单线态氧与L-色氨酸和L-酪氨酸相互作用的研究(可编辑)

单线态氧与L-色氨酸和L-酪氨酸相互作用的研究(可编辑) 单线态氧与L-色氨酸和L-酪氨酸相互作用的研究 江南大学 硕士学位 -色氨酸和L-酪氨酸相互作用的研究 单线态氧与L 姓名:陈海华 申请学位级别:硕士 专业:应用化学 指导教师:冉国侠 20080701攮黉 摘要 本文将光敏剂距甲基蓝洲通过吸附固定到阳离子树脂上,以,.二苯葸为单 线态氧捕获剂,研究固定亚甲基蓝的异裙光敏化体系在可见光照射下的产生 及 其对。色氨酸和.酪氨酸的氧化。主要结论如下: 光敏化体系中溶解的氧气是产生的翦提条件,亚甲基蓝和孟加拉玫瑰红 的敏化效果最强,浓度为 /数量级的亚甲基蓝敏化效果最好。 .粉末漫反射光谱表臻,以单分子形态吸附在树脂上。反应产物,. 二苯蒽过氧化物的化学发光现象和反应后,一二苯葸的高效液相色谱图,证 明所研究 的固定亚甲基蓝光敏化体系使基态氧转化为。 实验数据拟和处理结果表暖,对.色氨酸的氧化反应动力学属二级反应, .色氨酸氧化降解率随光照强度增强而增大,但随.色氨酸初始浓度增大而减 小,且不 受值的影响。异相光敏化体系乙一色氨酸氯纯反应速率高于均相光敏化体系, 在有猝 灭剂共存物的情况下,.色氨酸降解率大幅度的减小。 一酪氨酸光敏氧化的反应动力学符合二级动力学,其降解速率常数随其初始 降解速率常数受值的影响,在弱碱中速率常数小,强 浓度的增大而减小; 碱州中速率常数明显增大:一酪氨酸光敏氧化还受到共存一色氨酸的影响; 一 色氨酸在圈定敏纯体系中的氧化速率眈在水溶敏化体系中的大。 所得结果表明在可见光的辐射下与光敏化剂处不同相的.色氨酸和.酪氮酸 仍可 发生氧化降解,这~结果戈探讨食晶营养、风味损失等机理打下基础。 关键词:皿甲基蓝;光敏化;,。二苯蒽;单线态氧;.色氨酸;.酪氨酸 ,. .: . /. . ., 一。 . , 。 . . 。 . ?... 。 ?.司捷 ..一; ;; :;;, 珏独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是拳人在导师指导下进行的研究工作及取 得的研究成果.尽我所知,除了文中特别加以标注扣致谢的地方外,论文 中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含本人为获得江南 大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材耩.与我一同工作的同志 对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意. 签 名: 日 期: 塑缸兰 】垒盗釜 关于论文使用授权的说明 本学位论文作者完全了解江南大学有关保留、使用学位论文的规定: 江南大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允 许论文被查阅和借阏,可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库 进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文, 并且奉人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致. 保密的学位论文在解密后也遵守此规定。 签名:篁】釜鍪导师签名:盥垫么 日 期: 丝星,。兰第一章绪论 第一章绪论 .研究背景 氧是生命运动过程中不可缺少的一种气体,人们一旦处于缺氧或者供氧不足 的环境 中,就会感到憋气的痛苦甚至死亡。所以,自从年代初英国人 发 现氧以来,氧一直被人们认为是一种对人体百益而无一害的气体。可是,科学 技术迅速 发展起来的今天,我们知道,不管是空气中的氧还是水中的溶解氧都具有较 高的氧化性, 与一般的金属铁一样,处于空气中的人体各部位都在不断地受到氧的腐蚀而“生锈”,当 然这种腐蚀与铁不同,它体现在人体的细胞水平上。特别是人体各种器官随着年龄的增 在 大不断地老化更是这种腐蚀“生锈”的直观表现。年与【】发现, 生化反应过程中氧气分子获得一个电子还原生成超氧自由基,进而经过红 血球的分离精制后获得’的清除灭活酶,并命名为超氧化物歧化酶 ,。这一发现激发了大批的科学研究者致力于。的生成过程、反应活 性、毒性、生理和病理等等各方面的研究,去探索解明在生理学上的意义。同时 由’衍生出来的过氧化氢、羟自由基。、激发态氧一重态氧或称单线态氧, 也受到了人们的重视。近多年来,活性氧在人体内的作用受到人们极大的关注, 报道了大量有关活性氧,特别是超氧自由基和羟自由基与机体细胞的许多功能活动以及 各种疾病,如癌、动脉硬化、糖尿病、心脑血栓、缺氧再灌注综合症、感染以及衰老效 应等相关的研究论文和著作【】,引起人们对活性氧的普遍兴趣,从而激发了人们更深入 地去研究活性氧的各种特性,开发各种相关的抗氧化、抗衰老物质,在医学和分子生物 学领域已成为一项广泛引起重视的研究课题。另外,活性氧对人们日常生活也产生了极 大的影响,例如活性氧可以引起食物的腐败,可以导致药品、化妆品的变质。 ..氧分子的存在形态 氧分子共有三种形式,这三种形式都已被证实。最常见的形式是有两个未配对电子 的基态,也叫三线态,用符号嚣表示。另两种电子已配对的形式叫单线态,也叫激发 ,它们的能量比三线态高,用符号和磊表示,且的能量比嚣低。