茶多酚治疗膜性肾小球肾炎机理的探讨（中药药理与临床99年第5期）

茶多酚治疗膜性肾小球肾炎机理的探讨 中药药理与临床 1999年第5期第15卷 实验研究 作者：董　群　吴敏毓　曲卫敏　刘　辉　孙瑞元 单位：董　群　吴敏毓　曲卫敏　刘　辉　皖南医学院　微生物学教研室；孙瑞元　药理学教研室　芜湖　 关键词： 茶多酚；免疫功能；SOD；GSH-PX 　　提　要　 目的：探讨茶多酚治疗肾炎的机理。 方法：小鼠灌胃茶多酚7天后测其免疫功能和抗氧化酶的活性。 结果：茶多酚可明显抑制小鼠腹腔巨噬细胞及其因子IL-1的活性和NO的生成；抑制小鼠脾细胞产生抗体的能力和血清CIC的含量；抑制小鼠脾细胞增殖反应和总T细胞花环和TH花环的形成。茶多酚还可增强小鼠红细胞SOD和血中GSH-PX的活性，抑制血清中LPO的生成。 结论：茶多酚抑制小鼠免疫功能、增强小鼠抗氧化酶的活性可能是其治疗肾炎的机理之一。 Study of the Mechanism of Curing Anti-membrane Glomerulonephritis by Tea Polyphenol Dong Qun, Wu Minyu, Qu Weimin, Liu Hui, Sun Ruiyuan 　　（Department of Microbiology,Wannan Medical College, Wuhu　241001） 　　Object: To study the mechanism of curing anti-membrane glomerulonephritis by Tea Polyphenol (TP).Method: Given orally TP of different dosage to mice for 7 days, the mice' immune function and enzyme activity correlating anti-oxygenation were detected.Result: TP could decrease the activities of peritoneal MΦ and IL-1, and the formation of nitric oxide (NO). TP could inhibit the antibody formation of spleen cell and the content of CIC in sera, and evidently decrease the percentage of the rosettes of T cell and TH cell, and proliferative reaction of spleen cell. TP could increase the activities of SOD in RBC and GSH-PX in blood, decrease the content of LPO in sera.Conclusion: TP could inhibit immune function of mice and promote the enzyme activities of anti-oxygenation. 　　Key words　Tes Polyphenol;immune function;SOD;GSH-PX 　　已有报道茶多酚可治疗家兔Masugi肾炎［1］，本实验从单核细胞的免疫功能、抗氧化酶的活性两方面探讨了茶多酚治疗肾炎的机理。 　　1　材料和方法 　　1.1　试验药物　茶多酚粉剂(含量＞99%)，浙江农业大学茶学系提供，溶于蒸馏水中灌胃。 　　1.2　实验动物　昆明小鼠8～12周龄，雌雄随机，体重21±2g，中国药科大学动物供应科供应。许可证号：苏动(质)95036。 　　1.3　试剂　RPMI 1640培养粉为美国Gibco Lab产品，批号14-4-97。MTT、硫代巴比妥酸(TBA)、四乙氧基丙烷、5，6-二硫-对二硝基苯甲酸(DTNB)均为Sigma公司。Tris-NH4Cl中的Tris购自华美生物公司，批号830227。茶碱购自上海试剂二厂，批号830310。 　　1.4　实验方法　小鼠随机分组后ig蒸馏水或药液0.2ml/10g连续7天后，次日上午眼眶取血，常规分离血清，另取腹腔液、脾备用。 　　1.4.1　腹腔巨噬细胞(MΦ)活性及分泌因子的测定　小鼠给药至第四天，腹腔注射6%淀粉肉汤1.5ml/只一次，再连续用药至第七天，无菌取腹腔液测MΦ活性［2］及白介素1(IL-1)［3］和一氧化氮(NO)［4］的活性。 　　1.4.2　免疫功能的测定　(1)小鼠脾细胞抗体生成能力采用薛昭华等［5］方法，于413nm处测OD值。(2)小鼠血清循环免疫复合物(CIC)含量的测定采用PEG沉淀法［6］，在450nm处测OD值。(3)小鼠脾细胞增殖活性见文献［7］。(4)小鼠T细胞亚群用茶碱法。 　　1.4.3　血中抗氧化酶活性和血清中过氧化脂质的含量测定　用邻苯三酚自氧化法测定小鼠红细胞SOD活性；用DTNB显色法测血中谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-PX)含量；用硫代巴比妥酸比色法测血清中LPO含量。 　　2　结果 　　2.1　茶多酚对小鼠腹腔MΦ活性的影响　茶多酚可明显抑制小鼠腹腔MΦ的活性和IL-1的活性，各实验组间差别不显著。中剂量与大剂量茶多酚可抑制NO的产生，见表1。 