槐米中卢丁和槲皮素的提取分离与鉴定实验报告

槐米中卢丁和槲皮素的提取分离与鉴定实验报告 槐米中卢丁和槲皮素的提取分离与鉴定 实验报告 槐米中芦丁的提取、分离与鉴定 槐米中芦丁的提取、分离与鉴定(一) 一、 实验目的 1、通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。 2、通过芦丁结构的鉴定，了解苷类结构研究的一般程序和方法。 二、实验原理 芦丁:浅黄色针状结晶，mp174?-178?。溶解度:1:8000;热水1:200;冷乙醇1:300;热乙醇1:30;冷甲醇1:100;热甲醇1:10. 槲皮素:黄色结晶，mp313?-314?(2分子结晶水)，能溶解于冷乙醇(1:650)，易溶于沸乙醇(1:60)，可溶于甲醇、乙酸乙酯等;难溶于水，实验室以稀硫酸水解，乙醇重结晶制得。 本实验主要是利用芦丁分子中含有较多的酚羟基，显弱酸性，可溶于碱中，加酸酸化后又可析出结晶的性质，采用碱溶酸沉法提取，并用芦丁对冷、热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。 三、药品材料 槐米、石灰乳、盐酸、广泛PH试纸 四、实验操作 芦丁的的提取和精制 芦丁的提取:取槐米20g置500ml烧杯中，加入沸水400ml及1g硼砂，搅拌下加入石灰乳调至PH8-9,保持微沸30分钟(注意保持PH8-9)， 并随时补充蒸发掉的水分，趁热用双层纱布滤过，收集滤液，药渣再用200ml水按同样的操作再提取20分钟，合并两次滤液。浓缩至1/2体积，滤液在60?-70?再用盐酸调至PH4-5，静置一周，析出芦丁。 五、实验说明及注意事项 1、本实验采用碱溶液酸沉法从槐米中提取芦丁，收率稳定，且操作简便。在提取前应注意将槐米捣碎，使芦丁易于被热水溶出。槐花中含有大量粘液质，加入石灰乳使生成钙盐沉淀除去。PH应严格控制8-9，不得超过10,。因为在强碱条件下煮沸，时间稍长可促使芦丁水解破坏，使提取率明显下降。酸沉淀时PH4-5，不宜过低，否则会使芸香苷成烊盐溶于水，降低了收率。 2、提取过程中加入硼砂作用:保护芦丁分子中的邻二酚羟基不被氧化，亦保护邻二酚羟基不与钙离子络合，使芦丁不受损失。 槐米中芦丁的提取、分离与鉴定(二) 一、实验目的 1、掌握芦丁水解生成苷元的方法及二者之间的分离。 2、熟悉芦丁、槲皮素的结构性质、检识方法和纸层析鉴定方 法。 二实验原理 芦丁粗品可利用芦丁对冷、热水 的溶解度相差悬殊的特性进行精制。 芦丁可被稀酸水解，生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖，并能通过纸层析鉴定。芦丁及槲皮素还可以通过化学反应及紫外光谱鉴定。 三、药品材料 芦丁粗品、 硫酸、 盐酸、 氢氧化钠、 镁粉、 α-萘酚、 三氯化铝、 葡萄糖溶液、 鼠李糖溶液、 95%乙醇、 碳酸钡、 广泛PH试纸、 层析滤纸等。 四、实验操作 (一) 芦丁的提取和精制 1、芦丁的提取:取前次操作芦丁沉淀液，慢慢倾去上清液后，抽滤，沉淀用少量冷水洗涤2-3次，抽干，得到芦丁的粗产物。 2、重结晶:称定粗品芦丁的重量，按约1:200的比例悬浮于蒸馏水中，煮沸10分钟使芦丁全部溶解，趁热抽滤，冷却滤液，静置析晶。抽滤，置于空气中晾干或60?-70?干燥，得精制芦丁，称重，计算收率。 3、芦丁的水解:取芦丁1g，置于250ml圆底烧瓶中，加入2%硫酸溶液80ml直火微沸回流1小时，至析出的黄色沉淀不再增加为止，放冷抽滤，滤液保留作糖检查，沉淀用少量水洗去酸，抽干水分，晾 干称重，得粗制槲皮素，然后用乙醇(95%乙醇约15ml)重结晶即得精制槲皮素。 取水解后的母液20ml，加入碳酸钡细粉中和至PH7，滤除生成的碳酸钡沉淀。滤液置水浴上浓缩至1-2ml ，供纸色谱用。 (二) 鉴定 1、 性质实验 (1)盐酸-镁粉反应:取芦丁少量置于试管中，加1ml乙醇使溶解，加5滴浓盐酸，再加少许镁粉，注意观察颜色变化的情况。 (2)Molisch 反应:取芦丁和槲皮素少量，分别置试管中各加1ml乙醇使溶解，加几滴α-萘酚乙醇溶液，摇匀，沿管壁加浓硫酸10滴，注意观察两液面间产生的颜色变化，并比较芦丁和槲皮素的区别。 2、 色谱鉴定 (1)芦丁及槲皮素的纸色谱检识 点样:取新华1号滤纸;距下端3cm处用铅笔划线，为起始线，隔 1.5cm处点样品。将点好的样品的滤纸挂在层析杠中饱和半个小时，再上行展开。 支持剂:层析滤液(5cm*10cm) 展开剂:正丁醇-醋酸-水(4:1:5)上层 样品:自制槲皮素的乙醇溶液 自制芦丁的乙醇溶液 对照品:芦丁标准的乙醇溶液 显色剂:a、可见光下观察色斑，紫外灯下观察荧光斑点 b、 喷雾三氯化铝乙醇溶液，紫外灯下观察荧光斑点 (2)糖的纸色谱检识 支持剂:层析滤纸(5cm*10cm) 展开剂:正丁醇-醋酸-水(4:1:5)上层 样品:水溶液 对照品:1%葡萄糖标准品醇溶液及1%鼠李糖标准品溶液 显色剂:喷以邻苯二甲酸苯胺溶液，105?烘焙5分钟至斑点显色清晰 (3) 芦丁及槲皮素的薄层色谱鉴定 吸附剂:硅胶G板，105?-110?活化1小时 展开剂:氯仿-甲醇-甲酸(15:5:1) 样品:自制槲皮素的乙醇溶液 自制芦丁的乙醇溶液 对照品芦丁标准品的乙醇溶液 显色剂:a、可见光下观察色斑，紫外灯下观察荧光斑点 b、喷雾三氯化铝乙醇溶液，紫外灯下观察荧光斑点 五、实验说明及注意事项 芦丁的提取方法较多，如碱提取酸沉法，是利用其具有酸性易溶于碱性水，加酸酸化后又析出沉淀的性质进行的。 篇二:槐米中芦丁的提取分离和检识及槲皮素的制备 槐米中芦丁的提取分离和检识及槲皮素的制备 杨翊涵(2013级中药学一班) 【摘要】本文整理了两次实验的操作过程与实验结果。包括从槐米中提取芦丁、芦丁的分离和检识，以及槲皮素的制备和检识。通过碱溶酸沉的方法提取芦丁，再利用稀酸水解生成槲皮素。通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物的提取分离的原理和操作。熟悉紫外光谱在黄酮结构鉴定中的应用。通过芦丁的结构检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法熟悉重结晶技巧。了解和掌握黄酮类化合物的一些主要性质和鉴定方法。 【关键词】芦丁、槲皮素、提取分离、检识鉴定、结构、性质。 1. 1 芦丁的提取原理 利用芦丁结构中含有多个酚羟基，呈酚酸性，能在碱水中溶解的性质，可用碱性溶剂进行提取，提 取液加酸后可沉淀析出(碱溶酸沉 法)。也可利用芦丁在冷水中溶解 度小，在热水中溶解度大的性质进 行提取。 1.2. 芦丁的分离原理 利用芦丁结构在冷乙醇中溶解度小，在热乙醇中溶解度大，以及 在热水中溶解度大，在冷水中溶解度小的性质分离。芦丁用溶剂加热 溶解后，趁热抽滤，滤液放冷后能析出而达到分离的目的(如不纯可再重复操作进行分离)。也可采用醇溶水沉法进行精制。 1.3. 芦丁的鉴定原理 (1)利用吸附薄层色谱的分离原理，芦丁与芦丁对照品在同一条件下进行展开，显色，以达到鉴定芦丁的目的。 (2)通过专属的化学显色反应(如三氯化铝显色反应)，确定芦丁的成分类型(黄酮类)。 1.4实验原理 芦丁浅黄色针状结晶，难溶于冷水，可溶于热水(1:180,200)，热甲醇(1:10)，冷甲醇(1:100)，热乙醇(1:60)，冷乙醇(1:650);难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。 槲皮素黄色结晶，能溶于冷乙醇 (1:290)，易溶于沸乙醇(1:23)， 可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡 啶、丙酮等;难溶于水、苯、石油醚 等溶剂。 