RP-HPLC法测定鹤草芽栓中鹤草酚的含量

RP-HPLC法测定鹤草芽栓中鹤草酚的含量 RP-HPLC法测定鹤草芽栓中鹤草酚的含量 ? 638?中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第35卷第6期2004年6月 的影响可能与pH值无关.原因有待进一步研究. 3.3本实验条件下,检测出桂枝中的另3个成分,均 达到较好的分离,经MS鉴定分别是r一苯基丙烯醇 (tR一5.21min),香豆素(,R一7.50min),P一甲氧基 肉桂醛(,一7.92min).以丰度值对3种化合物定 量,进行统计学分析,结果明麻黄,杏仁,甘草及两 两交互作用对三者含量的影响差异均不具有显着性. 3.4本实验对麻黄汤进行拆方组合后,从臣药桂枝 主要效应成分桂皮醛含量的变化层面上阐述麻黄汤 配伍的意义.麻黄降低桂皮醛的含量,相应桂枝亦降 低麻黄碱,伪麻黄碱的含量_】],提示桂枝可能通过自 身效应成分与麻黄中成分反应降低麻黄的毒副作用. Reference: [1]LiJL,ChenFL,LiuCM,eta1.Determinationofephedrine andpseud0ephedrineinMAHUANGTANGbyGCMSand effectofcompatiblemedicinalherbsonconcentrationof componentsindecoction_J].ChinTraditHerbDrugs(中草 药),2002,33(4):307—309. RP—HPLC法测定鹤草芽栓中鹤草酚的含量 陈晓辉,毕开顺,郭金华. (1.沈阳药科大学药学院,辽宁沈阳110016;2.辽宁省疾病预防控制中心,辽宁沈阳110005) 摘要:目的建立鹤草芽栓中鹤草酚的含量测定方法.方法采用RP—HPLC法.使用Nova—PakC.(250mm× 4.6mm,5m)分析柱,甲醇一水一三乙胺(80:20:0.2)为流动相,检测波长292nm,流速为0.8mL/min,进样量为 2OL.结果鹤草酚在12.5,125mg/L与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为98.2,RSD为1.5(= 9).结论该方法简便,快速,重现性好,适用于鹤草芽栓中鹤草酚的定量分析. 关键词:鹤草芽栓;鹤草酚;反相高效液相色谱 中图分类号:R286.02文献标识码:B文章编号:0253—2670(2004)06—0638—02 QuantitativedeterminationofagrimopholinHecaoyaSuppositorybyRP—HPLC CHENXiao—hui.BIKai—shun,GUOJin—hua. (1.SchoolofPharmacy,ShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang110016,China; 2.LiaoningCentreforDiseaseControlandPrevention,Shenyang110005,China) Keywords:HecaoyaSuppository;agrimophol;RP—HPLC 鹤草芽栓是由鹤草芽提取物制成的栓剂,具有 消炎止痒,杀滴虫等作用,为妇科外用药.其有效成 分为鹤草酚_l,23.目前采用薄层色谱法,比色法和重 量法对鹤草芽所含酚类物质总量进行测定,以控制 产品质量_3].因操作烦琐,费时,专属性差等缺点, 使产品质量不能得到有效的控制.为完善和提高鹤 草芽栓的质量标准,使之达到科学化,标准化,本实 验探讨了采用RP—HPLC法测定鹤草芽栓中鹤草酚 的含量,并且收到了满意的效果.该方法快速,准确, 简便,灵敏度高,重现性好. 1仪器与试剂 TSP高效液相色谱仪,Waters515输液泵, Waters486型紫外检测器,PC800色谱数据工作 站.甲醇(色谱纯),三乙胺(优级纯),氯仿(分析纯); 鹤草酚对照品由沈阳药科大学提供,经归一化法测 定纯度为99.2;鹤草芽栓由抚顺制药厂生产. 2方法与结果 2.1色谱条件:色谱柱:Nova—PakC18(250mm× 4.6mm,5um);流动相:甲醇一水一三乙胺(80:20: 0.2);检测波长:292Ilm;流速:0.8mI/min;进样 量:20L. 2.2系统适用性试验:取供试品溶液,在上述色谱 条件下进样,以鹤草酚色谱峰计算,理论塔板数为 3500,拖尾因子0.96,分离度大于1.5,且鹤草酚的 峰与其他成分可获得基线分离.本法测得最低检测 浓度(S/N>3)按鹤草酚计为6/~g/mI,最低定量浓 度(S/N>10)按鹤草酚计为15ttg/mL. 2.3标准曲线的绘制:称取鹤草酚对照品约25 mg,精密称定,置于100mL量瓶中,用少量氯仿溶 解后,用甲醇稀释至刻度,摇匀作为对照品储备液. 收稿日期:2003—080,5 作者简介;陈晓辉,女,2001年毕业于Et本爱媛大学生物资源科学专业,获理学博士 学位,主要从事天然植物药及药物分析研究. 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第35卷第6期2004年6月?639? 