根据 态 双原子分子电子谱项的推求法,人们也从理论上证实了氧有三个谱项:五一、及磊, 其中五一为基态谱项。键能为.,后两谱项比嚣分别高出.及 .。 原子氧的电子结构是:一,模型导致在基态的 分子轨道被占领:一仉瓯。矾瞑死磊氧的电子性质是由万 电子层上的六个电子所确定的。较低能量状态下的旋转结构是:一 核冗:?,木;?水,这种状态的光谱形式是五一。在两个不同电子层上的不成对 电子很好地解释了分子氧的顺磁性【。基态上的电子占有和活化能态在图.中有描述。 两对电子占领由标志的激发态的相同乃电子层。是作为化学反应的低能江南大学硕士学位论文 点,在很低的气压下,辐射衰败半衰期是分钟。然而,和其它分子的碰撞引起了生 命的缩短。例如,在托真空度的氧气下,生命时间变为分钟。高活化能态是磊。 在这种状态下两对电子占领了两个不同的磊电子轨道,半衰期是秒。在压缩环境下, 高能状态下快速转变为么,。 嘲 .’曷 .葛‘鳓呻 ?辱一喝?专一喝 ?卜喝?专一嚆 ?%妒瓦 :抖眨 抖 。’?口‘嘲疆。丽住》 吒。斗啊斗% 甚蔫一要钾再要焉 ?眦 图卜氧分子的分子轨道 .?..氨基酸的氧化机制 氧气是生命过程必不可少的,人们每天呼吸的氧气是一种稳定的基态氧分子。而 却与之不同,它是不稳定的激发态氧分子,它无处不在,在生命过程中生物氧化,空气 污染物的光转化,人工聚合物的降解,有机体的代谢,食品的氧化等过程中都会不断生 成和猝灭。 生物学上,可以调节、控制植物生长,但也是蛋白质光氧化作用中的氧化 剂。它具有较大的扩散半径,它能穿透线粒体膜或核膜,造成的损伤,也可与组蛋白 作用,组氨酸残基经氧化作用,产生一种新的光产物,并且它的多寡与细胞损伤、死亡成 正相关系。可氧化半胱氨酸、组氨酸、色氨酸、蛋氨酸和酪氨酸残基,使蛋白质丧 失功能,并可使油醛磷酸脱氢和酶醇胱氢酶解旋表观自由能?增加易变形解 旋, 可使酶蛋白分子发生分子内或分子间交联,构型改变而失活或暴露出某些隐蔽的肽键而 易遭蛋白酶的水解,从而造成人的衰老。这些作用将损坏有机体,包括对细胞膜的损伤致 变作用、再生的改变等,在动物和人体中引起许多蛋白质光氧化疾病【】。在生物体内,某 些细胞组分如叶绿素、血红蛋白的卟啉的光敏化作用及其他生化作用产生,是很 强的亲电试剂,能与生物分子如氨基酸、蛋白质、酶、核酸等反应,导致机体的损伤【。 食物的氧化导致营养损失和产生有毒和有颜色的化合物,造成不良风味,使食品被 消费者少许接受或不可接受【不。氧化反应由双游离基的三线态氧或非游离基的所致。 三线态氧易于同食品中的游离基化合物反应。不过,大部份的食品类化合物是非游离基 并呈单线状态,三线态氧氧化是由于食物化合物游离基的形成而引发的。游离基化合物 与双游离基反应。食品中该可以由光敏反应的三线态氧形成。在过去年,为 了提高易氧化食品的稳定性,三线态氧的氧化得到了广泛的研究,而且通过大学,工业 界和政府科学界广泛一致的努力,也得到了很好的理解瞄。但食品的非游离基的氧 化在年前才被研究。食品的非游离基的氧化缺乏科学资料的原因有:研究 第一章绪论 由非游离基发起的氧化,食品科学最近才做了比较只有微秒的短寿命在复杂 的食品系统中难以检测对于食品氧化的重大而特殊的贡献没有得到很好的理解。 对氧化食品的大多数研究已进行了个步骤。首先是在食品中的形成和其对产 生具体化合物的作用,其次是研究猝灭机制和猝灭剂的动力学,以减少氧化食物。 该对食物的氧化是非常显著的,因为氧化的速率远大于大气中三线态氧的氧化。 迅速增加了食品的氧化速率,即使在非常低的温度一。氧化能产生新的化合物, 这是在普通三线态氧氧化食品中没有发现的【??。对于大多数氧化食品,负的 是一维状态的,并普遍被称为。的能量比基态三线态氧高.千焦以上, 且与其他单线态分子反应【玉】。不是一个游离基的化合物,与非游离的,单线态的, 包含双键的富含电子的化合物反应。的寿命由至.,取决于食品中的溶剂 体系。反应温度对氧化食品的氧化速率关系不大,因为低的活化能,只需至. 千焦/摩尔【。可直接与没有形成游离自由基中间体的富含电子的双键直接反应。由 于化学反应所需的低活化能,在食品中氧化反应是非常迅速的【”。 。。光敏剂如叶绿 素,脱镁叶绿素,卟啉化合物,核黄素,肌红蛋白,和食品中的合成色素能吸收光能量, 并将其转移到三重态氧,形成】。食品中含有大量的蛋白质,易与组成蛋白 质的色氨酸, 组氨酸,酪氨酸,蛋氨酸,半胱氨酸等反应而破坏食物蛋白质,使营养 损失。 在医疗卫生领域,对蛋白质的氧化已经做了大量研究。主要与其中的种 氨基酸色氨酸, 组氨酸,酪氨酸,蛋氨酸,半胱氨酸发生反应形成过氧化物【捌。 蛋白质和的反应速率大多取决于含双键或电子丰富的硫原子的氨基酸的数量及种类 。其他氨基酸与反应,反应速率低于色氨酸,组氨酸,酪氨酸,蛋氨酸,或半胱 氨酸.级【。色氨酸,组氨酸,酪氨酸含有双键,并能随时与亲电子反应。蛋氨 酸和半胱氨酸含有硫原子和个单电子,能与亲电子快速反应。随着氨基酸被 改变,蛋白质或酶变性,失去功能,并聚集。关于蛋白质氧化的信息尚未容易得到。 各种氨基酸的猝灭效果和在一些涉及的分析技术中使用氨基酸有报道【。氧化 蛋白质的反应速率依赖值,温度,介质的介质常数,和对具有活性的种氨基 酸,它们是色氨酸,组氨酸,酪氨酸,蛋氨酸,半胱氨酸。等报告说【,值影 响氧化.乙酰酪氨酸乙酯和氨基酸。这些化合物反应速率可能是取决于这些化合 以以是最大的, 物的去质子状态。