紫花苜蓿皂甙含量的变异及其遗传力研究

紫花苜蓿皂甙含量的变异及其遗传力研究 Y937乏82 单位代码―106―35 学 号2003287 西南(虫謦 硕士学位论文 紫花苜蓿皂甙含量的变异 及其遗传力的研究 论文作者: 刘勇 指导教师: 玉永雄 学科专业: 动物营养与饲料科学 研究方向: 牧草、饲料生产 提交论文日期:2006年05月31日 论文答辩日期:2006年06月05日 西南大学 学位授予单位: 中国??重庆 2006年5月 薅街夫学碗上擎位逾文 摘要 苜蓿皂甙含量的变异及其遗传力的研究 摘要 紫花苜蓿在世界范围内分布广‘泛，是世界公认的高产优质牧草，被誉为“牧草之王”e 近年来随着我国酎牧妲的发展，对优质蛋白质的需求不断扩大，为解决蛋白质饲料的闯题( 全潮惫括南方逮嚣鹣紫花营疆秘楗嚣援在逐逮壤麓，嚣营蘩中熬次生戎遴魏袋惫戴含量过裹， 对静禽不利，它抑制单胃动物的生长，使反刍动物发生瘤冒臌气。也有研究搬遵苜蓿皂甙投 降低舡液中胆固酵和抗动脉粥样诵化方面具有约用活性。还可以从苜蓿中提l艇苜蓿皂甙作为 动物耨型饲料添热刹。国内关予翁稽皂贰含量变髯的研究报道拔少，丽对营嚣皂贰遗传力的 磷究还朱觅报遵，本磷究扶优纯蒋稽总皂贰含餐潮定方法入手，通过正交实验设诗确定超声 波法对苜蓿皂甙的煅佳提取工艺帑件，然后研究酋蓿不同刈割期、不同生育期和植株不同部 位总皂甙含量的变优，同时对苜麟晶种间和品种肉总皂甙含量的变异及其遗传力进行研究?? 魏翻定链够实瑗蓄整豢一亳甙含爨嚣标豹有效羧壤、裂弼拳 蠢释耨技术提供溅毒龟袋霉。本疆 究绌聚表明: 1(确立了苜蓿总皂贰含量测定方法: 娃营菝常春藤旗贰魏标准品，袋嫒紫外分党建发法测定葛耱慧皂甙豹鸯爨，确定了葛藕 相对标准偏差RSD为1(75，该方法具有操作简便。重现性好，精密度商等优点。 2。优化了超声波法提取曹蓿总皂贰最透条件: 采歪交表礴 34 ，选瑁影晌褥取效采豹强个主荽因素，帮擎簿簿浓度、 戮涟蓖、超声援 取时间、超声提取次数，每个因絷设三个水平谶行正交试验。结果表明;四个因素对总皂甙 ,鹣学簿，霞滚魄为1;15，超簿掇鼗2次，每次30min。 3。菌稽不同刈割期总皂甙含量的变化 苜蓿不同刈割期总皂甙含量测定结果表明:苜蓿不同茬次之间总皂甙的禽量差异达到极 显蔫水平 P O(01 。不同茬次惑息斌含量离低顺序依次为:第兰茬 第四茬》第一茬 第二 茬。营蓿不同茬次与不嗣晶释之阔的毫甙售鬃蕊侔这残强陵蓉窳平 P O。01 t 4(酋蓿不同生育期总皂甙含量的变化 莒蓿不同生育期皂甙含量测定结果表明:茵蓿不同生育期总皂甙禽量的藏异达到极显瓣 承V- 8。01 。不鞫生育辩总褒戴客量裹羝蹶黟菝次为:现蕾鞭 裙蓬期 蹙菝期 结蓑期。 蒋稽不同生育期间不同品种问的壤甙含量互作不显著 P O(05 。 5(橱蓿植株不同部位总皂甙含嫩的变化 营嚣植株不弼帮位总皂甙会撵存在狠犬差努，差异达到极强著承平 P O心1 。蒈蓿植株 不瞬部位皂甙含爨的商低依次为:叶片 搬 蕊。 I 嚣离大学硬号。学位论文 摘要 6，龌究了营菱酩转闻息皂贰含量盼变异及其遗传力 测定了从国外引进的22个苜帮品种的总皂贰含最。结果表明:菖蓿不同品羊中间总皂甙的 含鼙差异达到饭箍著永平 P《O(01 ，苜蓿晶种问皂甙含量存在遥佟变异。营蓿总毫甙含量夜 R90。 皂甙含量低的品种为Williamsburg和Poolrampaur 7(研究了营蓿品种内总皂甙含量的变异 测定7紫花营赞毅龋系莲农一号的总皂式禽最。结果表明:品糖内惑皂蕊瓣含量差异达 到极显著水平 p o(01 ，表明苜稿品种山的皂饿含量也存在遗传援异。 8(苜蓿皂贰遗传力的德算 采矮选拔效波鑫冬方法癌雾出营蘩离皂袋蛙状粒逮臻力嚣2#为0(314;低皂戴悭装勰遗传力 为?2。为0(391。估算发明:苜蓿皂甙性状的遗传力比较低，早代选择效粜不明显。 关键词:紫花苜稽皂甙提取变异遗传力 II 巍寿大学硬士学垃论文 Abstract ABSTRACT sativaLis inthe world，andis asthe and Medicago widelydistributing recognizied highyied andis as“the of the of highqualityforage praised queenforage”(Foryears，withdevelopment stockbreeding，therequirement醒highquality ex耙 nded(Tosettlethematterof forage protein ereaofalfalfais inthesouth feedingstuff,theplanting increasingfasfly Hower,thesaponins erea( contentwhichisthe metabolitesofalfalfaistoo torestrain animals secondary high monogastric makerumenanceswell。