取该储备液0.5,1.0.2.0,3.0,4.0,5.0mI分别用 甲醇定容至10mL,摇匀后用微孔滤膜(0.45m) 滤过,取续滤液各20L进样.以浓度为横坐标,色 谱峰面积为纵坐标进行线性回归,得回归方程Y= 20917x十1253,r一0.9996.结果表明鹤草酚在 12.5,125mg/L峰面积与浓度呈良好的线性关系. 2.4溶液的制备 2.4.1对照品溶液的制备:称取鹤草酚对照品30 mg,精密称定,置于100mL量瓶中,用少量氯仿溶 解后,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀.吸取该溶液 2.0mL,置10mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,微 孔滤膜(0.45/am)滤过,取续滤液即可作为对照品 溶液. 2.4.2供试品溶液的制备:取鹤草芽栓10枚,捣 碎,取约3g,精密称定,置40mL烧杯内,水浴熔 化,加硅胶7g,趁热研细,使之均匀分散,加氯仿 100mL超声20min溶出,滤过,再分别用氯仿50 mL反复洗两次,合并滤液浓缩至干,加甲醇溶解 后,置于100mL量瓶中,并用甲醇稀释至刻度.吸 取该溶液2.0mL,置10mL量瓶中,加甲醇至刻 度,摇匀,微孔滤膜(0.45/am)滤过,取续滤液作为 供试品溶液. 2.5精密度试验:精密吸取同一份样品溶液(批号: 020108)20L重复进样6次,测定鹤草酚峰面积, 结果其RSD为1.8. 2.6稳定性试验:精密称取同一批样品(批号: 020108)适量,按供试品溶液的制备方法制成一定浓 度的溶液,分别于配制后0,1,2,4,6,8h依法测定 峰面积,求得鹤草酚峰面积RSD一1.6.结果表明 本品溶液在一个工作13内基本稳定. 2.7重现性试验:对同一批样品(批号:020109)分 别称取6份,制备供试品溶液,进样测定,结果样品 中鹤草酚含量为50.14mg/粒,RSD=1.5. 2.8回收率试验:采用加样回收法.精密称取已知 含量的同一批号的样品(批号为:020401,鹤草酚含 量为50.03mg/粒)约1.5g,精密称定,分别精密加 入鹤草酚对照品溶液(2.36mg/mL)8,10,12mL, 每个浓度取3份,按供试品溶液制备方法操作并按 上述色谱条件测定,结果平均回收率为98.2, RSD一1.5(,z一9). 2.9样品的测定:分别吸取对照品溶液和供试品溶 液适量,经0.45/am滤膜滤过后,分别进样20L测 定,按外标一点法计算鹤草芽栓中鹤草酚的含量,结 果见表1,色谱图见图1. 表1鹤草芽栓中鹤草酚的含量测定结果(,l一3) Table1ContentofargrimopholinHecaoya Suppository(,l一3) 0l02030400l0203040 时问r/rain *鹤草酚 agrimophol 图1鹤草酚对照品(A)和鹤草芽栓(B)的HPLC图谱 Fig.1HPLCchromatogramsofagrimopholreference substance(A)andHecaoyaSuppository(B) 3讨论 3.1检测波长的选择:取鹤草酚对照品适量,加氯 仿溶解后,加甲醇稀释成适当浓度,于200400nm 波长扫描,结果表明本品在292nm波长处有最大 吸收.故以292nm为本品测定波长. 3.2提取溶剂的选择:鹤草酚易溶于氯仿,苯,溶于 丙酮,微溶于甲醇.为了防止氯仿对色谱柱的损害, 样品用氯仿提取后浓缩,最终用甲醇溶解,既可实现 在色谱分离时所产生的溶剂峰不干扰鹤草酚的准确 定量,又做到其溶解度满足实际样品分析的要求. 3.3提取方法的选择:曾对索氏提取,溶剂萃取及超 声波振荡提取法进行比较,结果鹤草芽栓在热氯仿中 溶解,而栓剂的辅料放冷后析出,与硅胶研磨后滤出, 此法提取率高,速度快,操作简单,避免了栓剂辅料对 鹤草酚定量的影响.因此选择了氯仿加热提取法. References: [1]PeiYH,LiX,ZhuTR.Studiesonthechemicalconstituents fromtheroot—sproutsofAgrimoniapilosaLdb.EJ].Acta PharmSin(药学),1989,24(6):431—437. E2]ZhaoFZ,JinBY.Determinationofagrimopholby colorimetryLJ].ChinPharmAnal(药物分析杂志),1982,2 (6):352354. [3]DuYM,ZhangZT,FuCY.Quantitativedeterminationof agrimopholinAgrimoniabyHPIC[J].JHebeiMedUnit, (河北医科大学),2001,22(1):22—24. [4]GuXQ,LiHQ,QiBL.TLCdensitometricdeterminationof agrimopholinthebudsofAgrimoniarpilosa[J].ChinTradit HerbDrugs(中草药),1980,11(8):346348. [5]ShaSY.Studiesontheinjectionofagrimopholarginate[J]. ChiPharJ(中国药学杂志),1980,15(7):294—296.