表1　茶多酚对小鼠腹腔巨噬细胞(MΦ)的活性和介质的影响　(±s) 组　　别 只 MΦ活性 　　(OD570nm) IL-1（OD570nm） NO（μmol／L） 蒸馏水　　 10 0.777±0.329 0.350±0.040 9.617±1.175 茶多酚(小) 13 0.482±0.090**△ 0.300±0.023** 9.183±0.351△ 茶多酚(中) 8 0.398±0.080** 0.290±0.038** 6.601±0.889* 茶多酚(大) 11 0.329±0.066** 0.290±0.019** 6.011±0.656** 地塞米松　 14 0.356±0.110** 0.289±0.015** 6.241±0.523** 　　与蒸馏水组相比 * P＜0.05, ** P＜0.01；与地塞米松组相比 △ P＜0.01；茶多酚小、中、大剂量分别为128mg/kg、255mg/kg、510mg/kg，下同2.2　茶多酚对小鼠脾细胞产生抗体能力和血清CIC含量的影响　大剂量茶多酚可以明显抑制小鼠脾细胞产生抗体的能力，中剂量组小鼠血清CIC的含量低于蒸馏水组，见表2。 表2　茶多酚对小鼠脾细胞产生抗体的能力和血清CIC含量的影响　(±s) 组　　别 只 QHS法 　　(OD413nm) CIC 　　（OD450nm） 蒸馏水　　 10 0.291±0.045 0.425±0.015 茶多酚(小) 13 0.251±0.048 0.401±0.082 茶多酚(中) 8 0.251±0.042 0.356±0.012* 茶多酚(大) 11 0.210±0.055** 0.325±0.045** 地塞米松　 14 0.223±0.061* 0.315±0.011** 　　与蒸馏水相比 * P＜0.05, ** P＜0.012.3　茶多酚对小鼠脾细胞ConA增殖活性、总T细胞花环率和TH花环率的影响　茶多酚可抑制小鼠脾细胞对ConA增殖活性，且随剂量增加抑制作用增强。茶多酚也可抑制小鼠总T细胞花环形成和TH花环的形成，见表3。 表3　茶多酚对小鼠脾细胞ConA增殖活性、T细胞花环率和TH花环率的影响 组　　别 只 增殖活性 　　(OD570nm) 总T细胞 　　花环率(%) TH细胞 　　花环率(%) 蒸馏水　　 9 0.336±0.089 26.30±2.80 66.42±6.67 茶多酚(小) 13 0.251±0.096 19.00±2.08** 59.23±10.00 茶多酚(中) 8 0.193±0.076* 18.88±1.54** 54.65±10.41* 茶多酚(大) 11 0.145±0.053** 11.73±1.76** 50.74±7.66** 地塞米松　 14 0.157±0.072** 14.50±2.80** 46.42±8.38** 　　与蒸馏水组相比 * P＜0.05, ** P＜0.012.4　茶多酚对小鼠血中抗氧化酶和血清中过氧化脂质含量的影响　茶多酚可增强小鼠血中SOD和GSH-PX的活性，降低小鼠血清中LPO的含量，见表4。 表4　茶多酚对小鼠SOD、GSH-PX活性和LPO含量的影响　(±s) 组　　别 只 SOD 　　(U/ml) GSH-PX 　　(μmol/L) LPO 　　(μmol/L) 蒸馏水　　 9 758±74 264±62 17.26±2.53 茶多酚(小) 13 745±69△ 286±44 15.39±2.37*△ 茶多酚(中) 8 782±86 313±23* 13.45±1.86* 茶多酚(大) 11 825±92* 345±45*△ 12.12±2.13** 地塞米松　 14 798±83 297±35 11.79±3.16** 　　与蒸馏水组相比 * P＜0.05, ** P＜0.01；与地塞米松组相比 △ P＜0.053　讨论 　　Masugi肾炎模型的病理变化类似膜性肾小球肾炎。目前已知膜性肾小球肾炎的发生机理与抗体的不断形成、免疫复合物的局部沉积、细胞免疫功能障碍、T细胞亚群的异常有关。本实验结果提示茶多酚有类似于地塞米松的作用，可抑制小鼠腹腔MΦ的活性，抑制MΦ分泌的炎性介质IL-1和NO的生成。茶多酚抑制小鼠脾细胞产生抗体，使血清中抗原抗体复合物(CIC)减少，沉积到肾小球基底膜上的免疫复合物也会相应减少，病情减轻。茶多酚能抑制小鼠脾细胞的增殖，降低总T细胞花环、TH细胞花环的形成率。茶多酚还可增强SOD和GSH-PX的活性，可保护细胞和细胞膜，缓解炎症。明显抑制LPO的生成，减少LPO对细胞结构及功能的严重损害，有利于炎症的恢复。本实验的结果显示，茶多酚可通过抑制小鼠的免疫功能，增强小鼠血中抗氧化酶的活性来达到治疗肾炎的目的。 　　参考文献 　　1　桂常青，洪宗元，杨解人，等.茶多酚治疗家兔Masugi肾炎模型.中国药理学通报，1998；14(5)∶467 　　2　陈哲生.噻唑蓝比色法用来研究人淋巴细胞和小鼠巨噬细胞的活性.上海免疫学杂志，1992；12(5)∶269 　　3　杨贵贞，主编.免疫生物工程纲要与技术.长春：吉林科技出版社，1991∶201 　　4　丁传林，胡晓玲，马思才，等.小鼠腹腔巨噬细胞诱生一氧化氮的实验研究.上海免疫学杂志，1998；18(1)∶28 　　5　薛昭华，刘延兵，蔡昌学，等.中药“抗炎6号”注射液抗感染作用机理的实验研究.武汉医学院学报，1984；25(5)∶344 　　6　沈玉清主编.免疫学和免疫检验学.北京：中国医药科技出版社，1989∶328 　　7　钱玉昆主编.实用免疫学新技术.北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1993∶11