【doc】高效液相法测定血美安胶囊中丹皮酚和芍药甙的含量

【doc】高效液相法测定血美安胶囊中丹皮酚和芍药甙的含量 高效液相法测定血美安胶囊中丹皮酚和芍 药甙的含量 3期 海南医学院2002,8(3):143—145 lournalofHainanMedicalCollege143 高效液相法测定血美安胶囊中丹皮酚和芍药甙的含量 涂峰 (湖北省宜昌市民康药业有限公司,宜昌443002) 摘要目的:用ttPLC法测定血美安胶囊中丹皮酚和芍药甙的含量.方法:用75%乙醇提取样品, 所得样品溶液同时用于丹皮酚和芍药甙的含量测定.色谱条件:C8色谱柱;丹皮酚测定所用流动相 为水:乙腈:冰乙酸(60:40:3),检测波长为274nm;芍药甙测定所用流动相为甲醇:水(30:70),检测波 长为230nm.结果:丹皮酚和芍药甙的线性范围分别为0.0344-0.1720g/L和0.0792, 0.3960g/L,平均回收率分别为99.9%和99.6%.结论:本方法简便,快捷,重现性好,可用于血 美安胶囊中这2种成分的含量测定. 关键词血美安胶囊;酚类;芍药甙;色谱法,液相 中图分类号:R927.2文献标识码:A文章编号:1007—1237(2002)03—0143—03 DETERMlNATlONOFPAEONOLANDPAEONlFLORlNCONTE— NTSlNXUEMEIANCAPSULEBYHPLC TuFeng (MinkangPharmaceuficMLimitedCompanyofYiehangCity,Yichang443002) ABSIRACTObjective:Toestablishamethodfordetectingthecontentsofpaeonoland paeoniflorinintheXuemeiancapsulebyHPLC.Method:Thesampleswereextractedwith75 % ethanolandsamplesolutionwasusedforthedeterminationofbothpaeonolandpaeoniflorin.The water:acetonitrile:acetic(60:40:3)andmethanohwater(30:70)mobilephaseswereperformedbyC18 colomnforpaeonolandpaeoniflorinrespectivelyandthewavelengthsofdetectionweresetat274nm and230nmforforpaeonolandpaeoniflorinrespectivelybyHPLC.Results:Thecalibrationswere linearintherangeof0.0344, 0.1720g/Lforpaeonolandpaeoniflorinrespectively.Theaveragerates ofrecoverywere99.9%and99.6%forpaeonolandpaeoniflorinrespectively.Conclusion:Thismethod issimple,quickandreproducibleandcouldbeusedforthedeterminationofthetwoconstituentsinXuemeian capsule. KeywordsXuemeiancapsule;phenols;paeoniflorin;chromatography,liquidphase 血美安胶囊为湖北省宜昌市民康药业有限公 司研究并生产的第3类新药,主要成分为猪蹄甲, 地黄,赤芍和牡丹皮,具有清热养阴,凉血活血作 用.由于本品的标准中丹皮酚和芍药甙的含量测 定方法存在着繁琐,费时等缺点,在实际生产中经 常因需测定血美安胶囊半成品的含量而使生产受 到延误,故需建立新的测定方法.本文建立的这2 种成分的高效液相(HPLC)测定方法简便,快速, 准确,能够满足实际生产的需要,且国内外相关文 献未见报道. 1试验材料 1.1仪器 美国WATERS高效液相色谱仪1套,配"奔 ?"微型电脑1台以及南京千谱有限公司提供的 个J,简介:涂峰(1967-),男,湖北省武汉市人,湖北省宜昌市民康药业有限公司 师,学士. 144海南医学院8卷 色谱工作站. 1.2试药和样品 血美安胶囊:湖北宜昌民康药业有限公司提 供;丹皮酚和芍药甙标准品:中国药品和生物制品 检定所提供.