组氨酸与反应的速度常数在 。一,充分质子化的组氨酸速率常数只有 而在时,速率常数只有 。~。色氨酸在测试值范围内,在可电离基团中没有可电离的质子,没有任何 效应。他们的研究还表明,由于酪氨酸中含有去质子化的酚类物质,导致反应 速率常数 增加。自由氨基酸比起它的多肽,有较高的氧化速率【。完全变性的多肽猝灭速率相当 于做比较的自由氨基酸溶液,这表明该可用氨基酸,而不是肽键是蛋白质反应的一个重 要的因素。蛋白质叔结构抑制了与具有活性的氨基酸的反应,从而给予一定程 度的保护。 氨基酸和之间的反应依赖溶剂口引。某些氨基酸能作为物理和化学猝灭剂。蛋白江南大学硕士学位论文 质的氧化反应速率常数依赖于氨基酸类型,对的亲和性,介质的电介常数勿。 组氨酸和酪氨酸加速了核黄素敏化的抗坏血酸的毁坏,还提议氨基酸中间产品和加 速了抗坏血酸的氧化【。 ..实验室单线态氧的产生方法 产生的通常方法是光敏化法,其次还有化学反应法。 .光敏化法 光敏作用涉及到一个光激发过程,就是要求存在一种吸收光的物质,即光敏剂 。光敏氧化反应的机理一般认为是按下面三个反应式进行: 系闻窒匮 基态一 首先光敏剂处于单线基态电子状态,吸收光子被激发到激发单线态; 随后经过内部系统的转移,形成激发三线态;最后激发三线态能使三线态氧激 发为单线态,光敏剂变到基态又进行循环产生。 常用的光敏剂有玫瑰红、荧光黄、亚甲基蓝、叶绿素和血卟啉等峭。在光敏剂参与 /, 下发生的氧化反应通称光敏氧化反应。只要光敏齐线态的能量高于 就可能将其能量传递给基态氧了。三线态光敏剂首先和基质而不是分子氧反应 的方法被称为方法;另外,在方法中,三线态光敏剂先与分子氧反应,如图.。 常见的,感光物质、氧以及基质都溶解在液体或固体里。仿生染料分子的基本反应在图 .中有描述。图.被称为图。吸收光的主要行为是为了提高一个电子从基 本单线态岛到一个活性单线态的活性震动水平,,,?,没有自旋方向的改变。 这个过程大概需要 以秒。这个过程在热平衡态或荧光态下保持活性分子状态。一 个荧光态的特性寿命为一.‘秒。态的活化能可能由几个不同过程中的其中一个释 放出来,取决于分子结构和它所处的环境。无活性染料通过光照散发荧光以及通过无辐 射把能量以热的形式传递到环境中来恢复到原有状态。高效能由一个捐赠者转换到另一 个接受者也许容易些。数种活化能机制已经被证实。长变化幅度过程涉及到在 活性的捐赠者和接受者之间的一个“偶.偶”交互。转化效率取决于捐赠者发射波段和 接受者吸收波段的交叠,内分子分离的反问力和捐赠者.接受者的相对方向。 第一章绪论 木?羔型亟篮?事 ... . . ? 。 .。‘ ??‘ 上村 图激发三线态光敏剂的形成及它反应的两种途径 . 寸 蕾 图? 图. 系统间连通是一个荧光态的另一种可能的结果。要求自旋反转和处于 低能三线态。三线态有相对长的固有寿命,因为自发转化到单线基态要求另外一种禁止 转变的低可能性的自旋反转。由分子结构中或媒介中的重原子创立。三线态的 辐射衰减形成的微弱散光被称为磷光或余光。热激活可以使三线态激发到可发出荧光的 高能量状态,继而是能散发具有荧光光谱的散发光和有长寿命的磷光。这个过程叫荧光 衰减。三线态染料因为有比较长的衰减期以及存在不成对原子价电子,所以是以化学方 法反应的。方法中可能由活性单线态引起的感光是不常见的。溶剂中的活性单线态的 不稳定复杂化合物一种激发态络合物和另外一些接近基质之间的快速电子转化反应 已经被证明。方法,由亚稳态三线态发起的光敏化反应由于长的衰减期和不同电子层 的不成对电子的分离而有优势。在方法的途径上,由敏感三线态分子氧能量的转江南大学硕士学位论文 化生成。 敏化反应中的三线态能量到基态必须超出的活化能.。许多生物分 子的三线态可以生成。用分子氧猝灭一个三线态染料是一个竞争过程。 坛%。%一坳%均 其中是五的特殊符号,电子转化可以通过能量转化和竞争。 一。 这里是感光氧化自由基,。是超氧阴离子基。超氧是过氧化氢基或过羟基 阴离子基。,.。这是活性氧反应的一个重要形式,它不同于那些。许多 细胞,包括血红细胞,都含有超氧歧化酶,它催化了超氧转化为过氧化氢。一些感光物 质也通过三线态和超电子转化产生的能量转化生成。三线态染料可以和许多基质反 应,而不是氧。这个过程既可以使染料回到它的基态物理分解又可以产生一个化学 反应化学分解。 ’捌 ?‘& 一 和凡都是分解自由基,‘是一个减少的光敏剂自由基。醌型染料。通常是一个 半醌。一个减少的光敏剂自由基是超氧的另一个可能来源。 ‘?‘ 。?? .化学反应法 化学方法有多种,其中最常用的是‘法【引,也有人成功地用.水 溶液反应生成【】, 等的研究还证实,可由过氧化离子和 各种局部被卤代的中间体反应获得,生物体系中的重要来源可能是超氧阴离子自由 基的歧化。大量的实验事实证明,在生物体内,超氧阴离子一旦产生就面临种命 运:一种是化学歧化成,另一种是在超氧化物歧化酶催化下歧化成基态氧。 下面就介绍两种化学反应法。 、放热化学反应:这些反应经常因为的放射衰减而带有化学发光。如过氧次 氯酸,亚磷酸盐等,它们热分解生成,反应如下: ‘? ’ 还有内过氧化合物,例如过氧,.二苯葸。 ?、 酶反应:的发光已经在酶催化反应体系中被报道,例如,氯过氧化酶.双 氧水一氯离子体系,乳过氧化物酶一双氧水.溴离子体系以及氯化物过氧化酶.双氧水.溴离 子体系。以下机理要追溯到二十世纪七十年代提议用氯过氧化酶: 。?‘ 。’ 