Inanother was thatthe hadthe (growth，and aspect，itreported saponins officinal in thebloodcholesterolandantiathmslerosis(Thecanbe decreasing activity saponins extractedfromalfalfatobeanew-model werefew additive(There aboutthe feedingstuff reports varianceof inal矗lfaandn0 aboutthe of this sapponins report saponins，In heritability study,We carried outtherasearehof thecontentof themethodof firstly determining saponins，optimizing ultrasonic contentsof indifferent extraction，and and saponins cuttingpefied， breedingperied differentofthe ofalfalfa was estimated(Theresearchresults parts plants,andheritabilitysaponins toofferthebasisto outthenewtechinics help ofeffective and might carry planting,utilizingamong some contentinalfalfa(Themainresultswereshownasfollows: breeding saponins 1(Themeasuratinnofsaponinsofalfalfawasconfirmed( The wasusedas the contentwasmeasured Hederagenins standard,andsaponins through Uv_visible wasshownthattheimal was 544nm( spectrophotometer(It absorbingwavelength standedcurve was the recoverrate equationY 0(0262X+0(0007,andaverage wasl00(162,、RSD 1(75( 2(Thetechnicalconditiontoextractthe altrasonicextractionwas sponinsthrough optimized( tableL9 34 ，thefourmainfactorswhichaffectthe Usingorthogonal extractionwere:selected: themethanol rateofsolidto time ofultrasonic the concentration，the liquid，the extraction，and ofultrasonicextraction(Threelevelswere as factor(The degree designedorthogonalexperimentper resultsshowedthatthereweremarked thefour significanceamong factorswhichinfluencethe conetent P 0。01 (ThetechnicalconditionWerethat: methanol70,。 saponins optimal 1:15，2timesultrasonicextraction，and30mintime( solid:liquid per 3(Thedifferenceof contentindifferent saponins cuttingpefied( Theresultsindicatedthatthetotal differentstubbleweremarked saponinsamong significant P O(01 (Theorderoftotal contentwas:thethirdstubble thefon l saponins stubble thefirst stubble(neinteractionof contentbetween stubble thesecond saponins differentstubblesand breedswefeshownmarked significant P e+01 ( in 4(Thedifferenceof