经干燥处理后含量均按100%计. 2方法与结果 2.1样品溶液的制备 取本品(批号为20001104)细粉约1g,精密称 定,置具塞锥形瓶中,精密加75%乙醇5OIIll,称 定质量,超声处理40rain,放冷,称定质量,用75% 乙醇补足减失的质量,用滤纸过滤后再用O.45m 微孔滤膜过滤,即得. 2.2丹皮酚的含量测定 2.2.1色谱条件色谱柱:日本TOSOH牌 ODS-80Ts色谱柱(250mmx4.6mm,5m);流动 相为水:乙腈:冰乙酸(60:40:3);流速:1ml/min;柱 温:3Ooc;检测波长:274nm. 2.2.2线性关系精密称取丹皮酚标准品(在 无水氯化钙中放置1h以上)8.60mg,加甲醇定 容至5OIIll.准确吸取丹皮酚标准溶液2,4,6,8, 1Oml,用甲醇稀释至1Oml,各吸取10l,依次 进样,以丹皮酚峰面积值对其浓度进行回归, 得回归方程为:y=6064545lx-31632,相关系数r=- 0.9997,结果在O.O344一O.1720mg/m]范围内浓度 与峰面积值呈线性关系. 2.2.3测定精密吸取样品溶液1O1进样分 析,结果见表1和图1.(注:图中12.2min的出峰 即第4号峰为丹皮酚的色谱峰,该峰的不对称度 为1.o3,理论板数为14184). 表1样品含量测定结果重复性 2.3芍药甙的含量测定 2-3.1色谱条件色谱柱:日本TOSOH牌 ODS-80Ts色谱柱(250mm×4.6ITlm,5m);流动 相为甲醇:水(30:70);流速:1ml/min;柱温:3OcI=; 检测波长:230nm.(现行标准中的测定波长为 235nm,有文献记载芍药甙的测定波长为 230nlTl,笔者将一定浓度的芍药甙标准溶液置于 WATERS2487型检测器下进行紫外扫描,结果在 230nnl处有最大吸收,故本文采用230nm为测 定波长). 2-3.2线性关系精密称取在8OcI=干燥至恒重 的芍药甙标准品19.8Omg,加甲醇稀释至50IIll. 分别吸取芍药甙标准溶液2,4,6,8,10ml,用甲醇 稀释至1Oml,各吸取1Ol,依次进样分析,以芍 药甙峰面积值对其浓度进行回归,回归方程为: y=16050657x+19691,相关系数r=O.9997,结果在 0.0792-0.3960mg/ml范围内浓度与峰面积值呈 线性关系. 2.3.3测定精密吸取样品溶液1Ol进样分 析,结果见图2和表1.图中9.7min的出峰即第5 号峰为芍药甙的色谱峰,该峰的不对称度为0.94, 理论板数为5314. 2.4回收率实验 准确吸取丹皮酚标准溶液(O.1376g/L)和芍 药甙标准溶液(O.3168L)各5II1l,加入1g样品 中做样品添加回收试验,结果见表2,丹皮酚的平 图1样品的丹皮酚含量测定色谱图图2样品的芍药甙含量测定色谱图 3期涂峰.高效液相法测定血美安胶囊中丹皮酚和芍药甙的含量145 均回收率为99.9%,RSD为0.96%,芍药甙的平均 回收率为99.6%,RSD为1.03%. 2.5比较实验 分别用本文建立的方法和现行标准中所采用 的方法测定所取3批血美安胶囊中丹皮酚和芍药 甙的含量,结果见表3. 表2含量测定回收率实验结果 表32种成分含量测定结果比较【mg/g) 注:2种方法所得结果比较.P>0.05 3讨论 本文中的方法是利用了丹皮酚和芍药甙溶解 性能相似的特点实现了二者的同时提取,又因丹 皮酚易挥发,提取过程避免了加热,使得丹皮酚在 提取过程中没有损失,而且提取方法比现行标准 要简便得多,是一种可行的丹皮酚和芍药甙的含 量测定方法. 现行标准中丹皮酚的含量测定利用丹皮酚易 挥发的特点,采用水蒸汽蒸馏法实现丹皮酚的提 取,整个提取过程需要2h左右,由于还需做平行 样,1个批号就需要4h,5批则需20h,相当于3 d(按工作13计算).现行标准中芍药甙的提取方法 极为繁琐,费时[11,1个批号的提取需要 2d的时间,同时进行5批样品的提取则至少需要 3d.本文中的方法采用的是超声处理,由于1 个超声处理器可容纳10个具塞锥形瓶,故可在 40min内完成5批样品的丹皮酚和芍药甙2种有 效成分的同时提取,大大提高了工作效率. 在乙醇溶液中很稳定,芍药甙在乙醇溶液中 的稳定性较低,故先进行芍药甙的测定. 参考文献 1胡梅素.王健.HPLC测定血康中的芍药甙含量.中成 药,1995,17(7):31 (2002-01—09收稿)