【word】 分光光度法测定小球藻数量的方法研究

【word】 分光光度法测定小球藻数量的方法研究 分光光度法测定小球藻数量的方法研究 安徽农业科学,JournalofAnhuiA.Sci.2009,37(23):11104—11105责任编辑罗芸责任校对卢瑶 分光光度法测定小球藻数量的方法研究 吕旭阳,张雯,杨阳,蔡小宁(南京晓庄学院生命科学系,江苏南京211171) 摘要[目的]确定用分光光度法测定小球藻藻液浓度的适宜波长.[方法]在不同波长下对不同浓度普通小球藻藻液的吸光度进行 测定,对有关数据进行生物统计分析.[结果]在8.7×10.,8.7×10个/ml的浓度范围内,小球藻藻液的最大吸收波长在680nm左 右,较高浓度小球藻藻液的吸光度超出了测定范围.显着性测验表明,9种波长下小球藻藻液浓度与藻液吸光度呈极显着直线相关. 68OBin波长下的测定灵敏度最高,其最高藻液浓度最低,为3.79×104”/ml;700舢波长下的测定灵敏度最低,其最高藻液浓度最高, 为7.7×10个/rnl;560nm波长下的测定灵敏度仅高于700nm波长下的,其最高藻液浓度为6.9×10个/ml;540am波长下的测定灵敏 度高于560nm波长下的,其最高藻液浓度为6.5x10个/nll.[结论]在680nm波长下测定小球藻藻液浓度,其灵敏度高,数据更 精确. 关键词普通小球藻;吸光度;相关系数 中图分类号0657.32文献标识码A文章编号 0517—6611(2009)23—11104—02 MethodologicalResearchOllMeasuringChlorellaQuantitybySpectrophotometry LVXu-yangetal(DepartmentofLifeScience,NanjingXiaozhuangCollege,Nanjing,Jiangsu211171) Abstractl0biectivelTheresearchaimedtoascertainthewavelengthsuitablefordeterminingtheconcu.ofchlorellasuspensionbyspectro— photometry.IMethodlTheabsorbanceofthesuspensionwithdifferentconcn.ofChlorellavulgarisweredeterminedatdifferentwavelengths andthebiologicalstatisticanalysiswasperformed0ntherelevantdata.fResultlIntheconcn.rangeof8.7×10.一8.7×10/m1.themaxi— mumadsorptionwavelengthofchlorellasuspensionwasabout680nmandtheabsorbanceofchlorellasuspensionwithhigherconcn.exceeded thedeterminationrange.Thesignificancetestshowedthattheconcn.ofchlorellasuspensionshowedextremelysignificantlinearcorrelation withtsabsorbanceat9wavelengths.edeterminationsensitivityafthewavelengthof680nmwashighestanditshighestsuspensionconcn waslowest.being3.79×10/m1.Thedeterminationsensitivityatthewavelengthof700nmwaslowestanditshighestsuspensionconch.was highest,being7.7×10/m1.Thedeterminationsensitivityatthewavelengthof560nmwasjusthigherthanthatatthewavelengthof700nm anditshighestsuspensionconcn.was6.9×10/m1.rhedeterminationsensitivityatthewavelengthof540nmwashigherthanthatatthe wavelengthof560amanditshighestsuspensionconch.was6.5×10/m1.