(150mm×4.6mm,5μm,Alltech);流动相:甲醇/磷酸二氢钾缓冲液=75/25(V/V)用磷酸调pH到4.02(经0.45μm滤膜过滤);流速:0.8mL/min;检测波长:266nm;柱温:室温(30℃)样品处理：取一片泡腾饮片溶于小烧杯中(55℃水中),加入0.0113gEDTA作保护剂(防止VC被氧化),放置一会,使泡腾片产生的气体排尽,定容200mL水中,经0.45μm滤膜(水型)过滤后取4mL稀释至10mL.待测.标准溶液配制：精密称取0.2500g标准VC定容于250mL容量瓶中,配成1.000mg/mL的标准溶液,并加入0.0144gEDTA.。VC标准溶液每次使用前新配.标准工作曲线及相关性：分别准确移取不同体积的VC标准溶液(1.000mg/mL),配制成0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.15mg/mL、0.20mg/mL、0.25mg/mL、0.30mg/mL维生素C标准系列溶液.溶液经0.45μm滤膜过滤后,分别用微量进样器10μL测定后,以峰面积y(μVs)作因变量,以VC标准系列浓度x(mg/mL)作自变量进行线性回归,得线性回归方程[5]。4、维生素C注射液4.1碘量法本品为维生素C的灭菌水溶液，为无色至微黄色的澄明液体。可加适量的焦亚硫酸钠为稳定剂。含维生素C（C6H8O6）应为标示量的90.0%-110.0%。精密量取本品适量（约相当于维生素C0.2g），加水15ml与丙酮2ml，摇匀，放置5min，加稀醋酸4ml与淀粉指示液1ml，用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至溶液显蓝色并持续30秒不褪。每1ml碘滴定液（0.05mol/L）相当于8.806mg的C6H8O6。计算方法：TVF/Vs标示量%=————*100%标示量4.22，6二氯靛酚滴定法精密量取本品适量（约相当于维生素C50mg），置100ml量瓶中，加偏磷酸-醋酸试液20ml，用水稀释至刻度，摇匀；精密量取稀释液适量（约相当于维生素C2mg）置50ml锥形瓶中，加偏磷酸-醋酸试液5ml，用2，6二氯靛酚滴定滴定液滴定至溶液显玫瑰红色，并持续5s不褪色；另取偏磷酸-醋酸试液5.5ml，加水15ml，用2，6二氯靛酚滴定滴定液滴定，作空白试验校正。以2，6二氯靛酚滴定滴定液对维生素C滴定度计算即可。本法具有简便、快速、比较准确等优点，适用于许多不同类型样品的分析。缺点是不能直接测定样品中的脱氢抗坏血酸及结合抗坏血酸的含量，易受其他还原物质的干扰。另外，如果样品中含有色素类物质，将给滴定终点的观察造成困难4.3菲林B近红外分光光度法取两支10mL具塞比色管，其中一支加入适量的维生素C注射剂(在稀释后浓度小于50mg／L)，另一支不加；然后分别依次加入2mL的FolinB试剂，用pH3三氯乙酸溶液稀释至刻度，摇匀，反应5min后，以试剂空白为参比，使用lcm玻璃吸收池在920nm波长处测定吸光度A值。平行测量3次，取平均值。423标准曲线制备：分别准确配制浓度为0-50.0mg/L的维生素C系列标准工作液，按上述实验方法测定吸光度并根据标准曲线求出维生素C含量。本法是一种测定维生素C的新方法，它是基于FolinB试剂与抗坏血酸在pH=3的三氯乙酸酸性介质中反应生成脱氢抗坏血酸，该方法简单、快速、准确[7]5、维生素C颗粒Ch.P.(2010版)含量测定：取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取适量（约相当于维生素C0.2g），置100ml量瓶中，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml的混合液适量，振摇使维生素C溶解并稀释至刻度，摇匀，经干燥滤纸迅速滤过，精密量取续滤液50ml，加淀粉指示液1ml，用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至溶液显蓝色并持续30秒不褪。每1ml碘滴定液（0.05mol/L）相当于8.806mg的C6H8O6.6、维生素C钠Ch.P.(2010版)含量测定：取本品0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与1mol/L硫酸溶液15ml使溶解，加淀粉指示液2ml，立即用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至溶液显蓝色并持续30秒不褪。每1ml碘滴定液（0.05mol/L）相当于9.905mg的C6H7NaO6。维生素C的测定方法有很多种，各有各的优缺点，随着科技的发展，相信将来会有更多操作简便、选择性好、灵敏可靠、效率高、准确性高的分析方法。参考文献[1]百度百科维生素C[2]于治国，宋粉云.药物分析第2版..人民卫生出版社.2009，383-389[3]宋粉云.药物分析实验.中国医药科技出版社.2007，62-63[4]吕长淮.紫外分光光度法测定维生素C片的含量[J].安徽医药，2003，7（2）：146-146[5]中南药学李锐，李香凤2007年8月第5卷第4期CentralSouthPharmacy．August2007，Vo1．5No．4http://www.6lib.com/view_479779655585258331.html[6]胡晓娟,孟磊,黄晓书.泡腾饮品中维生素C的高效液相色谱法测定[J].河南科学，2005，23(3):363-364[7]逯家辉等．F0linB分光光度法测定蔬菜中维生素C的含量[J]．分析检测，2005，26(8)：171—172．