芦丁为黄酮苷，分子中具有酚羟基，显酸性，可溶于稀碱液中，在酸液中沉淀析出，可利用此性质进行提取分离。利用芦丁易溶热水、热乙醇，较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制。芦丁可被稀酸水解生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖，依此进行制备槲皮素。通过纸色谱及紫外光谱进行黄酮及糖的鉴定。 2.1 粗芦丁的制备 槐米粗粉50g，加水800ml加热，加氢氧化钠调PH8-9，搅拌加热,95?保温50min，趁热过滤，滤渣再如上提取一次。合并滤液。向滤液加入10%HCL调PH4-5，抽滤，至于80?干燥得芦丁粗品。所得粗品一半留备后用，另一半加热溶解，放臵过夜。 2.2 槲皮素的制备 将放臵过夜的芦丁粗品滤液再次抽滤，滤渣干燥后取1g臵于500 ml圆底烧瓶中，加入2%硫酸2.2ml和197.8ml蒸馏水，微沸回流至烧瓶内出现絮状结晶，静臵再次抽滤得槲皮素精品。滤液用碳酸钡中和至中性，过滤，蒸发浓缩至干。 3.1槲皮素的定性实验 (1)锆-枸试验:取样品液适量，然后加 2,ZrOCl2的甲醇溶液，注意观察颜色变化，再加入2,枸椽酸的甲醇溶液，记录颜色变化。 (2)α-萘酚-浓硫酸反应:取样品液适量，加等体积的l0,α-萘酚乙醇溶液，摇匀，沿管壁缓加浓硫酸，注意观察两液界面的颜色。 3.2 芦丁及槲皮素的色谱 支持剂:聚酰胺层析板(5×10cm)。 展开剂:甲醇-丙酮-甲苯-乙酸(8:2:2:1)。 样品:自制槲皮素的乙醇溶液，自制芦丁的乙醇溶液。 对照品:槲皮素标准品的乙醇溶液，芦丁标准品的乙醇溶液。 显色剂:三氯化铝乙醇溶液喷雾，紫外光灯365nm下检识荧光。 3.3糖的纸色谱检识 支持剂:中速层析滤纸(5×20cm) 样品:取水解后的滤液20ml，水浴加热，且在搅拌下加适量碳酸钡细粉至PH中性，过滤，取滤液并浓缩至2mI左右，放冷后，供纸色谱点样用。 对照品:1,葡萄糖标准品醇溶液及1,鼠李糖标准品醇溶液。 展开剂:正丁醇-醋酸-水(4:1:5)。 显色剂:喷以邻苯二甲酸苯胺溶液，105?烘烤5分钟至斑点显色清晰。 4.1注意事项 (1)用石灰水调节芦丁提取溶液的PH，既可以达到碱提取芦丁的目的，还可以除去槐米中含有的大量粘液质。但钙离子浓度及pH值均不宜过高，否则多余的钙能与芦丁形成螯合物沉淀，同时黄酮母核在强碱性条件下易被破坏。 (2)用HCl调PH时，应注意PH不要过低，因为PH过低会使芦丁形成钅羊盐而使已形成的沉淀重新溶解，同时黄酮母核也会在强碱性条件下被破坏，导致收率下降。 (3)注意观察槲皮素制备过程中的实验现象。 4.2小结与讨论 本实验主要是利用芸香苷中含有较多的酚羟基，可溶于碱中，加酸酸化后又可析出芸香苷结晶的性质，采用碱溶酸沉法提取， 并用芸香苷对冷、热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。芦丁可被稀酸水解，生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖，并能通过纸层析鉴定。芦丁及槲皮素还可通过化学反应及紫外光谱鉴定。通过种种方法达到实验目的。 根据本次试验汲取经验教训，以后实验一定要认真预习，不是浮于面，要真正学透、学懂，不能照本宣科，要有主观能动性，只有自己理解的、想通的才能真正记住，成为自己的东西。我们要改变学习方法，多多发挥主动性，并将这种学习方法运用到以后的其他科目中，才会事半功倍。 【参考文献】 [1]冯启蒙，徐聪.槐米中提芦丁纯化工艺研究.价值工程，2012;307-308. [2] 童婧 ，郭晓蓉，房文亮，夏云. 