何首乌多糖和枸杞多糖的协同抗衰老作用机制的实验研究

何首乌多糖和枸杞多糖的协同抗衰老作用机制的实验研究 何首乌多糖和枸杞多糖的协同抗衰老作用 机制的实验研究 第31卷第2期 2005年6月 兰州大学(医学版) JournalofLanzhouUniversity(MedicalSciences) Vo1.31NO.2 June2005 何首乌多糖和枸杞多糖的协同抗衰老 作用机制的实验研究 许爱霞,王彩琴,杨社华,葛斌,张振明 (甘肃省人民医院药剂科,甘肃兰州730000) 摘要:目的研究何首乌多糖和枸杞多糖的协同抗衰老作用及其机制.方法用两因素两水平正交法实验, 用I)-半乳糖制备衰老小鼠模型,试药组衰老小鼠分别灌胃5O:5O,50:200,200:50,200:200mg?(kg?d)何 首乌多糖:枸杞多糖,观察其对衰老模型小鼠免疫器官及抗氧化系统的影响.站杲试药组衰老小鼠分别灌胃不 同浓度比的何首乌多糖和枸杞多糖能使衰老模型小鼠胸腺指数和脾脏指数不同程度升高;肝,肾组织中MDA不同 程度下降,SOD及GSH—PX活力不同程度提高;脑组织中LF不同程度下降.统计学分析表明,何首乌多糖和枸杞 多糖对各实验指标有显着或极显着的协同作用.站论何首乌多糖和枸杞多糖联用有显着的协同抗衰老作用,两 药最佳组合为200mg:50mg.其机制可能与提高免疫功能,清除氧自由基,活性氧及抗脂质过氧化有关. 关键词:何首乌多糖;枸杞多糖;抗衰老;抗氧化 ThesynergisticeffectonantisenilityanditsmechanismofPFRandPBWF X己,A—xia,WANGCai—qin,YANGShe—hua,GEBin,ZHANGZhen—ruing (DepartmentofPharmaceutics,ThePeople'SHospitalofGansuProvince,Lanzhou,730000,China) [Abstract]ObjectiveTostudythesynergisticeffectanditsmechanismofapolysaccharide fromfleeceflowerroot(PFR)andapolysaccharidefrombarbarywolfberryfruit(PBWF)onanti— senility.Methods50PFR:50PBWFand50:200and200:50and200:200mg?(kg?d)一that weredesignedusingorthogonalmethodwereadministeredbygavagerespectivelyandtheireffects wereobservedonimmuneorganandantioxidationsystemofmousewithsenilemodelcausedby D-galatose(D-ga1).ResultsThymusindexandspleenindexdifferentlyrose,MDAdifferently dropped,activitiesofSODandGSH— PXdifferentlyascendedinliverandkidney,LFdifferently descendedinbrainofsenilemodelmousewhichadministered50PFR:5OPBWF,50:200,200: 50and200:200mg?