高效液相色谱法测定小儿惊风七厘散中黄芩苷的含量
高效液相色谱法测定小儿惊风七厘散中黄芩苷的含量
【摘要】 目的:
建立高效液相色谱法测定小儿惊风七厘散中黄芩苷的含量。
:
采用shim pack CLC ODS色谱柱(6 mm×150 mm),流动相:
甲醇 水 冰醋酸(45?55?0.5),流速
1.0 mL/min,柱温40 ?,进样量10 μL,
波长277 nm。结果:
黄芩苷在进样量0.01,0.07 mg/mL范围内浓度与峰面积线性关系良好,回归方程为Y=1486379X 3748(r=0.9999,n=7),平均加样回收率为103.12%,RSD为
1.76%。结论:
本方法快速、简便、结果准确,可用于控制该制剂的质量。
【关键词】 高效液相色谱法 小儿惊风七厘散 黄芩苷 ,Abstract,
Objective:To establish an high performance chromatography (HPLC) method to assay the concentration of baicalin in Xiao er Jingfeng Qili San. Methods: Shim pack CLC ODS (6 mm×150 mm) column and a mobile phase of methanol, water and glacial acetic acid (45?55?0.5) was used with the flow rate of
1.0 mL/min and the column temperature of 40 ?. The detection wavelength was 277 nm. Results: There was a linear relationship within the range of 0.01,0.07 mg/mL and the regression equation was Y=1486379X 3748 (r=0.9999, n=7). The recovery rate was 103.12% and RSD was
1.76%. Conclusions: This method is simple and accurate and able to control the quality of the preparation. ,Key words, High performance liquid chromatography; Xiao er Jingfeng Qili San; Baicalin 小儿惊风七厘散收载于卫生部药品
中药成方制剂第十一册,由牛黄、麝香、天麻、黄芩、黄连等33味中药组成,具有祛风化痰、解热镇惊的功效。临床上用于小儿外感风邪、惊风抽搐、咳吐痰涎、食滞呕吐、腹痛泄泻等症。其中黄芩苷是黄芩的有效成分,在现行质量标准中无含量测定指标,1,。目前为止,用高效液相色谱法测定小儿惊风七厘散中黄芩苷含量尚无报道。为了更好地控制该制剂的质量,本实验建立了高效液相色谱法测定小儿惊风七厘散中黄芩苷的含量,并经方法学考察,认为本法简便快速,结果准确,可用于该制剂质量控制。
1 仪器与试药 LC 10AD 高效液相色谱仪,SPD 10A紫外可见光检测器,CTO 10A柱温箱,C R6A数据处理机(日本岛津公司);CQ 250 超声波清洗器(中船总公司七二六研究所)。黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所提供,批号为110715 201714);小儿惊风七厘散(腾冲县东方红制药厂,
:
0.2 g/瓶,批号:
2017070
6、2017070
3、20171105);甲醇为色谱纯,冰醋酸为分析纯,水为纯化水。
2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱:
shim pack CLC ODS色谱柱(6 mm×150 mm);流动相:
甲醇 水 冰醋酸(45?55?0.5),2,,流速
1.0 mL/min;检测波长:
277 nm;柱温:
40 ?;进样量:
10 μL。理论塔板数按黄芩苷峰计算为4 156,拖尾因子为
1.03。此条件下主峰与杂质峰达到基线分离。
2.2 对照品储备液的配制 精密称取真空减压干燥至恒重的黄芩苷对照品10.0 mg,置100 mL容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,得浓度为0.1 mg/mL的对照品储备液,备用。
2.3 供试品溶液的制备 取本品0.1 g,精密称定,置25 mL容量瓶中,加50%的甲醇溶液适量,超声处理30 min,放冷,用50%的甲醇溶液稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液备用。
2.4 阴性对照溶液的制备 按小儿惊风七厘散处方量和工艺制备方法制成不含黄芩的阴性样品。取阴性样品0.1 g,按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。 2.5 阴性对照试验 按照上述色谱条件,吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μL,分别注入液相色谱仪,结果见图1。阴性对照溶液中的组分不干扰供试品溶液中黄芩苷的测定。黄芩苷的保留时间为15.8 min。
图1 高效液相色谱图(1 黄芩苷)(略) 2.6 标准曲线 分别精密量取0.1 mg/mL的对照品储备液
1、
2、
3、
4、
5、
6、7 mL,置10 mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,分别精密吸取上述溶液10 μL进样,测定峰面积,以色谱峰面积(Y)为纵坐标,对照品溶液浓度(X)为横坐标,外标法得黄芩苷标准溶液的线性回归方程为:
Y=1486379X 3748(r=0.9999,n=7),结果
明黄芩苷浓度在0.01,0.07 mg/mL范围内与峰面积线性关系良好。
2.7 精密度试验 精密量取浓度为0.1 mg/mL的对照品储备液3 mL置10 mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,得浓度为0.03 mg/mL对照品溶液,取上述溶液10 μL,一天内重复进样5次,测得各次峰面积分别为404
10、4043
7、4050
4、4089
2、40632,以峰面积计算精密度,结果日内RSD为0.49%。