氟对家蚕胚胎培养细胞蛋白质种类的影响(简报)
氟对家蚕胚胎培养细胞蛋白质种类的影响
(简报)
.级,豁
.浙江农业大学g1(2)
看胁
氟对家蚕胚胎培养细胞蛋白质种类的影响(简报)?
.竺里苎
(浙江农业大学蚕学系,杭州310029)
EffectofFluoridePoisoningonProtein
SilkwormembryoCells
l1/《酱
KindYnCuIt,ured
LShunlinGuGuoda
(DepartmemofSerlculture,ZhejiangAgriculturalUniversity,Hangzhou31
0029)
由于乡镇工业的发展,蚕区大气氟污染
越来越严重,家蚕的氟中毒已经成为养蚕生
产的重大问题,目前的研究表明,家蚕氟中毒
的病理学
相当复杂,笔者仅以家蚕胚胎
培养细胞为材料.用SDS.聚丙稀酰胺凝胶电
泳
对氟中毒的家蚕胚胎培养细胞进行了
蛋白质种类
,现将结果简报如下.
1材料与方法
1.1试验材料材料为日本京都工艺纤
维大学应用生物学科病理微生物研究室长期
保存的家蚕胚胎培养细胞(N细胞株),培
养液为含有10胎牛血清的BML.T/1O培
养液].培养温度为27c,每隔5—6天以1
:1的分离继代.
1.2氟中毒处理在BN细胞继代24
小时后,向培养液注入无菌的氯化钠溶液,使
培养液内氟化钠的浓度为48,ugtmL口].对照
样品中注入等量不含氯化钠的无菌水.静止
培养72小时后,将细胞用作SDS一聚丙稀酰
胺凝胶电泳的材料.
1.3显微镜观察在倒置显微镜下直接
观察氟中毒BmN细胞和对照细胞,并进行
显徽镜摄影.
1.4凝胶电泳将氟中毒的BmN细胞
收穑日期{1999-O1-l6
?国束自然科学基金资助项目
和对照细胞分别从培养瓶中冲洗下来,移入
离5-管,4000r/min离心5分钟,再用生理
盐水洗涤和离心2-3次,然后移入玻璃匀浆
器内研磨匀浆,将匀浆液作为电泳的材料.
SDS?聚丙稀酰胺凝胶电泳的方法按郭郛等
方法进行0].
上述试验在日本京都工艺纤维大学应用
生物学科病理微生物研究室内进行.
2试验结果
2.1显微匏观察结果对照细胞为不规
则的四形和椭圆形,细胞表面光滑(圈1).氟
中毒细胞开始时细胞表面出现许多囊粒状突
起(或是凹陷,见图2).培养一周后氟中毒细
胞萎缩,细胞膜破裂,内容物析出,细胞死亡
(图3)
2.2中毒细胞的电泳图谱中毒细胞匀
浆的SDS.聚丙稀酰胺凝胶电泳重复进行12
次.其电泳图谱见图4.比较氟中毒细胞的电
泳图谱(F)和对照细胞的电泳图谱(cK),发
现氟中毒细胞没有产生新的谱带.也没有缺
少任何原有的谱带.
3讨论
虽然BN细胞中毒后细胞表面结构和
形态发生了很大的变化,但它的电泳图谱与
正常细胞相比较却完全相同.说明BmN细
胞氟中毒后不合成新的蛋白质,也不缺少原
l
L
,
睡
磊
琴?
220新江农业大学21卷
圈1正常的BN细胞(×1200)
F1NormalBlN’cells(×12b0)
圈3氟中毒的BN细胞(×I200)
F.3B-N.ec[IsofFluoridepoisoning(×1200)
(Cells?restaticallycultedforsixdays.cell
rupturesandibcontentsfl0w0ut)
有的任何一种蛋白质,即B.N细胞氟中毒
后细胞内的蛋白质种类没有变化.
参考文献
1GardinerGR.StockIlaleH.T肿tissuecuhure
mediaforproductionoflepop瑚ncdlsandn
图2氟中毒的N细胞(×1200)
F.2BmlbofFluoridepoLconi~(X1200)
(CellsarestaticallycLlltfortwodays,Alotof
g『anukapt?thesurfaceofcdls)
戆慧
图4氟中毒细胞和对照细胞电泳图
F.4矾ce?op}哪g?ofBmN|ceUs0ffluoridepo
soDJ~gandelectrophez~gramofnormalB-N|
cells
dearpolyhedroslsviruses.Jour~lofinve~rtebrate
pathology,197525}363—37O
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蓄薹纛瓣蘩苎
鎏量重冀孽
盛羹薹露熬