RP—HPLC法测定人血浆中富马酸比索洛尔的浓度
RP—HPLC法测定人血浆中富马酸比索洛
尔的浓度
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临床药学?
RP—HPLC法测定人血浆中富马酸比索洛尔的浓度
旦茎塑刘锡钧
(南京军区福州总医院药理科)
姜宏建/72_
(福建医科覃雨窟第一医院).
摘要以催醒胺为内标,建正了RHc击测定凡血策中害马酸比索洛尔的采虚.色谱柱采用NoVPkcs分析柱?流动相
为己腈甲醇磷酸O,39m.?)水r34:1.:6:,v),荧光拴刹波长232,"3C0nm(Ex/Era)血浆样品经碱化后乙醚提取可薇得良
好分离,血药采度在4,28nE,m【范围内呈线性蔓秉.相兰乐敷0.9998-最低检剐l泉度为zng/nfl生精样品的平均方法回艘丰98
34,1O54,平均提取回收章j0.,?l?,日日闩精密度RSDCrsx,;06. 关键词兰:譬些盎亟枣童兰兰塑鱼尊击!兰兰
富马酸比索洛尔(Bisoprolo[hem[fumarate, BF)是新一代选择性日肾上腺素能受体阻滞剂中
治疗高血压心绞痛及心动过速的首选药物,作用类
似阿替洛尔.对15脏的选择性作用强,为普萘洛尔的
4倍,为美托洛尔的5,1o倍.为研究淡药的人体相
对生物利用度和动力学过程,本文选择了,催醒胺为
内标..],建立了灵敏简便可靠的血浆中富马酸比索
洛尔高效液相色谱荧光测定法
1仪器及试药Waters高效液相色谱系统(包括
510型高压梯度泵,470型可变波长荧光检测器;
U6K型手动进样阀,Millennium2010色谱专家系 统及数据处理软件);XW80旋涡混合器(上海医科 大学仪器厂);802离心沉淀器(上海手术器械厂); HH?s112电热恒温水浴(江苏省医疗器械厂) 富马酸比索洛尔标准品(含量99.5),富马酸 比索洛尔胶囊(每粒含富马酸比索洛尔2.5rng),批 号:980205,均由西安有生医药研究所提供内标催 醒胺,军事医学科学院提供:乙腈为色普纯;甲醇-乙 醚,氢氧化钠,磷酸均为分析纯.
2色谱条件",流动相为乙腈:甲醇;0.09ntO[/ L_.磷酸:水(34:10:6:50%"//V).流速0.9mt? rain,,色谱柱为Nova—pttkCI84.0mm×1jcm 4m分析柱和Ct0m预柱,柱温25C,荧光检测 波长232/300nm(Ex/Em).衰减为8,增益为10 3生物样品的处理取肝素化血浆2mi,加内标 0.025mL(19,69g/m1),加1moL/[氢氧化钠0.1
涡旋混匀,加乙醚4mL涡旋l0min.振荡3 m【,
rain,离心(3000rpm,10min),取上层有机相3ml, 合并两次提取液,在40('水浴上氮气流吹干,用10'3 l流动相溶解残渣,取25l进样.
4结果与讨论
4.1色谱行为在上述色谱条件下,BF与内标有 很好的分离,且内源性杂质不产生干扰,色谱图(见 图).
C
图1富马酸比索洛尔HP1C色谱图
A.空白血浆B空白血浆加BF和内标C.^口服BF后血浆样 内标1内2BE
4,2标准曲线的制备BF贮备液为320g/
ml的水溶液,梯度稀释为0,1,0.2,0.4,0,8,1,6,
3.2bcg./ml工作溶液,内标工作液为l9,69g/m1 的水溶液,4c冰箱保存备用.取健康人空白血浆2. 0mt分别加人刻度离心试管中,再分别加人标准工 作液?使其浓度分别为4,8,16,32,64,128ng/mt,
涡旋混匀后,同"生物样品提取与分离"项下操作,进 样后的色谱图经数据处理系统处理,以浓度C(ng/ mL)对标准品与内标的峰面积比H进行线性回归. 回归方程为H--0.3108—0,6999C(n:=6,r一0. 9998).
4.3回收率分别于空白血浆中准确加人定是
的BF标准工作渡,按上述方法操作后进行ItlI—C 分析,按血浆标准曲线方程{皿4得浓度,求得方法回收 率空白血浆加一定浓度标准品提取后,与空白血浆 提取后加相应浓度的标准品进样测定所得各对应标 海蛱药学1999年第11卷第朝
——
一一一
准品与内标峰面积比值相比求得血浆样品的提取回 收率'见
1).
4.4精密度用空白血浆配制含BF4,16?64ng, nl样品各5管测定13内及日闻误差(见表1). 4.5灵敏度测定按信噪比(S/N)为3作为检;{《=f 下限,结果显示BF的最低检测浓度为2ng/ml. 4.6色谱分析条件选择经反复试验,发现来经衍 生化的BF在z32/3o0rim荧光波长处有较高的灵 敏度.流动相用乙腈代替部分甲醇,1分离度提高,峰 形改善,且降低成本,吊磷酸水溶液代替磷酸盐缓冲
液更有利于仪器系统,随着磷酸水溶液比例增加,
BF保留时问缩短.多次调整后,最佳比例确定为乙
腈:甲酵:0.09mol/L磷酸:水为34:10:6:
5O.