第一章绪论 ..单线态氧的检测方法 直接发光检测法。 如表一所示,有种不同的存在状态,即??和?,在水溶液中,?的存在 寿命为 ,而 存在寿命更短,不到“,如此短暂的存在时间,导致了测定困难, 一般要求浓度在/以上,所以,水溶液中参与化学反应的往往是状态的 :。从表?中所表示的氧的各种分子轨道的电子排布可以看出,?具有亲电子的反 应特性,而?的激发态能量高于?状态的,电子由激发态跃迁回基态时以发光 的形式释放出能量,部分已知的发光波长如下图所示,在这些波长中,还无法肯定 胍和衄是来自于放射的能量,但是的发光属于发光的特异性 波长已被公认,通过测定这一波长的发光来确定的方法已广泛地得到应用?。 表?几种重要氧分子的结构状态 珂? 一。‘ ’ 。;’ 。“。弓 一 ;’【’】 ’一 目 目 目 目 三 吾 甓 一 一 丐。’?埕; 图?氟的单线态分子及其共转移分子对状态 】 江南大学硕士学位论文 化学发光检测法。 荧光素是用于化学发光研究的常用试剂,化学名称为一甲基苯基一,一二氢 咪 唑,吡嗪一一酮一一,一,】,简 称。年由日本化学家等人成功地合成了这一试剂。的特点是不与 生物机体内的或者?发生反应,只与‘或者发生特异性的化学发光反应, 如图.所示,发光波长为 这一现象已被应用于白血球的功能性检查方面的研 究【。引。等人【还开发了的衍生物,和,和等 人对这一类试剂的化学发光机理和反应的动力学作了详细的研究,报道了, 最长的 与活性氧的化学反应机理。是目前化学发光试剂中发光波长 试剂,发光效率高出近倍,由于这一特点,在进行生物样品中。或者测定 时,能够有效地降低酶和?等干扰物质的影响。 , 图甲壳动物荧光素的化学发光反应 . 电子自旋共振法法 作为活性氧的化学反应后的检测方法,可以理解成是一种自由基的标识反应, 即向活性氧生成的反应体系中添加本身带有不对称电子的自由基,这一添加物与活性氧 从而导致信号的变化。等在研究生物机体或者 发生反应后失去不对称电子, 生物膜的构造过程中,使用了硝基木酮自由基作为反应的添加物,硝基木酮自由基在与 。,。或者生物微粒体等的电子传输系统发生反应过程中,被还原生成 羟胺或者羟氨基,从而失去单自旋电子,在澳定中体现为信号的减弱。另外,与 ,,,.类似的哌啶衍生物,在的作用下,可与硝基木 酮自由基发生氧化还原反应,也可应用于的测定。但是,这一方法同样存在测定选 择性差的问题,除了‘以外,其他种类的活性氧或者电子供给体同样可以向硝基木酮 自由基提供电子,影响对信号的判断,需要得到进一步改进和完善。 第一章绪论 二苯卡巴肼氧化光度法【 光敏剂吸光敏化为三线态,与溶液中溶解的氧反应产生。后者与卡巴肼 反应,生成卡巴腙,以苯.四氯化碳萃取,在 处有强吸收,吸光度值 与光照时间和光敏剂浓度呈一定量效关系,从而可以检测的产生及其相对产量,方 法简便易行。 化学试剂间接捕获法 由于利用光谱技术检测比较难,利用化学试剂间接地捕获的方法就被发展 了。通过跟踪捕获剂的消失和过氧化物的形成来间接地得到产生的量。但捕获剂必 须与有高灵敏的反应。 ?水相中均相捕获 捕获剂不能扰乱研究的体系。再者,捕获剂还必须穿透入射光的在水溶液中, 光谱 范围,防止捕获剂自身的光敏化作用。溶于水的捕获剂一般有呋喃类和芳香多环盐等, 如,,.,,,,,,,等。这些化学捕捉试剂 都是水溶性的且产生和捕捉是在同一体系中,也就是说是在均相中捕获的。 但生物类和呋喃类捕获剂虽然与反应速率常数很大,但它们对不具有专一性, 它们和其他的活性氧也反应且生成的产物还不稳定。多环芳香环盐虽然与反应具有 专一性,但它们不具有商业性,不能直接买到。 ?油相中的均相捕获 油溶性的光敏剂和油溶性的捕获剂,.二苯蒽溶于同一种有机相中,如三氯甲烷, 在这个油相均相中进行捕获【。 ?气相中的非均相捕获 通过异源光敏化作用,在气相中产生,通过检测处的近红外的磷光发 射检测的产生【】。 ?色谱法? 等研究结果表明,与胆固醇发生特异性反应,生成【.过氧化胆固醇,而 胆固醇的自动氧化反应或者自由基反应的生成物分别为.过氧化胆固醇和. 过氧化 胆固醇,经过高效液相色谱分离后,可以确认不同的反应生成物。这两类不 同的生成物同时也证明与胆固醇反应的特异性。但是由于与胆固醇反应速度慢, 导致测定的灵敏度低,在实际应用过程中,往往采用碳标记胆固醇来提高检测灵敏 含有增感剂的磷脂度。这一方法已被应用于生物微粒体脂质的过氧化反应, 膜中产生的 的测定。 本论文的研究思路及主要研究内容 食品中的色素或对光敏感的物质在光照条件下可具有光敏剂的作用,诱发环境中的 基态氧转为具有高度氧化活性的,易与带双键的或含硫元素等多电子的物质发生 氧化反应,破坏脂肪酸,蛋白质,维生素,类胡萝素等营养成分,导致食品的营养 损失,产生有毒、有颜色的化合物,并丧失原有风味。与发生氧化反应的氨基酸, 江南大学硕士学位论文 主要为酪氨酸、色氨酸、蛋氨酸、组氨酸和半胱氨酸】。文献报道的有关光敏剂与氨基 酸作用体系多为水溶液,即均相,而食品中不同成分常见以异相配料。因此,有必要 研究光敏剂与氨基酸异相共存时的氧化作用。 将具光催化活性的金属络合物固定氧化铝、硅胶、黏土等支持物己成功用于 废水处 理【】,亚甲基蓝作为光敏剂吸附在硅胶颗粒也应用于生物医学领域。这些应用的基础 是光敏化致的产生,然而这些操作方法都比较繁琐。本文采用一种简便的固定化方 法,即将亚甲基蓝这种光敏剂固定到树脂上,构成固定化光敏剂与捕获剂溶液或反应物 溶液构成的异相光敏化体系。