contentdifferent saponins breedingperiod( were Theresultsshowedthatthetotal different marked saponinsamong procreatingphase lll 西南大学硕十学位论文 Abstract orderwas of of significant P 0(01 (Thethat:budingperiod begainingflowering; full werenointeractionbetween and floweringperiod pod-besringperiod(There breedingperiod varietiesin content P 0(05 ( saponins 5 Thedifferenceof contentatdifferentofthe saponins parts plants( The content orderwas: saponins significant P 0(01 (The ofdifferentpartsoftheplantwas laminae root stem( 6(Thevariationand of contentbetween werestudied( heritabilitysaponins cultivars 22 Thetotal contentof varietiesofalfalfawhichwere from were saponins importedforeign measured(Theresultsshowedthatthedifferenceof content eultivarswellg saponins among thevafiatinnof Content eultivarsexisted;The saponins significant P 0(01 (indicating among wasfrom0(829,to1(386,(The contentofcultivarswere range higher and theloweroneswere andPool R90。 Provence，but Williamsburgrampaur 7(Thevariationof contentwithincultivarswasstudied( saponins Thetotal contentof withincultivars resultsshowed Nol wasmeasured(The saponins xinong the that variationof contentwithincultivarswere variationof saponins significant P 0(01 (The contentwithincultivarsexisted(The heritabilityofsaponins 8(The of wasestimated( heritabilitysaponins The of inalfalfawas to estimatedthemethodof heritabilityhighersaponins through respone selectionandtheH2Gwas lower 0(391(Theestimateshowedthat 0(314;the one H2D was of inalfalfawaslower heritabilitysaponins andtheeffectof selectionwasnotevident( early sativa extractionVariation Keys:MedicagoL(Saponins Heritability 独创性声明 学位论文题目: 鐾蕉苴蕉皇煎盒量的变显盈基速佳左的硒蕴 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取 得的研究成果。据 我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经 发表或撰写过的 研究成果，也不包含为获得西南大学或其他教育机构的学位或证而使用过 的材料。与我一 同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表 示谢意。 学位论文作者: 驯努 签字日期:珈。‘年‖月弓日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解西南大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家 有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权西南大学研究 生院可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫 描等复制手段保存、汇编学位论文。 