薄层色谱法测定大肠癌患者和下沉人粪胆汁酸代谢？…

薄层色谱法测定大肠癌患者和下沉人粪胆汁酸代谢？… 薄层色谱法测定大肠癌患者和下沉人粪胆 汁酸代谢,… 第18卷第3期中南民旗学院(自然科学版)Vol18No3 1999年9月JOURNALOFSOUTH—CENTRALCOLLEGEFORNATIONALITIES(Nat)sep.1999 ? 6;一f6薄层色谱法测定大肠癌患者和 正常人粪胆汁酸代谢情况的对比 施群l煎崔冶建付亚平黄杰安 —————一(湖北医科大学) 尺7, 摘要采用薄层色谱法测定分析大肠癌患者的FBA状况,将预先制备好的千粪进行葶取t然后 将胆汁酸标准品用无水乙醇配成0.mg/mL,另配胆计酸标准品混舍液0.4mg/mLt展开液按体 积比为异辛烷;己酸乙酯:球醋酸:正丁醇一30:5:3:3混合配置,5%的硫酸潜藏作为显色剂. 临用前将硅腔G高教薄层板置110?烘箱内活化2h后使用.薄层扫描仪检测波长370TLm.结果 表明太肠癌患者FBA,DCA及LCA浓度较正常对照组高(P<001). 关键词 分类号 薄层色谱法;大肠癌;胆汁酸 R385代耐便 大肠癌的发生与长期进食高脂,高蛋白,低纤维素食物有关.而胆汁酸(FBA)被认为是饮 食与大肠癌相关连的主要媒介物…,因为高脂高蛋白促进胆汁酸的合成和分泌,使 肠道内胆汁 酸浓度增大,后者有促癌作用.因此,文献-2]首次提出高浓度FBA是引起大肠癌的主要病因 这一假说,本文采用薄层色谱法测定分析大肠癌患者的FBA状况,并与正常人的FBA对 照,试图从中找到FBA与大肠癌的内在关联性,以期为大肠癌的一级防治提供依据. 1实验部分 1.1仪器与试剂 TIc扫描仪(CS930)(日本岛津公司),硅胶G高效薄层层析板(规格10cm×Z0cm,江苏 福山生化试剂厂),微量点样管(美国DRUMMONDSCIENTIFICCO),电热干燥箱(KWY一 , 150,武汉),电热恒温水温箱(KS--648,北京),胆汁酸标准品:胆酸(CA),鹅脱氧胆酸(CDCA), 脱氧胆酸(DCA),石胆酸(ICA),由美国SIGMA公司提供,纯度99.99,各种国产分析醇. 】.2色谱条件 扫描波长370nm.反射吸收测量方式,直线扫描,扫描间距0.5mm,纵轴放大×8,狭缝长 7mm,宽1mm.闻值5000. 1.3样品预处理 收稿日期:1998—05—20 施群,男,30岁,讲师,湖北医科大学实验检测中心,武汉430071 64中南民旌学院(自然科学版)第l8卷 将新鲜粪便置于80,100C烘箱过夜,次13取出研成细末,准确称取0.5g干粪放人试管 用60C无水乙醇抽提3攻,每次3mL,充分震荡后离心15min,上清集于85c水箱蒸 干,加 0.5mL无水乙醇洛解管内残留物,供点样用. 1.4病倒分组 正常对照组(N):16例,男l2倒,女4例,平均蚰岁.太肠癌组(C):24例,男14例,女10 例.平均52岁. 病例选择应符合下列条件:收集粪便前未服用任何药物,饮食习惯正常,大肠癌患 者经过 医院病理证实,正常对照组为正常健康人或非消化道良性疾病患者. 2结果与讨论 2.1胆汁酸标准品 胆汁酸标准品展开示意图见图1.其测量 CA,CDCA,DCA,ICA的RF值分别为0.19, 0.34,0.41,0.66. 2.2标准曲线 每一种浓度为0.4mg/mL的胆汁酸标准 品溶液均点1020,3O,4050p-L,即点样量为 4,8,l2,l6,20I,同时展开定量,结果见图2, 线性关系良好. 2.3方法的重复性 'J ? 々? 『l刊m} 一一一一1一 …Il 1n.I,t11I 鼢L:]JLI'?』上j一" 固1标准胆酸蘸层层折示意图 选取30【的4个点,程序自动扫描,同一点重复扫描5次,结果见表l 寰1斑点重复性结果 2.4回收率 从同一千粪标本清取材4份,各0.5g,然后依次加人逍度为0.4mg/mL的胆汁酸标准品 混合液0mL,0.5mL,lmL,1_5mL,相当于样品中加^各种胆汁酸0mg,0.2mg,0.4mg, 0.6mg,再按前法荦取测定胆汁酸的古量,按此计算回收率,结果见表2. 