通过对异相光敏化体系色氨酸和酪氨酸氧化反应的研究, 以期获得对食品营养、风味损失等失效变质的机理的一些认识。主要研究内容为: 确定光敏化法产生的最佳条件; 固定亚甲基蓝依此构建异相光敏化体系; 研究色氨酸在亚甲基蓝固定光敏化体系氧化反应,考察影响因素: 研究酪氨酸在亚甲基蓝固定光敏化体系氧化反应,考察影响因素。 第二章实验室产生单线态氧体系的建立 第二章 实验室产生单线态氧体系的建立 .引言 单线态氧是活性氧的一种,容易在水溶液中产生,尤其在含有光敏剂的水 溶液中,在光源的照射下,光敏剂吸收光源能量,激发为不稳定的激发态,随后回到基 态,把能量传给基态氧,使其变为【。如化妆品,食品,和含有毒素的水溶液,含 有有机物的污水等这些体系,在有光,光敏剂的情况下都易产生。但是由于在 水中的寿命极短,约为“。因此使得在实验室中检测变得比较困难。已使用 的检 测的方法主要有电子顺磁共振技术和化学发光法等,但这些方法需要专门的检测仪 器,操作烦琐,应用受到限制。常用的化学捕获剂有呋喃及它的衍生物。它们都是水溶 性的,且直接可以购买到。不幸地是,它们中没有一种对具有专一性,由于室温下 它们最初的氧化产物在水溶液中是不稳定的,易转化为产物的分解物,而这种分解物也 可以从其它的氧化物中得到,也就是被其它的强氧化剂氧化为二酮类【引。芳香多环化合 物对具有高度选择性,与反应产生的过氧化物也相当稳定,在光敏剂存在下也 几乎没有电子转移【。但它们的盐溶液没有现成的,不具有商业性,即不能直接购买到。 因此就想到在异相中检测,利用有机相中的捕获剂去捕获水相中的,建立一个捕 获的异相体系。很早就有报道只溶于有机相的,.二苯蒽对捕获具有 高效性和专一性,且捕获速度快,速率常数为.ב~,它低温下与结合 紧密,在捕获中基本不进行副反应,而形成一个稳定的化合物的过氧化物 删。反应如下:??渤 本文建立实验室产生体系,确定光敏化法产生的最佳条件。 .试剂与仪器 ..实验试剂 ,.二苯葸 国药集团化学试剂有限公司 四氯化碳 国药集团化学试剂有限公司 亚甲基蓝 上海亚培生物科技有限公司 核黄素 国药集团化学试剂有限公司 荧光素 上海试剂三厂孟加拉玫瑰红 . 靛蓝胭脂红 国药集团化学试剂有限公司 重铬酸钾 国药集团化学试剂有限公司江南大学硕士学位论文 华晶水厂 超纯水 ..实验仪器 型双光束紫外可见分光光度计 北京普析通用仪器有限责任公司 上海三和医药器械有限公司 氧气袋 江苏太仓仪器厂 磁力搅拌器 日光灯 上海普照灯具 电子分析天平 公司 移液枪 美国 照度计 上海精密仪器仪表有限公司 .实验方法 ..实验前的准备 容量瓶、移液管、滴定管、烧杯以及石英比色皿等洗净晾干,铬酸洗液浸泡 过夜, 以超纯水洗净,晾干备用。 ..单线态氧的产生及捕获装置 具体实验装置如下图.。将一定浓度的四氯化碳溶液与光敏剂的水溶液等体 积倒入小烧杯,组成一个非均相的捕获体系,烧杯置于日光灯管 下 处光照,用照度计测得光照强度为,烧杯中的溶液在反应的同时用磁力搅拌器搅 上方覆盖盛有重铬酸拌。烧杯侧壁用铝箔纸包裹以避免直接光降解的发生, 钾水溶液 .之/的表面皿以滤除光源中可能存在的紫外光。 图反应装置图. ..二苯蒽浓度与单线态氧产生量测定 由于捕获速率大,产生的在猝灭之前被捕获,所以认为产生的都 被捕获生成过氧化物,即反应式为:,反应按: 的比例进行。所以用的减少量代表产生的量】。每隔一定时间用一型 双光束紫外可见分光光度计测定有机相的吸光度值。因为在处有最第二章实验室产生单线态氧体系的建立 大吸收峰,且在此处没有吸收,所以,以在处的吸光度降低值算出 的减少量。 .结果与讨论 ..捕获剂溶剂的选择 是一种无色晶体化合物,熔点在摄氏度之间,不溶于水,微溶于乙 醚,溶于苯、氯仿、二硫化碳、四氯化碳以及甲苯等有机溶剂。 实验的反应体系是一个由有机油相和水相组成的非均相体系,所以选择油相溶剂时 要符合以下几点:在其中能充分溶解,且溶剂稳定,不易挥发;该有机溶剂与 水不 溶,且与水相中的光敏剂不溶;在其中存在寿命长,还要使得溶剂受紫外光影 响较 小;溶剂的吸收峰与的吸收峰可以清楚区分。文献【列出了在几种溶剂中的 见表.。由表可看出,在,.,中存在时间远远长于 存在寿命, 在其它溶剂中的,但由于,不易买到,所以就选,两种普通易购买 的溶剂,又由于在中的寿命不如在中的长,且挥发性太强,因此就选 作为的溶剂。且光敏剂荧光素、亚甲基蓝、孟加拉玫瑰红、靛蓝胭脂红、核 黄素 都是水溶性的,在四氯化碳中完全不溶解,不影响对吸光度的测量。 表 在不同溶剂中的寿命 . 鳖型 堕囹坚 整型 堕囹坚水 乙氰氯仿 甲醇二硫化碳 乙醇 己烯 六氟取代苯 苯 四氯化碳一氟三氯化碳 丙酮 ..通气条件对敏化效果的影响 将浓度为.‘/的四氯化碳溶液加入比色皿,上加超纯 下 水,体系置于日光灯管 处光照并搅拌光照强度为,每隔一分 钟测在处吸光度值。一定时间后,倒出比色皿中的溶液,换上同样新溶液, 但这次的超纯水是预先通空气达到饱和的超纯水,同上时间间隔测在处吸 光值。再将超纯水换成等体积的光敏剂在同样条件下进行实验。结果如图.、 图.、 图.。江南大学硕士学位论文 。 . . . . 星基卫《 . . 未通空气通空气 图超纯水中通与不通空气的比较.. . . . 量暑卫《 . . .未通空气通空气 图 荧光素存在下通与不通空气的比较.? . . . 署基卫《 . . . 