牛黄消炎片、妇乐颗粒中非法添加土大黄检查
的建立
牛黄消炎片、妇乐颗粒中非法添加土大黄检
查方法的建立 中国实用医学杂志2010年第20卷第4期(总第144期 制病原体.另外,两者的不良反应发生率比较差异有统计学意 义(P<0.05),但患者耐受良好,停药即可恢复.
本课
比较了阿奇霉素的两种治疗
,甲组痊愈率为39. 58%,与乙组的23.00%比较,差异有统计学意义(P<0.05).甲 组显效者占41.67%,乙组显效者占31.25%,两者也有较大差别 (P<0.05).本实验显示:静滴阿奇霉素3d+口服阿奇霉素4d 比口服阿奇霉素7d治疗女性生殖道支原体感染效果好. 参考文献
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牛黄消炎片,妇乐颗粒中非法添加土大黄检查方法的建立 江苏省淮安市涟水药品检验所(223400)罗一
江苏涟水制药有限公司(223400)李林松
摘要目的:建立牛黄消炎片,妇乐颗粒中非法添加土大黄的检测方法;方法:采用薄层色谱法(TLC),硅胶G板,乙酸乙酯一丁酮一甲酸一水(1O:7:1:
1)为展开剂,在365nm下检视;采用LiehrospherC18(4.6mmx250mm,51a.m),乙腈一甲醇一水(7:3O:63)为流动相,检测波长为320nm.结果:牛黄消炎 片,妇乐颗粒中非法掺入的土大黄的指标性成分土大黄苷在365nm下显持久的蓝紫色荧光斑点,通过高效液相色谱法得到进一步验证.结论:TIc结 合HPLC法简便,快速,专属性强,能有效的检查牛黄消炎片,妇乐颗粒是否掺入土大黄.
关键词牛黄消炎片妇乐颗粒土大黄薄层色谱法高效液相色谱法r] 中图分类号:R927.1文献标识码:A
在日常检验中发现含大黄的中成药存在掺伪现象.土大黄 与正品大黄在化学成分和功能主治上有所差异,在价格上也相 差较大,大黄的价格约是土大黄的3倍,不法药商将土大黄替代 正品大黄使用,药品的药效必然不一样,会贻误病人的病情,造 成不良反应,危害较大.【2牛黄消炎片与妇乐颗粒中均含有大黄 成分,按照厂方提供国家局试行
检验,结果符合规定,但在 检验过程中,发现薄层斑点异常,在研究其处方成分并调用其余 厂家的药品进行阴性对照,怀疑该品种掺入了土大黄.土大黄 苷为二苯乙烯的衍生物,存在于劣质大黄中,常以土大黄苷的存 在与否作为大黄质量的定性鉴别手段.-3本课题可为该类药物 的质量控制提供参考.
1仪器与试药
1.1仪器和设备Waters2690色谱仪;Waters996PDA检测 器;Empower2色谱数据处理软件;AE一240电子天平(梅特勒公 司);ZF一1三用三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂);10 20em硅胶G薄层层析板(青岛海洋化工厂分厂).
1.2试剂HPLC甲醇(PromptarcompanyLtd);AR甲醇(国药 集团化学试剂有限公司);HPLC乙腈(CALENONLABORATO. RIESLTD);AR醋酸乙酯(国药集团化学试剂有限公司);AR丁 酮(国药集团化学试剂有限公司);AR甲酸(国药集团化学试剂 有限公司);纯化水(涟水药检所).