(kg?d)_.respectivelyonceadayfor7weeks.Thestatisticalanalysisindi— catedthattheusingofcombinationPFRwithPBWFcouldyieldthenotableorextremelynotable reciprocaleffectonexperimentalindextoantisenility.ConclusionTheusingofcombinationPFR withPBWFexertsthenotablesynergisticeffectonantisenility.theoptimalcombinationofboth drugsis200mgPFR:50mgPBWF,itsmechanismprobablyconnectwithrisingimmunity.elimi— natingoxyenfreeradicalsandactiveoxyenandantilipoperoxidation. Keywords:PFR;PBWF;antisenility;mechanism;antilipoperoxidation 何首乌(fleeceflowerroot)为蓼科植物,具有滋 肝补肾,益精乌发功效.枸杞(barbarywolfberry fruit)为茄科植物,具有养肝补肾,益精明目功效. 何首乌多糖(apolysaccharidefromfleeceflower 收稿日期:2005-04—15. 基金项目:甘肃省中医药科研课题项目(2003一GZK一51). root,PFR)为何首乌有效成分,枸杞多糖(apoly— saccharidefrombarbarywolfberryfruit,PBWF)系 枸杞有效成分.本文依两因素两水平正交法设计 实验,用I)_半乳糖(D-ga1)制备衰老小鼠模型,观察 14兰州大学(医学版)第31卷 何首乌多糖和枸杞多糖联用对衰老模型小鼠胸腺 指数及脾脏指数的影响;对肝,肾组织中丙二醛 (MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧 PX)活力的影响;对脑组织中脂褐质 化物酶(GSH— (LF)的影响;旨在探讨何首乌多糖和枸杞多糖的协 同抗衰老作用及其机制. 1材料与方法 1.1试剂及动物 丙二醛测试盒,超氧化物歧化酶测试盒及谷胱 甘肽过氧化物酶测试盒为南京建成生物工程研究 所产品,其它试剂均为进口或国产分析纯级产品. 实验用昆明种清洁级小鼠,旱,7,8周龄,体重(21 ?2)g,由兰州生物制品研究所提供.何首乌多糖 和枸杞多糖由本院药理基地药物实验室制备. 1.2何首乌多糖和枸杞多糖的制备_】 河南产秋季采挖的何首乌干燥块根,宁夏产秋 季采摘的枸杞成熟果实,用蒸馏水浸泡,加热提取, 静置离心,浓缩至原体积30,浓缩液加入4倍体 积的95乙醇沉淀,沉淀物依次用无水乙醇,丙酮 及乙醚洗涤,用蒸馏水复溶,透析,Sevage法除蛋 白,DEAE一纤维素柱层析,收集洗脱液,常规干燥即 得. 1.3动物分组及给药 实验用昆明种清洁级小鼠70只,随机分为7 组,即对照组,模型组,阳性对照组及试药组.采用 灌胃法灌胃给药,试药1组,2组,3组及4组小鼠 分别灌胃何首乌多糖:枸杞多糖50:50,50:200, 200:50及200:200mg?(kg?d)_..阳性对照 组灌胃维生素E200mg?(kg?d)_.,模型组与对 照组灌胃相当量的对照液(只含防腐剂).给药同 时,模型组,阳性对照组和试药组小鼠每天颈背部 SCD-半乳糖(D-gaD1mg?g_.,对照组SC等量注 射用水,造模及给药7周后进行各项指标测定.1.4小鼠肝,肾组织中过氧化脂质降解产物MDA 的测定 用TBA比色法_3],肝,肾组织用Tris缓冲液 (pH7.4,10mmol?LTris—HCl,0.1mmol? LEDTA一2Na,10mmol?L蔗糖,0.80,4NaC1) 制备10组织匀浆,取肝匀浆,肾匀浆0.1mL,按 测试盒操作法加入试剂,反应终体积为4.2mL.反 应管振荡混匀,水浴中煮沸40min,3500r?min 离心10min,上清液于532nm处测吸光度(A)值. 1.5小鼠肝,肾组织中SOD活力的测定 用亚硝酸盐法?,肝,肾组织用Tris缓冲液制 备1组织匀浆,取肝或肾匀浆50L,按测试盒操 作法加入试剂,反应体积为1.8mL.