十未通空气通空气 图亚甲基蓝存在下通与不通空气的比较图 谢 第二章实验室产生单线态氧体系的建立 .. 由图.我们可以发现,的吸光度随时间变化的程度相同,说明超纯水在通空 气和没有通空气的条件下,产生的几乎相同,也就是说,在无光敏剂的条件下,通 空气与否对超纯水产生没有影响。由图.与.可以看出,光敏剂在通空气与不 通空气的条件下,产生有很大的区别,在通空气的条件下,溶液的吸光度随反 应时间的进行,下降的快,说明光敏剂在有足够氧气存在的条件下,起到一个促进 产生的作用。通过对比我们可以再次确定光敏剂确实存在敏化效果。我们可以得出这样 的结论:有足够的空气是光敏剂产生的必要条件。是在光敏剂,光,三线态氧 共同存在下产生的,首先该光敏剂吸收紫外光或可见光的辐射能源,并迅速成为不稳定 的激发单线态分子,随后激发的光敏剂经历了一个从激发单线态分子到激发三 线态分子的系间窜跃。光敏剂的激发三线态分子寿命大于激发单线 态分子。通过三线态.三线态猝灭机制,该激发三线态光敏剂与基态三 线态氧反应形成和基态光敏剂。此基态光敏剂开始下一个产 生的循环周期。由此可见,光敏剂是产生的催化剂,而产生量的多少取决 于反应体系中溶解的氧气浓度。 ..不同光敏剂敏化效果的比较 取浓度为.×/的四氯化碳溶液五份,分别倒进标号为、、 、、个容量的小烧杯,然后取浓度均为.×。/的亚甲基蓝.超纯 水溶液、荧光素.超纯水溶液、靛蓝胭脂红.超纯水溶液、核黄素.超纯水溶液以及孟加拉 .超纯水溶液分别倒进个小烧杯中,烧杯外包裹锡箔纸,然后放进烧杯玫瑰红 中 冰水浴,同时在上面盖上表面皿,表面皿盛有浓度为.之/的重铬酸钾水溶 液,然后边搅拌边用日光灯进行光照光照强度为,每隔分钟测有机相 在最大吸收波长处的吸光度值【引。以在处吸光度变化值对时间作图, 如图.。 量; 上 《 ,】 ??一核黄素孟加拉玫瑰红十荧光素靛蓝胭脂红一一亚甲基蓝 图不同光敏剂对产生的影响 .由上图可知,在同一浓度下孟加拉玫瑰红和亚甲基蓝的敏化效果最好,几乎差不多,江南大学硕士学位论文 靛蓝胭脂红次之,接下来是荧光素,核黄素的敏化效果最差。而亚甲基蓝比孟加拉玫瑰 红便宜,所以后面的实验选取亚甲基蓝作为产生的光敏剂。 ..光敏剂初始浓度的优化 取四份浓度为.×/的捕获剂溶液,分别倒进、、、四个 小烧杯,然后取浓度分别为.×~/、.×一/、.×/、 .ב/的四种亚甲基蓝的超纯水溶液一次倒进四个烧杯,烧杯外包裹上锡箔 纸,然后放进烧杯中冰水浴,同时在上面盖上表面皿,表面皿上盛有浓度为 . ‘/的重铬酸钾水溶液,然后边搅拌边用日光灯进行光照光照强度为 ,每隔分钟测有机相在最大吸收波长处的吸光度值。以吸 如图。 光度变化值对时间作图, 量 饕 互 《 ???卜??一?.? 代表浓度为./的亚甲基蓝溶液;代表浓度为./的亚甲基蓝溶液 代表浓度为.‘/的亚甲基蓝溶液;代表浓度为./的亚甲基蓝溶液 图.亚甲基蓝初始浓度对产生的影响 .由图可以看出在低浓度时,光敏剂的浓度越高,的生成速率也越快。由于实验 时间不足,本实验只取了较低浓度光敏剂浓度的影响,但据所查文献【 ,当光敏剂浓度 过高时,由于光敏剂的透光率下降,反而会影响光敏剂吸收光能,降低敏化效果。从上 图可见,代表的浓度敏化效果小,其它浓度都差不多,说明在低浓度。/数量 级敏化效果弱,光敏剂的浓度在接近/的数量级时敏化能力最强。 .本章小结 根据在溶剂中的寿命及其实验条件的限制,最终确定四氯化碳是捕获剂,. 二苯葸的最佳溶剂,从而建立起实验室产生的异相体系,即光敏剂与捕获剂不溶在 同种溶剂中。考察影响因素得到产生的量的多少取决于反应体系中溶解的氧气浓度; 所选用的五种光敏剂中,孟加拉玫瑰红和亚甲基蓝的敏化效果是最好的,且在较低浓度 时光敏剂的敏化效果随它的浓度的上升而上升,而当光敏剂浓度过高时,它的透光度下 第二章实验室产生单线态氧体系的建立 降,从而导致它敏化效果的下降;光敏剂的浓度在‘/的数量级时敏化能力最强。 江南大学硕士学位论文 第三章亚甲基蓝固定光敏化体系单线态氧产生的研究 .引言 在很多化学和生物反应过程中,单线态氧是一个重要的介质,一方面由于 它独特的反应,导致有机分子的氧化。另一方面,在聚合物的降解和生物细胞的损 伤或是保护中起着重要的作用。但是由于这些反应体系本质上是异相体系【。食品、化 妆品、药品以及细胞蛋白质组织中,也存在异相体系的氧化,因此就有必要建立异相体 系来研究的产生。文献报道建立异相体系的方法,有将光敏剂固定在硅胶颗粒上或 是涂在平板上,光照此固定载体产生,此在气流的带动下迅速传递到捕获剂的 溶液中【。也有报道固定捕获剂,即将的专一捕获剂涂在玻璃珠上,捕获剂 与中性白细胞噬菌过程中产生的反应生成的过氧化物【】。还有是 气相中的非均相捕获,通过异源光敏化作用,在气相中产生,通过检测处 的近红外的磷光发射检测的产生等等【。 由于这些固定方法都比较繁琐,且实验条件要求高,难于操作。所以要寻求一种简 并检测确定的产生。亚甲基蓝呈离子状单易操作的方法构建异相体系产生, 态, 而树脂是离子交换常用的吸附载体,树脂的交换吸附方法已成熟。所以本文将亚甲基蓝 这种光敏剂通过离子交换吸附到树脂上固定,建立亚甲基蓝固定的光敏化体系,并采用 的化学发光法和高效液相检测溶液法来确定亚甲基蓝固定的光敏化体系中 的产生。 .试剂与仪器 ..实验试剂 ,.