GB 5009.24-2010 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素M1和B1的测定 英文版咨询
中华人民共和国国家标准
GB 5009.24—2010
食品安全国家标准
食品中黄曲霉毒素 M1和 B1的测定
National food safety standard
Determination of aflatoxins M1 and B1 in foods
中华人民共和国卫生部 发布
2010-03-26 发布 2010-06-01 实施
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中华人民共和国国家
GB 5009.24—2010
食品安全国家标准
食品中黄曲霉毒素 M1和 B1的测定
National food safety standard
Determination of aflatoxins M1 and B1 in foods
中华人民共和国卫生部 发布
2010-03-26 发布 2010-06-01 实施
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GB 5009.24—2010
I
前 言
本标准代替 GB/T 5009.24-2003《食品中黄曲霉毒素 M1 与 B1的测定》。
本标准所代替的历次版本发布情况为:
——GB/T 5009.24-1985、GB/T 5009.24-1996、GB/T 5009.24-2003。
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GB 5009.24—2010
1
食品安全国家标准
食品中黄曲霉毒素M1和B1的测定
1 范围
本标准规定了牛乳及其制品、奶油及新鲜猪组织(肝、肾、血及瘦肉)等食品中黄曲霉毒素 M1 与
B1 的测定方法。
本标准适用于牛乳及其制品、奶油及新鲜猪组织(肝、肾、血及瘦肉)等食品中黄曲霉毒素 M1 与
B1 的测定。
2 原理
样品经提取、浓缩、薄层分离后,黄曲霉毒素 M1 与 B1 在紫外光(波长 365nm)下产生蓝紫色荧
光,根据其在薄层上显示荧光的最低检出量来测定含量。
3 试剂和材料
3.1 甲醇:分析纯。
3.2 石油醚:分析纯。
3.3 三氯甲烷:分析纯。
3.4 无水硫酸钠:分析纯。
3.5 异丙醇:分析纯。
3.6 硅胶 G:层析用。
3.7 氯化钠及氯化钠溶液(40 g/L)。
3.8 硫酸(1+3)。
3.9 玻璃砂:用酸处理后洗净干燥,约相当 20 目。
3.10 黄曲霉毒素 M1 标准溶液:用三氯甲烷配制成每毫升相当于 10μg 的黄曲霉毒素 M1 标准溶液。
以三氯甲烷作空白试剂,黄曲霉毒素 M1 的紫外最大吸收峰的波长应接近 357 nm,摩尔消光系数为 19
950。避光,置于 4 ℃冰箱中保存。
3.11 黄曲霉毒素 M1与 B1 混合标准使用液:用三氯甲烷配制成每毫升相当于各含 0.04 μg 黄曲霉毒素
M1 与 B1。避光,置于 4℃冰箱中保存。
4 仪器和设备
4.1 10 目圆孔筛。
4.2 小型粉碎机。
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4.3 玻璃板:5 cm×20 cm。
4.4 展开槽: 长 25 cm,宽 6 cm,高 4 cm。
4.5 紫外光灯:100 W~125 W,带 365 nm 滤光片。
4.6 微量注射器。
5 分析步骤
整个操作需在暗室条件下进行。
5.1 样品提取
5.1.1 样品提取制备
,见表 1。
表 1 试样制备
样品名称
称样量/
(g)
加水量/
(mL)
加甲醇量/
(mL)
提取液量 α/
(mL)
加40g/L氯化钠
溶液量/
(mL)
浓缩体积/
(mL)
滴加体积/
(μL)
方法灵敏度/
(μg/kg)
牛乳 30 0 90 62 25 0.4 100 0.1
炼乳 30 0 90 52 35 0.4 50 0.2
牛乳粉 15 20 90 59 28 0.4 40 0.5
乳酪 15 5 90 56 31 0.4 40 0.5