1.3试药
牛黄消炎片1(抚顺澎健药业有限公司,批号20071102) 牛黄消炎片2(哈尔滨华雨制药集团有限公司,批号 2o0810o1)
牛黄消炎片3(哈尔滨华雨制药集团有限公司,批号 文章编号:1773-5611(2010)04一(0059)一(03) 20080602)
牛黄消炎片4(黑龙江葵花药业股份有限公司,批号 20080502)
牛黄消炎片5(哈药集团世一堂制药厂,批号0805302) 妇乐颗粒1(江苏康缘药业股份有限公司,批号081004) 妇乐颗粒2(杭州天目山制药有限公司,批号20080607) 土大黄苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号794— 200103)
2方法与结果
2.1TLC法
2.1.1溶液的配制牛黄消炎片供试品溶液的制备:取本品同 一
批号5片,除去包衣,研细,加甲醇20ral,超声15rain,过滤,滤 液浓缩至2ml,作为供试品溶液.
妇乐颗粒供试品溶液的制备:取本品4袋,研细,加甲醇 2oIIll,超声15rain,过滤,滤液浓缩至2ml,作为供试品溶液. 对照品溶液制备:取土大黄苷对照品加甲醇溶解,制成浓度 为lmg/ml的溶液.
2.1.2薄层色谱条件
硅胶G薄层层析板(1020em);
展开剂:醋酸乙酯一丁酮一甲酸一水(1O:7:1:1); 点样量:2l;
温度:25?;
相对湿度:56%.
2.1.3方法分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各2, 分别点于同一硅胶G薄层板上,以醋酸乙酯一丁酮一甲酸一水 (10:7:1:1)为展开剂,展开后,取出,晾干,置紫外灯(365nm)下 观察.
2.1.4试验结果牛黄消炎片1,2供试品溶液所显主斑点的 颜色呈亮蓝色,与土大黄对照品溶液的一致;测定斑点位置时, RF为0.65,与土大黄对照品一致.而牛黄消炎片3,4,5供试品 溶液所显主斑点的颜色和位置与土大黄苷对照品溶液的不一致 (见图1—1),提示牛黄消炎片1,2可能均掺入土大黄.妇乐颗 粒2供试品溶液所显主斑点的颜色呈亮蓝色,与土大黄对照品 溶液的一致;测定斑点位置时,RF为0.65,与土大黄对照品一 致.而妇乐颗粒1供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与土大 黄苷对照品溶液的不一致(见图1—2),提示妇乐颗粒2可能掺 入土大黄.
(1)(2)(3)(4)(5)(6)
图1—1
土大黄对照品和牛黄消炎片的TLC图
(1)牛黄消炎片1
(2)牛黄消炎片2
(3)土大黄苷对照品
(4】牛黄消炎片3
(5)牛黄消炎片4
(6)牛黄消炎片5
(1)(2)(3)
图1-2
土大黄对照品和妇乐颗粒的TLC图
(1)妇乐颗粒l
【2】土大黄苷对照品
(3)妇乐颗粒2
2.1.5最低检出限的测定取土大黄苷对照品配制成不同的 浓度:O.6mg/ml,0.3mg/na,0.15mg/ml,0.1mrrII,0.05mg/
ml,0.025mg/rnl,按2.1.3项检测,结果仅显5个斑点,最低检出 限为0.05mg/ml.
2.1.6样品中添加对照品测定分别精密吸取供试品溶液,土 大黄苷对照品溶液和供试品加土大黄苷溶液各21a,1,按2.1.3项 检测,结果表明供试品加土大黄苷对照品后所显斑点位置一致, 且斑点明显增大.
2.2HPLC法
2.2.1溶液的制备牛黄消炎片供试品溶液的制备:取本品同 一
批号l0片,除去包衣,称定重量,研细,混匀,精密称取0.25g 置锥形瓶中.加入甲醇25ml,称定重量,加热回流1h,放冷,用 甲醇补充减失重量,混匀,滤过,取续滤液10ml置25ml容量瓶 中,用水定容至刻度,摇匀,滤过,取续滤液待测.
妇乐颗粒供试品溶液的制备:取本品同一批号l0包,称定 重量,研细,f昆匀,精密称取3g置锥形瓶中.加入甲醇25ml,称 定重量,加热回流1h,放冷,用甲醇补充减失重量,混匀,滤过,取 续滤液10ml置20ml容量瓶中,用水定容至刻度,摇匀,滤过,取 续滤液待测.
