巧克力的意义

分离纤维素分解菌实验操作步骤实验的具体操作步骤如下1.土样的采集土壤中的微生物，大约70%～90%是细菌。细菌适宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤中生长，绝大多数分布在距地表约3～8cm的土壤层。因此，土壤取样时，一般要铲去表层土。另外，土样的采集要选择富含纤维素的环境，这是因为在纤维素含量丰富的环境，通常会聚集较多的分解纤维素的微生物。2.选择培养3.富集培养在将样品稀释涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基之前，先通过选择培养增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物。富集培养所需要的仪器有：250ml锥形瓶、天平、药匙、玻璃棒、电炉、摇床、玻璃珠、称量纸等。选择培养基的制备比例见下：纤维素分解菌的选择培养基纤维素粉5gNaNO1g3NaHPO•7HO242KHPO24MgSO•7HO42KCl酵母膏水解酪素将上述物质溶解后,用蒸馏水定容到1000ml按上表比例配制50ml选择培养基。在250ml锥形瓶中装入50ml培养基，放5～6颗玻璃珠，用8层纱布做成瓶塞，将瓶口塞紧，再在瓶塞外包裹两层牛皮纸，用线绳扎紧，在121℃下高压蒸汽灭菌20min。称取土样20g，在无菌条件下加入装有50ml培养基的锥形瓶中。将瓶置于摇床上，在30℃下振荡培养3～4d，至培养基变浑浊。4．梯度稀释所需仪器：试管（7支）、移液器、枪头。需要先经高压蒸气灭菌的仪器：试管（每只内装9ml蒸馏水）、枪头（黄色、蓝色）。用量程为1000µL的移液管从富集培养土壤液中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的试管中充分混匀。然后换枪头从此试管中吸取1ml加入另一盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀，以此类推制成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6不同稀释度的土壤溶液。5.刚果红染色法分离与观察（涂布平板）所需仪器：无菌培养皿（12个）、涂布器（3个）、移液器、枪头、温箱等。需要灭菌的仪器：无菌培养皿（12个）、涂布器（3个）、移液器、枪头。（1）鉴别培养基的制备比例如下：鉴别纤维素分解菌的培养基CMC-Na5-10g酵母膏1gKHPO24琼脂15g土豆汁100ml将上述物质溶解后,用蒸馏水定容到1000ml按以上比例配制200ml鉴别培养基和10mg/ml的刚果红（CR）溶液，灭菌后，按照每200ml培养基加入1ml的比例往培养基中加入CR溶液，混匀后倒平板，凝固后待用。（2）涂布平板将上述已倒培养基的十个平板底面分别用记号笔写上10-4、10-5、10-6三种稀释度（每个稀释度写3个）和一个空白平板（留作对照用）。然后用移液器分别由10-4、10-5、10-6三管土壤稀释液中各吸取对号放入已写好稀释度的平板中，用无菌涂布器在培养基表面轻轻地涂布均匀，室温下静置5～10min，使菌液吸附进培养基。30℃倒置培养，至菌落长出，产生纤维素酶的菌落周围将会出现明显的透明圈。（3）菌落形态观察1～2d后，平板上长出菌落，并在个别菌落周围出现明显的透明圈。图表1空白图表210-4410图表310-5图表-6（4）划线分离将步（1）中的鉴别培养基加热熔化后倒入2个无菌平皿中，凝固后，用接种环挑取（3）中2种菌落在平板培养基上作连续划线。划线完毕后，盖上皿盖，倒置于温室培养，至长出单菌落。由此，即从土壤中分离纯化出纤维素分解菌。