奶油 10 45 55 80 0 0.4 40 0.5
猪肝 30 0 90 59 28 0.4 50 0.2
猪肾 30 0 90 61 26 0.4 50 0.2
猪瘦肉 30 0 90 58 29 0.4 50 0.2
猪血 30 0 90 61 26 0.4 50 0.2
α 提取液量按式(1)计算:
)90(
15
8 BAX ++×= ………………………………………………… (1)
式中:
X——提取液量,单位为毫升(mL);
A——试样中的水分量,单位为毫升(mL)(牛乳、炼乳及猪组织的取样量为 30g,牛乳粉、乳酪的取样量为 15g);
B——加水量,单位为毫升(mL);
注:样品中的水分量参照《食物成分表》。
因各提取液中含 48 mL 甲醇,需 39 mL 水才能调到甲醇与水之体积比为(55+45),因此加入 40g/L 的氯化钠溶液的体积等于甲醇
和水的总体积(87mL)减去提取液的体积(mL)。
5.1.2 乳与炼乳:称取 30.00 g 混匀的样品,置于小烧杯中,再分别用 90 mL 甲醇移于 300mL 具塞锥
形瓶中,盖严防漏。振荡 30 min,用折叠式快速滤纸滤于 100 mL 具塞量筒中。按表 1 收集 62 mL 乳与
52 mL 炼乳(各相当于 16 g 样品)提取液。
5.1.3 乳粉:取 15.00 g 样品,置于具塞锥形瓶中,加入 20 mL 水,使样品湿润后再加入 90 mL 甲醇,
以下按 5.1.3 自“振荡 30 min……”起,依法操作,按表 1 收集 59 mL 提取液(相当于 8 g 样品)。
5.1.4 干酪:称取 15.00 g 切细、过 10 目圆孔筛混匀样品,置于具塞锥形瓶中,加 5 mL 水和 90 mL
甲醇,以下按 5.1.3 自“振荡 30 min……”起依法操作,按表 1 收集 56 mL 提取液(相当于 8 g 样品)。
5.1.5 奶油:称取 10.00 g 样品,置于小烧杯中,用 40 mL 石油醚将奶油溶解并移于具塞锥形瓶中。
加 45 mL 水和 55 mL 甲醇,振荡 30 min 后,将全部液体移于分液漏斗中。再加入 1.5 g 氯化钠摇动溶
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解,待分层后,按上表收集 80 mL 提取液(相当于 8 g 样品)于具塞量筒中。
5.1.6 新鲜猪组织:取新鲜或冷冻保存的猪组织样品(包括肝、肾、血、瘦肉)先切细,混匀后称取
30.00 g,置于小乳钵中,加玻璃砂少许磨细,新鲜全血用打碎机打匀,或用玻璃珠振摇抗凝。混匀后称
取 30.00 g,将各样品置于 300 mL 具塞锥形瓶中,加入 90 mL 甲醇,以下按 5.1.3 自“振荡 30 min……”
起依法操作。按上表收集 59 mL 猪肝,61 mL 猪肾,58 mL 猪瘦肉及 61 mL 猪血等提取液(各相当于
16 g 样品)。
5.2 净化
5.2.1 用石油醚分配净化:将以上收集的提取液移入 250 mL 分液漏斗中,再按各种食品加入一定体
积的氯化钠溶液(40 g/L)(见表 1)。再加入 40 mL 石油醚,振摇 2 min,待分层后,将下层甲醇-氯化
钠水层移于原量筒中,将上层石油醚溶液从分液漏斗上口倒出,弃去。再将量筒中溶液转移于原分液漏
斗中。再重复用石油醚提取两次,每次 30 mL,最后将量筒中溶液仍移于分液漏斗中。奶油样液总共用
石油醚提取两次,每次 40 mL。
5.2.2 用三氯甲烷分配提取:于原量筒中加入 20 mL 三氯甲烷,摇匀后,再倒入原分液漏斗中,振摇
2 min。待分层后,将下层三氯甲烷移于原量筒中,再重复用三氯甲烷提取两次,每次 10 mL 合并于原
量筒中。弃去上层甲醇水溶液。
5.2.3 用水洗三氯甲烷层与浓缩制备:将合并后的三氯甲烷层倒回原分液漏斗中,加入 30 mL 氯化钠
溶液(40 g/L),振摇 30 s,静置。待上层混浊液有部分澄清时,即可将下层三氯甲烷层收集于原量筒中。
加入 10 g 无水硫酸钠,振摇放置澄清后,将此液经装有少许无水硫酸钠的定量慢速滤纸过滤于 100 mL
蒸发皿中。氯化钠水层用 10 mL 三氯甲烷提取一次,并经过滤器一并滤于蒸发皿中。最后将无水硫酸