对照品溶液制备:精密称取对照品8mg于lOOml容量瓶中, 加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液.. 2.2.2样品添加对照品溶液的制备分别精密量取供试品溶 液及土大黄苷对照品溶液各lml,混匀,即得.
中国实用医学杂志2010年第20卷第4期(总第144期 2.2.3色谱条件色谱柱:LiehrospherC18(4.6$250mm,
5ta,m),以乙腈一甲醇一水(7:3O:63)为流动相,检测波长: 320nm,进样量:1O1,柱温:35oC,自动进样.
2.2.4结果分别取对照品溶液,牛黄消炎片1,牛黄消炎片 4,妇乐颗粒1和妇乐颗粒2各10进样测定.结果表明:牛黄 消炎片1,妇乐颗粒2中主峰保留时间与土大黄苷对照品溶液的 色谱峰保留时间一致,通过DAD检测进一步检测,主峰与土大 黄苷峰的DAD(紫外光谱图)一致且杂质不干扰样品测定,而牛 黄消炎片4,妇乐颗粒1在土大黄苷对照品主峰相应保留时间未 出现色谱峰.对照品溶液,供试品溶液色谱图见图2,DAD光谱 图见图3.
A,土大黄苷对照品
B,牛黄消炎片1
c,牛黄消炎片4
图A,B,C中1号峰为土大黄苷
图2—1牛黄消炎片中土大黄苷的HPLC色谱图
A,土大黄苷对照品
中国实用医学杂志2010年第20卷第4期(总第144期 B,妇乐颗粒2
C,妇乐颗粒1
图A,B中1号峰为土大黄苷
图2—2妇乐颗粒中土大黄苷的HPLC色谱图
2?加2'o?260加290.?300舶?3.0?3日D.0038O舶 1.土大黄苷对照品
复O.0o肿枷.?瑚舶3oo?蜘舯3.n??哪铷?
2.牛黄消炎片1
图3—1牛黄消炎片中土大黄苷的DAD光谱图
I.土大黄苷对照品
6l
2.妇乐颗粒2
图3—2妇乐颗粒中土大黄苷的DAD光谱图
经过峰纯度检测,土大黄苷峰的纯度分别为0.9985,0.
9989,
该方法有很好的选择性.
2.2.5方法学
2.2.5.1精密度试验色谱条件:精密吸取土大黄苷对照品溶 液101~l,连续进样7次,记录对照品色谱峰保留时间,分别为8. 652,8.633,8.642,8.632,8.625,8.624,8.701min,RSD为0. 4%,结果表明,进样精密度良好.
2.2.5.2最低检出限的测定将土大黄苷对照品溶液进行多 次等倍稀释,信噪比为S/N为3时,最低检出限为0.5ng. 2.2.5.3样品中添加对照品测定精密吸取样品添加对照品 溶液20g,1,注入HPLC仪,记录色谱图,与供试品溶液色谱图进 行比较,结果表明峰面积明显增大,且保留时间变化在变异范 围内.
3讨论?牛黄消炎片处方中的大黄量较少(9.6g/片),在检 查土大黄苷薄层色谱中取样量为5片,斑点比较明显;在采用高 效液相色谱法进行验证时,可能掺入的量较少,色谱图中土大黄 苷的峰高较低,经DAD检测,证实为土大黄苷.?妇乐颗粒处 方中的大黄制法比较复杂,在检查土大黄苷薄层色谱中,取样量 为2包,亮蓝紫色斑点较浅;在取样量为4包时,亮蓝紫色斑点 比较清晰;再采用HPLC进行验证,可能非正品大黄掺入量较 少,色谱图中的土大黄苷的峰高较低,经DAD检测,证实为土大 黄苷.
4结论TLC结合HPLC法专属性强,能有效,简便,快速的检 查牛黄消炎片,妇乐颗粒是否掺人土大黄.
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