二苯葸 国药集团化学试剂有限公司 四氯化碳 国药集团化学试剂有限公司 丙酮 国药集团化学试剂有限公司 乙腈 江苏汉邦科技有限公司 亚甲基蓝 上海亚培生物科技有限公司 重铬酸钾 国药集团化学试剂有限公司 氯化钠 国药集团化学试剂有限公司 型强酸性苯乙烯阳离子 国药集团化学试剂有限公司 交换树脂 ..实验仪器 .型双光束紫外可见分光光度计 北京普析通用仪器有限责任公司 型液相色谱仪 美国公司 .往复式水裕恒温振荡器 江苏太仓市实验仪器设备厂 日光灯 上海普照灯具 第三章亚甲基蓝固定光敏化体系单线态氧产生的研究 .型毛细管电泳电化学发光检测器 西瑞电子科技有限公司 系列智能式温控仪 无锡捷成工控设备厂 磁力搅拌器 江苏太仓仪器厂 照度计 上海精密仪器仪表有限公司 .实验方法 ..阳离子树脂的预处理 首先取一定量型强酸性苯乙烯阳离子交换树脂浸入约为两倍树脂体 积的氯化钠盐溶液中进行溶胀,大约过个小时,除掉水,用%.%溶液,其量 与上相同,浸泡树脂.个小时,放尽碱液后,冲洗树脂直至排出水接近中性为止:最 后用%溶液,其量亦与上述相同,浸泡?个小时,放尽酸液,用清水洗至中性 待用【】。 ..亚甲基蓝在树脂上的吸附固定 配制一定浓度的亚甲基蓝溶液,将一定量的经过预处理的树脂浸入一定体积的已知 浓度的亚甲基蓝溶液中,?避光振荡.个小时,过滤,洗涤,室温下干燥得吸附亚 甲基蓝树脂.。亚甲基蓝在树脂上吸附量从其溶液浓度的降低可计得。对于浓度 低的溶液,搅拌一段时间后,上层深色溶液逐渐变浅,最后接近于无色,此时 可以认为 所有的亚甲基蓝都被交换在树脂上;对于浓度高的溶液,搅拌一段时间后,取上层液通 过做紫外可见分析谱图,计算出其浓度,由于离子交换之前溶液浓度已知,由此可以算 出固定在树脂上的亚甲基蓝含量。 二苯蒽过氧化物发光检测 .. 称取.约固定亚甲基蓝质量分数为.%投入盛有浓度为 /的的四氯化碳溶液的容量的小烧杯中,小烧杯侧壁用铝箔纸包 裹以避免直接光降解的发生,上方覆盖盛有厚的重铬酸钾水溶液.‘/ 的表面皿以滤除光源中可能存在的紫外光【引。小烧杯中的溶液置于日光灯管 下 处光照光照强度为并搅拌。当溶液为的四氯化碳溶液时,将 捕获转为过氧化物,反应主要以方程一进行。氮气吹干溶 液,得到白色粉末状残留物。白色残留物置于探头,用系列智能式温控仪加 热,并以.型毛细管电泳电化学发光检测器检测光信号。 ..二苯蒽的高效液相色谱分析 按..方法所制得的白色残留物加丙酮复溶解后以高效液相色谱法分析,实验条 件【即:流动相为%乙腈水溶液,流速./,柱,进样量此,二极管阵 列紫外检测器检测。 ..树脂光谱扫描 将.用玛瑙研钵研成细粉末,用.型双光束紫外可见分光光度计测得 江南大学硕士学位论文 .粉末漫反射光谱,以空白作参比。 .结果与讨论 .。吸附亚甲基蓝树脂的稳定性 把干燥后的.放入水中,取水相样本扫描吸收光谱图,紫外可见光谱图显 示无亚甲基蓝的特征吸收峰,说明亚甲基蓝在树脂上吸附稳定,该固定化方法可行。 ..树脂吸附亚甲基蓝分子形态 亚甲基蓝分子当以二聚体、三聚体等聚集形态存在时,其光敏化活性有所降低 【】。因此有必要分析树脂吸附形态。在可见光区域,.粉末漫反射光谱与 水溶液ב/吸收光谱比较见图.。由图.可见,树脂吸附与水溶液 中分子有相同的光谱特性枷 ,表明树脂吸附分子形态为单分子形 态,它的光敏活性并不受到影响。 孚 芷 图 ?粉末漫反射光谱一与她水溶液吸收光谱? ? .一, ..化学发光法检测体系单线态氧的产生 据大量的文献报道【】,和许多有机化合物反应,包括烯烃、二烯类、硫化物、 芳香族、一芳香族、萜烯、类固醇、脂肪酸、黄酮、四环霉素、维他命、氨基酸、蛋白 质、核酸、血和胆汁色素和合成聚合物。这些反应大体归为三类。与环烯反应生成过氧 化合物的反应是其中一种,如下反应式: 一囝 这类反应的产物高能量,他们的热分解反应是化学发光。许多芳香族化合物 的过氧 化物已被证明,加热至一定温度可发生热解,产生和芳香化合物母体。为氧分 子的激发状态,可迅速返回基态并释放多余的能量,能量以光能的形式释放出来,即产 第三章亚甲基蓝固定光敏化体系单线态氧产生的研究 生发光现象。热分解释放反应活化能为./。将..所得白色残 留物置于探头加热,并以发光检测器检测光信号。结果图.表明,实验所得产物 在加热过程中发生不连续发光,所得产物在加热过程中在附近出现强发光现象。该 分解发光温度与文献报道值一致。证明此异相体系有的产生。 一 ,.?.洲 .. ,旷二苯蒽及其过氧化物色谱图 残留物加丙酮复溶解后,高效液相色谱法分析, 处检测,色谱图如.,色 谱分析结果表明,除存在保留时间.峰外,尚有保留时间的峰。通过 对该峰的紫外光谱图分析,保留时间出峰的物质在.之间没有吸 收峰,依照文献报道,在.之间,没有吸收掣,可以得出在保留 时间左右出峰的物质即是生成的。在保留时间左右出峰的物 质的紫外图有三个特征峰,即,,处有最大吸收,与反应物,.二苯 蒽的紫外光谱图相同,可以确定此时出峰的物质即为未反应的,.二苯葸。江南大学硕士学位论文 羧 / 王唾 鼙反应前后的色谱图.? 实验结果证明树脂吸附固定化的亚甲基蓝凇具有光敏化产生的能力。 。本章小结 对吸附在树脂上的做稳定性实验,证明在树脂上吸附稳定,不易脱落到它 的溶剂中。对比水溶的和树脂吸附分子形态,结果表明树脂吸附分子形态 具有与其在水溶液中相同的敏化效果。化学发光法和高效液为单分予形态, 相色谱法结 果证实构建的亚甲基蓝光敏化异相体系有的产生。第四章亚甲基蓝固定光敏化体系.色氮酸氧化的研究 第四章亚甲基蓝固定光敏化体系一色氨酸氧化的研究 .