反应管振荡 混匀,37?恒温水浴中温育40min,加入显色剂10 min后,于550nm处测A值. 1.6小鼠肝,肾组织中GSH-PX活力的测定 用DTNB法3,取1肝或肾匀浆及1mmol ? LGSH各0.2mL(对照管不含GSH),37?水 浴中预温5min,按测试盒操作法加入试剂,37?水 浴中反应5min,3500r?min离心10min,取上 清液加入显色剂,室温静置15min,于412nm处测 A值. 1.7小鼠脑组织中LF的测定 用Sohal法_6],取小鼠大脑100mg,加入2:1 氯仿一甲醇提取液2mL,充分匀浆,滤纸过滤,滤 渣用提取液洗涤,加提取液至5mL,测定荧光强度 (发射波长435nm,激发波长365nm). 1.8统计分析 组间数据显着性差异用t检验分析,协同药效 显着性差异用多因素多水平资料F检验分析. 2结果 2.1PFR和PBWF对D-gai致衰老模型小鼠胸腺 指数和脾脏指数的影响 小鼠连续皮下注射D-gal7周后,模型组小鼠 胸腺指数和脾脏指数与对照组比较明显下降,试药 组衰老小鼠分别灌胃何首乌多糖,枸杞多糖50: 50,50:200,200:50及200:200mg?(kg? d)_.,能使衰老模型小鼠胸腺指数和脾脏指数不同 程度升高,而同时灌胃维生素E200mg?(kg? d)对衰老模型小鼠胸腺指数和脾脏指数无影响 (表1). 表1PFR和PBWF对D-gal致衰老模型小鼠 胸腺指数和脾脏指数及脑LF的影响 P<o.05,P<o.Ol,与对照组比较;cP<o.05,Jp<o.Ol,与模 型组比较. 第2期许爱霞等:何首鸟多糖和枸杞多糖的协同抗衰老作用机制的实验研究15 2.2PFR和PBWF对D-gal致衰老模型小鼠脑组 织中LF及肝,肾组织中MDA的影响 D-gal致衰老模型小鼠与对照组比较脑组织中 LF及肝,肾组织中MDA明显升高,衰老小鼠分别 灌胃何首乌多糖:枸杞多糖50:50,50:200,200: 50及200:200mg?(kg?d)_.,可不同程度地对 抗脑组织中LF升高(表1)及肝,肾组织中MDA升 高(表2). 2.3PFR和PBWF对D-gal致衰老模型小鼠肝, 肾组织中SOD及GSH—PX活力的影响 D-gal致衰老模型小鼠与对照组比较肝,肾组 织中SOD及GSH—PX活力均明显下降,试药组小 鼠分别灌胃何首乌多糖:枸杞多糖50:50,50: 200,200:50及200:200mg?(kg?d)_.,可不同 程度地对抗肝,肾组织中SoD及GSH—PX活力下 降(表2). 表2PFR和PBWF对D-gal致衰老模型小鼠肝,肾组织,蛋白中MDA,SOD及 GSH-PX活力的影响 'P(0.05,P(0.01,与对照组比较;P(0.05,P(0.01,与模型组比较. 2.4PFR和PBWF对各实验指标单独及协同药用,最佳组合为200mgPFR:50mgPBWF). 效的统计学分析2.5PFR和PBWF对各实验指标的交互作用分 PFR和PBWF对D-gal致衰老模型小鼠胸腺 指数和脾脏指数的药效:统计分析结果表明,PFR 大剂量效果较小剂量好,抑制胸腺指数及脾脏指数 下降作用显着.PBWF量效关系不明显,但两药问 有显着协同作用,最佳组合为200mgPFR:50mg PBWF.对脑组织中LF及肝,肾组织中MDA的 药效:统计分析表明,PFR大剂量效果较小剂量好, 对抗脑LF升高及肾MDA升高作用显着,对抗肝 MDA升高作用极显着.PBWF量效关系不明显, 但两药有显着协同作用,最佳组合为200mgPFR :50mgPBWF.对肝,肾组织中SoD的药效:统 计分析表明,PFR大剂量效果较小剂量好,抑制肝 SOD活力下降作用显着,抑制肾SOD活力下降作 用极显着.PBWF量效关系不明显,但两药对抑制 肝SOD活力下降有显着协同作用,对抑制肾SOD 下降有极显着协同作用,最佳组合为200mgPFR l50mgPBWF.