『ConclusionlThedeterminationontheconcn.ofchlorellaSUS pensionatthewavelengthof680nmhadhighsensitivityandmoreprecisedata. KeywordsChlorellavulgaris;Absorbance:Correlationcoefficient 小球藻的蛋白质含量约为50%,55%,且含有许多重要 的抗病植化物以及氨基酸,维他命,矿物质等养分,营养价值 相当于鸡蛋的5倍,是一种理想的蛋白质资源,被FAO列为 21世纪人类的绿色营养源健康食品.开展小球藻的研究工 作,其经济效益和社会效益的前景都甚为广阔.在对小球藻 的研究过程中,经常要对藻液吸光度进行测定.一些研究者 采用了540rim波长,也有人采用了570nm波长,另 一 些研究者则采用了680rim波长,由此可见,不同的研 究人员使用的波长明显不同.为了明确用分光光度计法测 定小球藻密度的合适的波长,笔者进行了相关试验. 1材料与方法 1.1培养基配方参照BBM培养基(Bold’sbasalmedium) 配方,其中含75g/L硝酸钠,10g/L葡萄糖,l0g/L蛋 白胨. 1.2小球藻的培养培养液和容器于1.2kg/em压力下高 压蒸汽灭菌20min,灭菌前调pH值至6.6.从保存藻种的琼 脂斜面上挑取藻细胞培养于装有5n1l培养基的试管中光下 培养5d,再将试管种接人50mlBBMG培养基于光下培养至 对数期,成为最初的液体种子. 配制BBMG培养基,分装在100ml锥形三角瓶中,每瓶 分装5Ornl培养液,然后灭菌,为防止生长过程中感染某些菌 基金项目南京晓庄学院重点项目(2007NXY01);江苏省高校自然科 学基金项目(08KDJ180011);江苏省高等学校大学生实践创 新训练计划项目(2007-2009). 作者简介吕旭阳(1988一),女,浙江金华人,本科生,专业:生物技术. 通讯作者,研究员,E-mail:hioxncai@yahoo.corn.cn. 收稿日期2009-04—15 类,在培养液中加入抗生素卡那霉素(25mg/L),氨苄青霉 素(500mg/L),然后将活化后的小球藻接种于BBMG培养基 中,放在摇床上于25?下培养4,5d,转速为120r/rain. 1.3小球藻藻液吸光度的测定将培养好的小球藻按比例 稀释成各种浓度,用血球计数板计数出小球藻的浓度,重复3 次,取平均值.将相应浓度藻液用722型分光光度计测定吸 光度. 2结果与分析 2.1小球藻吸光度随波长变化图谱由图l可见,在1.3× 10.,1. 3×10个/ml浓度情况下,530,640nm波段都为吸 收谷,而650,700nm波段有一吸收峰,最大吸收波长在680 BE左右.在680nm左右的波长下,较高的小球藻细胞浓 小球藻浓度日个 波长Yavelengthm 图1不同浓度的小球藻在不同波长卞的吸光度图谱 Fig.1Spectrumoftileabsorbencyofdifferentconcentrationsof ehlorellaatdifferentwavelengths 重苕? 37卷23期吕旭阳等分光光度法测定小球藻数量的方法研究 度,吸光度数值超出测定范围. 2.21O种波长下不同浓度小球藻吸光度的测定为了进一 步探讨540rllTl乃至其他波长用于小球藻细胞密度测定的可 能性,分别测定了450,540,560,640,650,660,670,680,700, 750nm波长下不同密度的小球藻细胞的吸光度值.结果表 明,除了波长为750l’lm时测得的数据极无规律可言外,其余 9种波长下的测定数据都具有明显的规律.显着性测验结果 表明,9种波长下小球藻细胞浓度与藻液吸光度之间均为极 显着的直线相关,因此可求出每个波长下藻液吸光度与藻液 浓度的直线回归方程(表1). 