钠也一起倒于滤纸上,用少量三氯甲烷洗量筒与无水硫酸钠,也一并滤于蒸发皿中,于 65 ℃水浴上通
风挥干,用三氯甲烷将蒸发皿中残留物转移于浓缩管中,蒸发皿中残渣太多,则经滤纸滤入浓缩管中。
于 65 ℃用减压吹气法将此液浓缩至 0.4 mL 以下,再用少量三氯甲烷洗管壁后,浓缩定量至 0.4 mL 备
用。
5.3 测定
5.3.1 硅胶 G 薄层板的制备
薄层板厚度为 0.3 mm,105 ℃活化 2 h,在干燥器内可保存 1d~2d。
5.3.2 点板
取薄层板(5 cm×20 cm)两块,距板下端 3 cm 的基线上各滴加两点,在距第一与第二板的左边缘
0.8 cm~1 cm 处各滴加 10 μL 黄曲霉毒素 M1 与 B1 混合标准使用液,在距各板左边缘 2.8 cm~3 cm 处
各滴加同一样液点(各种食品的滴加体积见表 1),在第二板的第 2 点上再滴加 10 μL 黄曲霉毒素 M1 与
B1 混合标准使用液。一般可将薄层板放在盛有干燥硅胶的层析槽内进行滴加,边加边用冷风机冷风吹
干。
5.3.3 展开
5.3.3.1 横展:在槽内加入 15 mL 事先用无水硫酸钠脱水的无水乙醚(每 500 mL 无水乙醚中加 20 g
无水硫酸钠)。将薄层板靠近标准点的长边置于槽内,展至板端后,取出挥干,再同上继续展开一次。
5.3.3.2 纵展:将横展两次挥干后的薄层板再用异丙醇-丙酮-苯-正己烷-石油醚(沸程 60 ℃~90 ℃)
-三氯甲烷(5+10+10+10+10+55)混合展开剂纵展至前沿距原点距离为 10 cm~12 cm 取出挥干。
5.3.3.3 横展:将纵展挥干后的板再用乙醚横展 1 次~2 次,展开方法同 5.3.3.1。
5.3.4 观察与评定结果
5.3.4.1 在紫外光灯下将第一、二板相互比较观察,若第二板的第二点在黄曲霉毒素 M1 与 B1 标准点
的相应处出现最低检出量(M1 与 B1的比移值依次为 0.25 和 0.43),而在第一板相同位置上未出现荧光
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点,则样品中黄曲霉毒素 M1 与 B1含量在其所定的方法灵敏度以下(见表 1)。
5.3.4.2 如果第一板的相同位置上出现黄曲霉毒素 M1 与 B1 的荧光点,则第二板第二点的样液点是否
各与滴加的标准点重叠,如果重叠,再进行以下的定量与确证试验。
5.3.5 稀释定量
样液中的黄曲霉毒素 M1与 B1 荧光点的荧光强度与黄曲霉毒素 M1 与 B1的最低检出量(0.0004 μg)
的荧光强度一致,则乳、炼乳、乳粉、干酪与奶油样品中黄曲霉毒素 M1 与 B1 的含量依次为 0.1 μg/kg、
0.2 μg/kg、0.5 μg/kg、0.5 μg/kg 及 0.5 μg/kg;新鲜猪组织(肝、肾、血、瘦肉)样品均为 0.2 μg/kg(见
表 1)。如样液中黄曲霉毒素 M1 与 B1 的荧光强度比最低检出量强,则根据其强度逐一进行测定,估计
减少滴加微升数或经稀释后再滴加不同微升数,直至样液点的荧光强度与最低检出量点的荧光强度一致
为止。
5.3.6 确证试验
在做完定性或定量的薄层板上,将要确证的黄曲霉毒素 M1 和 B1 的点用大头针圈出。喷以硫酸溶
液(1+3),放置 5 min 后,在紫外光灯下观察,若样液中黄曲霉毒素 M1和 B1 点与标准点一样均变为黄
色荧光,则进一步确证检出的荧光点是黄曲霉毒素 M1 和 B1。
6 分析结果的表述
黄曲霉毒素 M1 或 B1 的含量按式(2)进行计算。
m
D
V
VX 10000004.0
2
1 ×××= …………………………………………(2)
式中:
X——黄曲霉毒素 M1 或 B1 含量,单位为微克每千克(μg/kg);
V1——样液浓缩后体积,单位为毫升(mL);
V2——出现最低荧光样液的滴加体积,单位为毫升(mL);
D——浓缩样液的总稀释倍数;
m——浓缩样液中所相当的试样质量,单位为克(g);
0.0004——黄曲霉毒素 M1 或 B1的最低检出量,单位为微克(μg)。
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