槐米中芦丁提取工艺研究.中外医学(临床医学)，2011，(26);41-41. [3] 赵宇新.槐米中主要成分变化规律与受热温度的相关性.中国实验方剂学杂志，2011，17(19);108-110. [5] 杨娜，朱开梅，顾生玖.从槐米中提取槲皮素方法的研究进展.时珍国医国药，2010，21(12);3340-3341. [6] 赵文彬，刘金荣，樊莲莲，刘桂花.从槐米中提取槲皮素方法的研 篇三:槐米中卢丁和槲皮素的提取分离与鉴定 实验名称:槐米中卢丁和槲皮素的提取分离与鉴定 实验目的: 1)掌握碱溶酸沉法提取黄酮类化合物的原理及操作，学会芦丁的精制与水解方法。 2)能运用化学法、色谱法鉴定芦丁。 实验器材: 槐花粗粉 石灰乳 硼砂烧杯 纱布蒸馏水 抽滤装置 盐酸 硫酸三角烧杯 镁粉 α-萘酚 硅胶, Ba(OH)2 FeCl3K3[Fe(CN)6] 苯胺-联苯二甲酸 芦丁标准品槲皮素标准品 葡萄糖标准品 鼠李糖标准品 参考文献: (一)主要成分的 结构及性质 槐花系豆科植物Sophora japonica L.的干燥花蕾。其主要有效成分为芦丁，芦丁在槐花花蕾中含量高，《药典》槐花中芦丁含量不得少于20.0,。其结构为槲皮素-3-O-芸香糖苷。 (二)基本原理 芦丁分子中有较多的酚羟基，有弱酸性，可与碱成盐而溶于水中，加酸酸化后可沉淀析出，因而用碱溶酸沉法提取芦丁。 芦丁的精制是利用它在冷热水中的溶解差异进行的。 (三)操作步骤 ,(芦丁的提取 称取槐花粗粉20g，置500ml烧杯中，加入0.4,硼砂沸水溶液 200ml，在搅拌下加入石灰乳，调至pH8,9,加热微沸20分钟(注意保持pH8,9)，并随时补充蒸发的水分，趁热用四层纱布滤过。同样操作再提取一次，合并两次滤液。滤液在60~70oC用浓HCl调至pH,~,，静置过夜使沉淀完全，抽滤，沉淀用蒸馏水洗,~,次，抽干，置空气中晾干，得芦丁粗品。 2(芦丁的精制 称量粗品芦丁，按1:200的比例悬浮于蒸馏水中，煮沸10分钟使芦丁全部溶解，趁热抽滤，冷却滤液，静置析晶。抽滤，结晶置空气中晾干或60,70oC干燥，得精制芦丁，称重，计算收率。 3(芦丁的水解 取芦丁1g，研细后置于250ml三角烧杯中，加入2%H2SO4溶液100ml，直火加热微沸约40分钟，至析出鲜黄色沉淀不再增加为止，放冷抽滤，滤液保留作糖检查，沉淀用少量水洗去酸，抽干水分，晾干称重，得粗制槲皮素，然后用乙醇(95%乙醇约15ml)重结晶得精制槲皮素。 4(芦丁鉴定 (,)化学鉴别 分别取芦丁和槲皮素少许，加乙醇,,,ml使溶解，作以下试验: ?盐酸-镁粉反应 取上述溶液,,,ml，滴加,滴浓盐酸，再加入少许镁粉，振摇，观察颜色变化情况。 ?Molich反应 取上述溶液,,,ml，加10,等体积的α-萘酚乙醇溶液，摇匀，沿管壁滴加浓硫酸(注意不要振摇)，观察两液 面产生的颜色变化情况。 (四)基本操作注意点 ,(提取中加入硼砂的目的是为了保护芦丁分子中邻二酚羟基结构不被氧化破坏，并使邻二酚羟基不与石灰乳中的钙离子配合(钙盐配合物不溶于水)，使芦丁不受损失。同时还具有调节碱性水溶液pH值的作用。 ,(加入石灰乳的目的既可达到碱溶解提取芦丁，又能使槐花含有的大量黏液质、果胶生成钙盐沉淀除去。实验中应严格控制碱提取和酸沉淀时的pH值。碱水提取时控制pH值8~9，不得超过10，pH值过高，在加热提取过程中可使芦丁结构被破坏，造成产率明显下降;酸沉时加浓盐酸调pH值,~,，不宜过低，以免芦丁生成钅羊盐溶于水而降低收率。 附图1 方法一:水提取芦丁 槐花粗粉 水提取液 药渣 滤液沉淀 热水或乙醇重结晶 芦丁结晶 方法二:碱水提取芸香苷 槐花粗粉 0.4%硼砂水溶液，搅拌下 ,9，并保持该pH值20,30 水提取液药渣 pH8,9，搅拌，静置放冷，滤过 oC干燥 滤液 沉淀 热水或乙醇重结晶 芦丁结晶