对肝,肾组织中GSH—PX的药 效:统计分析表明,PFR大剂量效果较小剂量好,对 抑制肝GSH—PX及肾GSH—PX活力下降作用显 着.PBWF量效关系不明显,但两药对抑制肝 GSH—PX及肾GSH—PX活力下降有显着协同作 析 PFR和PBWF对各实验指标的交互作用表明 PFR量效变化和PBWF量效变化间的相互影响程 度,用两药大小剂量的药效之差反映(表3). 3讨论 祖国传统中药有防治百病的悠久历史,从滋肝 补肾中药提取有效成分及探索其延缓衰老作用是 现代发展抗衰老新药的重要途径,联合用药是提高 疗效的方法之一.中药何首乌和枸杞传统功效相 近,近年国内研究表明,枸杞多糖有显着免疫增强 作用及抑瘤作用],何首乌总苷有较强的抗肿瘤作 用].本文探讨了何首乌多糖和枸杞多糖联用的 抗衰老作用及其机制.本实验结果表明,【)-半乳糖 致衰老模型组小鼠与正常对照组比较胸腺指数和 脾脏指数明显下降,脑组织中LF明显升高,肝,肾 组织中MDA明显升高及SoD活力和GSH—PX活 力明显下降.而受试药组衰老小鼠分别灌胃50: 50mg,50:200mg,200:50mg及200:200mg ? (kg?d)何首乌多糖:枸杞多糖,能不同程度抑 制胸腺指数和脾脏指数下降;能不同程度对抗肝, l6兰州大学(医学版)第31卷 肾组织中MDA升高及脑组织中LF升高;能不同 程度抑制肝,肾组织中SOD活力及GSH—PX活力 下降;这提示不同正交配比剂量的何首乌多糖和枸 杞多糖能不同程度对抗免疫器官退化及提高免疫 功能;能不同程度地清除oH和抗脂质过氧化;能 不同程度地清除o一,Ho及活性氧.参比实验 表明,维生素E清除自由基及抗脂质过氧化作用较 何首乌多糖和枸杞多糖弱,且对免疫系统无影响. 实验结果的统计分析表明:200:50mg何首 乌多糖:枸杞多糖对【)-半乳糖致衰老模型小鼠脾 脏指数及胸腺指数有显着升高作用,两药间有显着 协同作用.对脑LF及肾MDA有显着降低作用, 对肝MDA有极显着降低作用,两药间有显着协同 作用.对肝SOD活力有显着升高作用,对肾SOD 活力有极显着升高作用,两药对肝SOD活力有显 着协同作用,对肾SOD活力有极显着协同作用. 对肝GSH—PX活力及肾GSH—PX活力有显着升高 作用,两药对肝GSH—PX及肾GSH—PX有显着协 同作用.可见,何首乌多糖和枸杞多糖有显着的协 同抗衰老作用,抗衰机制可能与提高免疫功能,清 除自由基及抗脂质过氧化有关. 表3PFR和PBWF对各实验指标的交互作用分析 A表示何首乌多糖,B表示枸杞多糖. 参考文献 [1] [23 [33 [43 陈群,杨桂文,安利国.银杏白果多糖的提取,纯化和 分析[J].中国药学杂志,2002,3(5):331—333. 孙瑞元,黄正良.中药方剂的正交设计极其统计方法 [A].陈奇.中药药理研究方法学[c3.北京:人民卫生 出版社,2000.50—53. 张其兰,于庆海.复方何首乌对大鼠血浆过氧化脂质 的影响[A].陈奇.中药药理研究方法学[c3.北京:人 民卫生出版社,2000.940—942. 沈乃,陈修.超氧化物歧化酶测定法[A].徐叔云,卞如 濂,陈修.药理实验方法学[M.第3版].北京:人民 卫生出版社,2002.529—531. 孙云,吴希美,张洪泉.谷胱甘肽过氧化物酶测定法 [A].徐叔云,卞如濂,陈修.药理实验方法学[M].第 3版.北京:人民卫生出版社,2002.549—551. 吴舂福,于庆海.人参茎叶对大鼠大脑皮层和肝脏脂 褐质生成的抑制作用[A].陈奇.中药药理研究方法 学[c3.北京:人民卫生出版社,2000.943. 孙艳,官杰,王琪等.枸杞多糖对荷瘤小鼠免疫功能的 增强效应及抑瘤作用的研究[J].齐齐哈尔医学院学 报,2001,22(5):486—487. 张如松,叶益萍,刘雪莉.自首乌甾体总苷的体外抗肿 瘤作用[J].中草药,2000,31(8):599—601. (本文编辑:吕吉臣) ]]]],