表2回收率结果 第3期施群等:薄层色谱法测定大肠癌患者和正常^粪胆汁酸代谢情况的对比分析65 , 慝 R 鞋 畦 点 =4,I0.,u.9.,,一 L,一 f l1t一J: 点佯f =833708I152】lr_0.1s{l;一3393 图2胆汁醚各标准曲线 8I2I' r .'r一 2.5大肠癌患者同正常对照组FBA的测定 对照大肠癌病人组(C),正常人组(N)的CA,CDCA,DCA,LCA及总胆汁酸(TBA)测 量 结果并统计.结果见表3. 表3大肠癌患者同正常对照结果 2.6大肠癌患者和正常对照组初,次级胆汁酸含量比较 大肠癌患者和正常对照组初,次级胆汁酸含量进行了比较,其结果见表4 表4大肠癌患者和正常对照组初,攻级胆汁酸台量比较 r ? 轴 4 66中甫民族学院(自然科学版)第l8卷 2.7讨论 本研究利用TLC法测定大肠癌患者同正常人FBA代谢状况,结果发现大肠癌患者总 FBA,DCA,LCA浓度较正常对照组高(<0..】),LCA/DCA,DCA/CA增高,表明大肠癌患 者存在商DCA,LCA状态,高浓度FBA尤其是DCA,LCA可能是大脑癌发病原因之,.FBA 作为饮食与大脑癌联系的主要媒介物,测定FBA浓度可作为临测大肠癌及高危人群的筛查手 段和调整饮食习惯结构的指导. 参考文献 MartinK.NewandVersatileMethodf0rtheDeterminationofFecaI131leAcidsbyTLCChro matography withDirectScanningFluorimetry.jChromatogram.1989.4974139~146 ImrayCH,Radleys.DavisA.FecalUnconjugatedBileAcidsinPatientswithCoLorectalCan cerorPolyps. GUt.1992,33(9):1Z39,1245 冯国光.粪胆汁酸与太肠癌关系的研究.上海第二医科大学,1991,II(9):301 李平.测定粪中胆计酸组成有益于结肠癌的诊断和菏查.国外医学情 报,1993,(12):12 玛国光.大肠癌患者粪胆计酸代谢情况的研究.肿瘤,1990,lO(1):21,22 StudyofThin—LayerChromatographicMethod onMetabolismofBileAeidsinPatientswithColorectaI CancerandHealthySubjects ShiQunLiuChunxinCuiYejianFu]rapingHuangJiean AbstractWeextractedthepreformdryfecal,Andthenconfectedbileacidsstandardsample byethylabsoluteinto0.4mg/mL.Ontheside,Themix—liquorofbileacidsstandardsample isthesameconcentration(0.4mg/mL).Theoutspreadliquidisooctaneaceticanhydride: acetum:aldol=30:5:3:3.Thedisplayleechdomis5H2SO..Beforeusingthosesilica gelhighperformancethin—layerplate,Putthemintoaoven(1lO'C)tor2htOdry.TheTLC scannerdetectedat370nm. Keywordsfecalbileacids;colorectalcancer;thin—layerchromatography ShlQuaLect.+ExperimentCenter,Hube[MedicialUniversity,Wuhan430074