HPLC法测定小儿智力糖浆中细叶远志皂苷的含量
[摘要] 目的:建立小儿智力糖浆中细叶远志皂苷的含量测定
。方法: 采用HPLC法测
定。色谱柱: E2111646Z C18柱(4.6 mm ×250 mm,5 μm),流动相:甲醇-0.05,磷酸溶
液(70?30),流速:1.0 ml/min,检测波长:210 nm,理论板数按细叶远志皂苷峰计算不应
低于3 000。结果:细叶远志皂苷在30.4,608 μg/ml范围内呈良好的线性关系;平均加样回
收率为99.20%,RSD=0.95%(n=5)。结论:该方法简便,结果准确,重现性好,可作为小
儿智力糖浆质量控制方法。
[关键词] 小儿智力糖浆;远志;细叶远志皂苷;HPLC;含量测定
[中图分类号] R917 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2011)07(a)-060-02
Determination of Tenuifolin in the children intelligence syrup by HPLC
LI Xin′e1, SHI Yaohui2
1.Pharmacy Department Office, the First People’s Hospital, Xiangtan 411100, China; 2.Hu’nan Xinhui Pharmaceutical Co. Ltd., Changsha 410200, China
[Abstract] Objective: To establish a method for determination of the tenuifolin in the children intelligence syrup by HPLC. Methods: E2111646Z C18 column (4.6 mm ×250 mm, 5 μm) was used, the mobile phase consisted of methanol-0.05% phosphoric acid solution(70?30, V/V),
flow rate was 1.0 ml/min, and the detective wavelength was 210 nm, theoretical tower number calculated by tenuifloin peak should not under the level of 3 000. Results: There were good straightness performance when the concentration of tenuifolin between 30.4 to 608 μg/ml. The average recovery of tenuifolin was 99.20% and the RSD was 0.95%(n=5). Conclusion: This method is simple and convenient. The accurate result and reappearing feature will be regarded as
the quality control method of children intelligence syrup.
[Key words] Children intelligence syrup; Radix Polygalae; Tenuifolin; HPLC; Determination
小儿智力糖浆是由远志、龙骨、石菖蒲、雄鸡、龟板等药味经提取加工而制成,收载
于卫生部药品
中药成方制剂第八册(WS3-B-1496-93),具有调补阴阳,开窍益智之功
效。用于小儿轻微脑功能障碍综合征(又称多动症)。远志具有安神益智的功效[1-2],在本
品中是主要药材,皂苷类成分是远志的主要活性成分,细叶远志皂苷是远志总皂苷碱水解生
成的次级皂苷,远志总皂苷经碱水解均能转化为细叶远志皂苷[3-6]。因此,以细叶远志皂苷
为指标成分来检测远志总皂苷的含量,采用HPLC法,建立专属性含量测定方法,可作为
本品质量控制指标。
1 仪器与
德国诺尔K-1001高效液相色谱仪(PUMP泵、2501紫外检测仪、2000数据处理机,
进样器);细叶远志皂苷对照品(批号:111849-201001,由中国药品生物制品检定所提供,
纯度为98.1%);甲醇为色谱纯,其他试剂均为分析纯;小儿智力糖浆样品(湖南新汇制药
有限公司,批号:100102、100201、100501、100602、100603)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱: E2111646Z C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm); 流动相:甲醇-0.05,磷酸
溶液(70?30),流速:1 ml/min;检测波长:210 nm。理论塔板数(n)为3 000以上,进
样量为10 μl。在以上色谱条件下,细叶远志皂苷峰保留时间约为18 min。
2.2 供试品溶液的制备
精密量取本品10 ml,蒸干,加10,NaOH溶液50 ml,加热回流2 h,冷却,用盐酸调节pH值为4~5,用水饱和的正丁醇振摇提取3次,每次50 ml,合并正丁醇液,回收溶剂至干,残渣加甲醇适量使溶解,转移至50 ml容量瓶,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
2.3对照品溶液的制备
精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的细叶远志皂苷对照品15.2 mg,置25 ml量瓶中,加甲醇使溶解并稀释至刻度,摇匀,制成对照品储备液。再精密量取1.5 ml上述对照品储备液,置25 ml容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,制成对照品溶液。
2.4线性关系考察
精密量取对照品储备液0.25,0.5,1,2,3,4,5 ml,分别置5 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀(n=7)。精密吸取上述溶液各10 μl,注入液相色谱仪,记录峰面积。以对照品浓度X(μg/ml)为横坐标,峰面积均值Y为纵坐标,进行线性回归,结果细叶远志皂苷浓度在30.4~608 μg/ml范围内呈良好的线性关系。回归方回程为:Y=4.968 ×106X-5.865×105(r=0.999 1)。
2.5 精密度试验
精密量取同一份细叶远志皂苷对照品溶液,连续测定5次,记录色谱图,结果其细叶远志皂苷的RSD为0.70%,表明仪器精密度良好。
2.6 重复性试验
精密量取同一批样品5份,按供试品溶液制备方法制备,依法测定,记录细叶远志皂苷色谱峰面积值,计算细叶远志皂苷的含量,RSD=0.65%。表明本法的重复性好。
2.7 稳定性试验
对同一供试品溶液,每隔2 h测定一次,共测定5次,记录细叶远志皂苷色谱峰面积值,RSD为1.35%,表明供试品溶液稳定性良好。
2.8 干扰试验
按处方比例,取缺远志的其余药材,制成空白制剂,按供试品溶液制备项下的方法制成阴性对照品溶液。分别取对照品溶液,阴性对照品溶液,供试品溶液各10 μl按上述色谱条件测定。结果在细叶远志皂苷相应的保留时间无色谱峰,表明处方中其他成分对测定无干扰(图1)。
2.9加样回收率测定
精密量取已知细叶远志皂苷含量的小儿智力糖浆6份,分别精密添加细叶远志皂苷对照品,按供试品溶液制备项下的方法制备,测得平均回收率为99.20%,RSD=0.95%。见表1。
2.10样品含量测定
取5批小儿智力糖浆样品,按供试品溶液制备方法制备,精密吸取供试品溶液及对照品溶液,按上述色谱条件测定峰面积,计算含量,结果见表2。
3 讨论
小儿智力糖浆为小儿常用中成药,但是质量标准中无含量测定,无法控制产品的质量,本实验以细叶远志皂苷含量为主要指标,参照《中国药典》2010年版远志中细叶远志皂苷含量测定项下的提取方法,以10%NaOH处理,用水饱和的正丁醇为溶剂,采用高效液相色谱法,制定了小儿智力糖浆的含量测定标准,以更好地控制产品的质量,保证临床疗效。
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(收稿日期:2011-05-13)
[作者简介] 李新娥,女,副主任药师;主要研究方向:医院药学与中药质量标准。
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