引言 .色氨酸是重要的氨基酸,广泛应用于食品、医药和饲料添加领域。近年来,由于 国内外饲料工业发展迅速,以及.色氨酸在医药工业上的用途不断扩大,而国内尚不能 大规模生产,因此使其成为一种国际市场上发展前景良好、国内市场需求较大的产品呻】。 .色氨酸以游离或结合态广泛存在于生物物质中,在种氨基酸中,它是结构复 杂的一种,也是惟一具有多方面生理生化功能的氨基酸。它是形成.羟色胺的前体,而 .羟色胺对动物体中的外围血管有很好的收缩作用。同时它以结合态存在于脑组织中, 起着对神经系统的控制作用。其次.色氨酸对促进细胞及组织生长,胃液及胰液的产生, 有着密切的关系,同时也是合成维生素烟酸的前体。在生物体内从.色氦酸出发还 可合成吲哚乙酸、色素、生物碱和辅酶等生物活性物质。由于它是人类和动物必需的 人体不能制造它,必须从膳食中摄取。所以现在国内外不少地种氨基酸之一, 区都把它 作为食品添加剂,以强化机体对蛋白质的利用率,对于强化食品提高植物蛋白的利用率 具有重要作用。 在医药方面,.色氨酸除具有抗抑郁作用外,还具有催眠作用。目前,常用的镇静 催眠药有巴比妥类和安定类,前者毒副反应较大,后者易产生依赖性,出现戒断症状。 而.色氨酸是一种天然营养素,其安眠作用比上述化学药物更为理想。它能使睡眠潜 伏期缩短,慢波睡眠延长,醒觉时间减少,增加总睡眠量,对难入睡、早醒、多梦等睡 眠障碍都有效【剐。另外,.色氨酸还有防霉、消毒以及阻止氧化的作用,可以作为鱼类 保鲜剂。 .色氨酸是继蛋氨酸和赖氨酸之后的第三大饲料添加氨基酸。从营养学角度看,. 色氨酸是很重要的一种必需的氨基酸,在普遍添加了蛋氨酸和赖氨酸的日粮中,.色氨 酸的添加更显重要。通过添加.色氨酸,能够调节日粮中氨基酸的平衡,促进 畜禽的生 长。另外,.色氨酸的代谢产物一羟色氨酸在动物体内有抗高密度、断奶等应激作用, 有促进球蛋白的产生、增强畜体抗病力的作用。由于.色氨酸生产成本在逐 在 渐降低, 日本与欧美已开始应用于猪饲料中。日本.色氨酸的年需要量已从不到吨增长到 吨以上。饲料中的.色氨酸含量是评价饲料营养价值的重要指标之一【‘】。 本章研究亚甲基蓝固定的光敏化体系中.色氨酸的氧化情况,考察.色氨酸的氧 化动力学,以及氧化速率的影响因素,和避免被氧化的方法。 .试剂与仪器 ..实验试剂 一色氨酸 国药集团化学试剂有限公司 亚甲基蓝 上海亚培生物科技有限公司 无水醋酸 国药集团化学试剂有限公司 无水醋酸钠 国药集团化学试剂有限公司江南大学硕士学位论文 磷酸钾 国药集团化学试剂有限公司 重铬酸钾 国药集团化学试剂有限公司 国药集团化学试剂有限公司 ×型强酸性苯乙烯阳离子 交换树脂 ..实验仪器 美国公司 型液相色谱仪 型双光束紫外可见分光光度计 北京普析通用仪器有限责任公司 .往复式水裕恒温振荡器 江苏太仓市实验仪器设备厂 公词 电子分析天平. 上海普照灯具 日光灯 磁力搅拌器 江苏太仓仪器厂 移液枪 美国 照度计 上海精密仪器仪表有限公司 .实验方法 .. 色氨酸分析 用。,.的醋酸盐缓冲溶液,.,。的磷酸盐缓冲溶液和去离 子水作为溶剂配制五组浓度为./的.色氨酸溶液,取每组.色氨酸溶液 于容量的棕色容量瓶中,每个棕色容量瓶中投入吸附亚甲基蓝质量分数为.% 的树腊?.。五组棕色容量瓶都放入往复式水裕恒温振荡器中振荡,每隔一定 时间吸取容量瓶中的溶液扫描光谱图,参比液为去离子水。依据.色氨酸在最 大吸收波 长处吸光值的变化求得.色氨酸在固定有光敏剂树脂上的吸附量。 ..光敏化氧化一色氨酸反应体系 称取一定量的己.色氨酸用值为.的醋酸缓渖液配制成浓度为./ 的.色氨酸溶液,称取.约.投入此浓度的溶液中,置于曰光灯管 下 处光照光照强度为并搅拌。烧杯侧壁晨铝箔纸包裹以避免直接 光降解的发生,上方覆盖盛有重铬酸钾水溶液.吒/的表面皿以滤除光源 中可能存在的紫外光。高效液相色谱法测定反应体系.色氨酸浓度。测定 条件【即:色谱柱柱嘲,.,流动相为坎乙腈:缓冲液, .:,流速./检测波长为;进样量此。 .结果与讨论 ..缓冲溶液?值对色氨酸在树脂上吸附的影响 由于实验是要分析.色氨酸的降解情况,检测.色氨酸随光照时间的变化。为了 排除.色氨酸在树脂上吸附的干扰,就要选取一种最佳值的缓冲溶液,作为.色氨 酸的溶剂,使得在此值时,.色氨酸在树脂上的吸附量最少。第四章亚甲基蓝固定光敏化体系.色氨酸氧化的研究 测定用不同值的缓冲溶液配制的一色氨酸在固定有敏化剂的树脂上的吸附量, 如下表.。 表.不同缓冲溶液中的一色氨酸在树脂上的吸附量 一 结果显示用.的醋酸盐缓冲溶液作溶剂时,一色氨酸在树脂上的吸附量最小, 振荡小时后吸附量为./。因此以后的实验都选.的醋酸盐缓冲溶液作 .色氨酸的溶剂。 ..单线态氧氧化一色氨酸的动力学研究 依照文献【,色氨酸与反应表示如下: / ’ 由于色氨酸的降解产物不稳定且多,所以给检测降解产物带来了困难,直接分析跟 踪色氨酸的降解情况。本文以降解率来表示一色氨酸氧化反应情况。降解率的定义为: % 降解率:兰盟 降解率?二? 这里。代表光照前的一色氨酸初始浓度,。代表光照时间后一色氨酸的浓度。 一色氨酸降解率随时间变化如图?所示。江南大学硕士学位论文 主 、, 姗 琏 进 程 减 羽 ???加印?的如?加 光照时间 图 一色氨酸随光照时间的降解率变化 . 反应初始阶段,一色氨酸降解很快,在前分钟,一色氨酸降解率随时间变化几 乎成直线关系