4.7提取溶媒的选择本文考察厂用二氯甲烷,乙
醚,乙酸乙醋为溶媒对BF进行提取测定,发现二氯
甲烷极易乳化,而乙酸乙醋提取率不稳定,囡此本文
采用乙醚为挺取溶媒,提取回收卒大干75-且方
法稳定+杂质峰很少,采用普通C.柱即有很好的分
离.
4.8血药浓度测定10名受试者口服BF(10
rag/人)后+用该法测定不同时问的血药浓度.数据
经3I87药动学程序处理分析为,级吸收二室模
型,药时曲线(见图2).测定结果表明一本文建立的
分析方法可满足BF药代动力学研究的需要,具有
灵敏度高,准确性好等优点.
图2受试者口服i0埘gBF胶囊药时曲线
参考文献
1张振清等:高效藏相色谱法测定^血浆中比索洛尔难度药物分析 杂志1?99;i6(2):78
2+JeanMadePoirier,eta【:Rapidaodsettsitivehighperformancehq—
uidchromatographicdeterminadon0fbisopmMinplaand
uriae.Jo~lrna[ofChromatography:988I42643l DeterminationofBisoprololHemifumarateinPlasmabyRP—HPLC OhenLuying—LiuXijun
(DepartmentofClinicalPharmacologyFu~otaGe~ereJ.0郫ltalmYedForceso{Nanjing)
JiangHong—jian
(DepartmentofPharmacy—theFirstAffiliatedHospita1.FujlanMedicalUniversity)
AbstractAmethodusingfluorimetricdetectionwasdevelopedforbisoprololhemifumaratec
orieer—
rratioriinplasmabyRPHI'IC.Theanalyticalco]umriwasNovapakC】8(4.Omm×
15cm,4vm).Themo
bilephaseconsistedofamixtureofacetonitrile,
methario[0.09mol/Lphosphoricacidwaterf34:10:6: 50).ThedetectivewavelengthVcaS232/300nm(Ex/Em).Thebisoprololinplasmacanbewe
llpurifiedaf
40
_J…"?"0
_l一一
terextractlonatalkalinewithdiethy[etherI'hecalibrationCHTVevcaNlinearintherangefro
m4to128ng/
m【(r一
0.9998),thedetectionlimitofthismethodwas2ng/m[.Fhemethodrecoveriesinsampleswer
e
98.34,105.43,theextractionrecoverieswere75.0l,97.48,andtheRSDofwithin—
dayandday—
todaywere0.73,9.06.
KeywordsBisopro[olhemifumaraterIP[CP[asmadrugconcentration
卜
HPLC法测定人血清卡铂浓度
谢瑞祥吴国森林川朱世权范芳
—
—(宿i瘤医院药学实验室)y7y'/
l).L
摘要应庳HPIc方法拴刹人血清中卡铂(0rb.山tIn)农度采用C18分柱及预柱,流动
相为重蒸水,漉速1.1mlirakt,拴剥
波长为229?并甩乙醚和氯仿去略内源性杂质干托妻验培果表明卡铂与向源性
杂质分离良好?保留时问为870,9—3】mln?在 血清中卡拍曰牧率96.49卡铂在1Pg,m【上线性关系良好.相差秉数r为0999g.曰
归方程Y一0373】X-0.】025.日内及日问变 异系数均小于6(?一5),最低检采度为1izg/m[ 关键词卡铂高技洼相色谱血药浓度
卡铂(Carbop[atin)为周期特异性抗癌药,直接 作用于DNA目前临床上广泛用于治疗小细胞肺 癌,卵巢癌,头颈部癌及恶性淋巴瘤,但它同时有较 大的骨髓抑制作用和肾毒性.国内外对其血浆浓度 的测定方法近几年已有所报巷..但样品预处理 时均未去蛋白及内源性杂质,去除不完全,从而极大 地影响了测定的准确性,稳定性和色谱柱的寿命我 们采用乙醚和氯仿分次去除内源性杂质,同时加入 50硫酸锌溶液进行去蛋白处理,而建立的测定卡 铂血浓度的方法具有准确,灵敏,色谱柱寿命长的优 点,适用于药代动力学的研究.
1材料与方法
1.1药品,试剂及仪器卡铂标准品为111东齐鲁制 药厂生产,重蒸水为本实验室制备,乙醚,氯仿,硫酸 锌均为分析纯.Beckman125泵,168紫外光检测 器.BeckmanODS预柱(4.6mm×5gil1),ODS分析 柱(4.6nlnl×25CHI).
1.2标准溶液配制精确称取卡铂1O0mg溶解 于250ml重蒸水中,配成浓度为0.4mg/ml的标准 储备液.置4?冰箱保存.
1.3色谱条件流动相为重蒸水,流速1.1ml/ nlin,检测波长为229nm,
1.4实验方法取含卡铂血清0.5ml置5mL具 塞试管中,加人3.8ml乙醚,振荡混合1,5min,
3000r/rain离心5lllin,分层后弃去乙醚层.在水相 中加人50硫酸锌溶液2滴和氯仿2.5ml,振荡混 台1.5rain,3000r/rain离心10rain,取上清液2o1 进样.
2实验结果
2.1卡铂色谱图用上述色谱条件及提取方法进 样后得血样色谱图,结果显示卡铂与内源性干扰杂 质完全分离.保留时间为8.70,9.31min(见图1, 2)
图l标准溶液色谱围
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