表1小球藻细胞浓度与吸光度的关系 Table1Relationshipbetweentheabsorbencyandconcentrationof Chlorellavulgariscell 由表1可见,由于在450,700nm波长下,小球藻细胞浓 度与藻液吸光度之间均表现为极显着的直线相关,因此,可 在上述波长下测定藻液吸光度,然后通过相应的直线回归方 程换算出培养液中的藻细胞浓度. 试验结果表明,680nm波长下测定的灵敏度最高,所能 测定的最高藻液浓度最低,小球藻细胞数为3.79×10. 个/ml.700nm波长下测定的灵敏度最低,所能测定的最高 藻液浓度最高,为7.7X10个/ml;560am波长下测定的灵 敏度仅高于700nm波长下,所能测定的最高藻液浓度略低, 为6.9×10个/ml;540nm波长下测定的灵敏度高于56oam 波长下,所能测定的最高藻液浓度为6.5×10个/rnl.显然, 如果藻液浓度过高,则必须加以稀释后再进行测定. 3讨论 试验结果表明,在多种浓度情况下测定小球藻的吸光 度,530,640am波段都明显呈现为吸收谷,最大吸收波长在 68011111左右,这表明选择680nm波长测定小球藻藻液浓度, 其灵敏度高,数据更精确.540,570nil/波长下,则灵敏度稍 低,精确度稍差.试验结果还表明,450,700am波长下测定 的不同浓度藻液的吸光度数值,与藻液浓度呈明显的直线相 关关系,且相关系数达极显着,因此,可以在上述波长下测定 藻液吸光度,然后通过相应的直线回归方程换算出培养液中 的藻细胞浓度.由此可见,分光光度计法测定小球藻细胞密 度,450,70011111波长都可以选用,但最佳测定波长为680 Illn0 参考文献 [1]张丽君,杨汝德,肖恒.小球藻的异养生长及培养条件优化[J].广西植 物,2001,21(4):353—357. 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(上接第11086页) 粉,生物控制,庇护和遗传资源4方面的功能,森林生态系统 维持生物多样性的功能主要体现在生物控制和遗传资源2 个方面;农田生态系统维持生物多样性的功能主要体现在传 粉和生物控制2个方面;河库生态系统的生物多样性维持功 能主要体现为庇护功能.鄱阳湖区动植物资源非常丰富, 据调查,保护区内有鸟类310种,兽类47种,爬行类48种,鱼 类122种,贝类4o种,昆虫类227种,浮游动物47种,浮游植 物50种,高等植物476种.鸟类中属于国家一级保护鸟类 11种,国家2级保护鸟类4o种”…. 2.2.3水土保持.鄱阳湖地区作为长江流域防洪减灾,生 态环境改善的重要组成部分,它的水土保持和生态环境建设 问题更加突出.”鄱阳湖区生态系统的水土保持功能主要涉 及林地生态系统.主要表现对降水的截留作用,土壤透水性 能和蓄水性能,树木根系对土壤的固结作用等3个方面. 3小结 鄱阳湖是江西的”母亲湖”,是长江中下游的生态防线, 潘阳湖生态环境关系到中国东南腹地的生态安全.根据笔 者调查的相关数据和理论分析,可以看出鄱阳湖具有强大的 生态系统内涵型服务功能和外型服务功能,尤其是内涵型服 务功能.这些将为下一步进行鄱阳湖生态补偿机制分析研 究打下基础,为生态补偿运行机制的实施和开展做好理论 铺垫. 参考文献 [1]崔丽媳鄱阳湖湿地生态系统服务功能价值研究[J].生态学杂志, 51. 2004,23(4):47— [2]汤明,钟丹,陶春元.鄱阳湖区生态补偿问题扔探[J].生态经济,2709,5. [3]陈文波,赵小敏.鄱阳湖区土地利用格局特征与安全格局构建研究 [M].北京:中国农业出版社,2007: [4]DAILYGC.Nature’sees:soeietaldependenceonnaturalecosystems [M].WashingtonD.C.:IslandP;s,l9卯. [5]刘首江河源区生态系统服务价值与生态补偿机制研究[D].南昌:南 昌大学,2007:37—104. [6]范小杉,高吉喜,于勇.基于生态补的NES生态服务功能分类体 系及应用模型[J].生态经济,2007(4):35—39. [7]《江西统计年鉴20o7}编委会20O7年江西寸年鉴[M].北京:中国统 计出版社,2008. 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