保密的学位论文在解密后适用本授权书，本论文:口不保密， 口保密期限至 年 月止 。 学位论文作者签簪:驯勇 导师签名: x( 如-ef乙 E1 签字日期:孰,6年参月;日 签字日期: 却f年6月、7 学位论文作者毕业后去向: 工作单位 通讯地址 邮编 嚣毒大学硕士学蕴竣史 第1章文献综述 第 耄文献综述 1(1紫花苜藕的栽培和利用 紫花菌蓿 MedicagosativaL( (又称紫苜蓿、蓿草、苜蓿，属多年生豆科革本植物， 是世界上最重要的豆科牧草之一。它富含潢白质、维生索、矿物质，是一种营养价值檄高的 优震牧荤，有“牧草之王”之称。絮花营精是古老豹拔孳晶种，甄产于波簸 伊朗 ，现分布 于世界各国IlJ。我国的曹蓿从栽培至今已有2000多年的历史，早在公元前139年，汉武帝派遣 张骞出使西域 土库蔓地区 ，将菌蓿gl入中国12l。目前，全世界曹蓿种植面积约为3500万 hm2，弹薤嚣积最大麴潮家是羹国，其次楚拥拿夫。我黧营罄瓣棱嚣积已达200多万hm2，在全 世羿居第五位【3】。在我蹦莒蓿分布的范围较广，两起新疆、东劁江苏北部，包括黄河流域及以 北的14个省区，主要是两托及华北地区14l。 綮菝罄蓿是象毫帮窳禽靛撬受壤辩。家禽存车富斡蓬囊震、聪耪、矿耪囊、维生素、碳 水化合物、氨基黢、微髓元素等多种营养成分，而且还含有术知促进生长因子。苜蓿干草中 赖氨酸含懿比玉米高5(7倍，维生素中以胡萝h素的含量最为丰富(微量元素中猷铁和锰的含 量较离。嶷溺等耱攘条锌下，营蓿魄秉奉辩狡孳掰毅获躲可消纯蛋照疆褰2。5穆发丧，扩物矮 高6倍左右，可漓化养分离2倍左右12l。苜蓿的营葬价值很高，可加工成干革、千革块、干革粉、 颗睾直料等，便于贮存运输，作为各类规模化畜禽养殖场的重瑟饲草减配合饲料的原料，被广 泛圭蠡蠲予畜产蒹燕产中?l。蕊蓿蘸键进生长，提离饲料掇醚。在基端器粮申分剃添鸯曩10,、 20,、30,的越蓿草粉饲喂生长育肥猪，结果发现添m1110,、20,的苜蓿草粉猪的增长速 度与对照组没有驻著麓异但饲料成本降低刚。苜蓿能改善畜产品品质。提高商品性能。曹玉风 等 2001 在育?l猪镯粮中添加5,,15,酶蕾稽苹耪会增翻稠体痰肉率，傻岗璇鲜嫩，对猿 的生产性能无影响【71。据报道在蛋鹏饲粮中添加5,的越蓿草粉，结果表明:对产蛋无不照影 响，且蛋黄比色度显著增加1891。郑文明等 2005 在肉鸡臼粮中添加苜稽草粉的研究结果表 明:添船静蓿草粉蕴静随鸡受肤颜色和腔颜色均醴:对照缝深，淤添鞠4,擎精缀疫获颜彀最深， 添加4,: ffl6,草耪组的胫颜彀与对照组相比差异极显著【l„。菌蓿还毙提高妊娠母的繁酸性能。 廉纽霞等 2004 在妊娠母猪饲粮中添加葭蓿革粉。对提高母猪及仔猪生产性 能、延长母猪 利用年限、提高仔猪断奶窝蘩和窝平均目增重都备很好酶作鬻，而髓可滋提高经济效蘸，其 中默20,艇添热量静经济效懿最佳四。蓦蓿摹粉对提菇母猪窝产仔数、叛奶仔猪数、麟奶仔 猪窝重及降低仔猪死亡率等均有良好的作用【7。”。 苜蓿整改士肥田的生物目E源。曹蓿有强大的糇系，能吸收主壤深瑶的承分和葬分，种过3 年蕊菝弱*士壤，每公壤京掇系9睫炭右，其中约47,熬搬系分枣予O,30cm瓣耕撵层中，便耕 作层的有机质提商o(1,,0(3,。菌蓿可通过根瘸菌，醐定空气中大量的游离氮，能够有效增 加土壤中氮素。曹致中 2002 据报道。酋蓿地每年每公顷围氮273千克，比较保守的潮氮幅 度兔83-,100手竞，这也可增翱?壤强粒臻凌，踱是土壤，馕嚣茬信物连冬获褥丰收捌。营蘩 西i!;;i大学坝卜学位论文 第1章文献综述 还楚傈捧永 :的优蘸植物。黼蓿是深搬植物，壤深可达8m，种橇营蓿是控制水?流失的羲簧 生物措施。据H肃天水水保试验站测定坡地种植苜蓿，每年流失水量是粮食作物的1,16，士壤 冲劂量楚种植粮食佟物的1,9[”J。 苜糟产隧的群众长划有用苜蓿幼嫩茎叶作为蔬菜缄拌以面粉蒸熟食用，或将苜稽茎叶和 面粉做成绿色蠢条。张娟 2005 擐遂，在蕊翰中翔入10,的蕾蓿蔬菜糊，增龆了瑟条营莽 物质的含龄，同时也降低了加水量，改善了面条的营养晶质【l”。莽秀红 2002 将苜蓿的攀 ?l’通过港洗，然后打浆，繇剩出莒蓿汁后耪1151。蓄蔻遥楚饶蘸静蜜源植物，花蜜静蕨囊蠡、 产艇高。据报道，1,4年生长旺盛的蔚蓿流蜜多，每群蜂可产蜜20,25千克。 1(2紫筏蕾蓿中活??陡物质的概沅 妖期以来，人稍一直将嚣接作为静禽豹一种重要的饲料进行黜植与加工。近几十年来， 各闯科学家开始认识到苜蓿在保健方面的功能。据中药记载，苜蓿具有漓热解毒、凉血通淋 之功效，熊降魏脂、利尿、抑菌、抗肿瘤，长期服用利五脏、轻身健人【”I。随着对菖蓿认识 的一i断深入，人们逐渐发现蒋蓿中的生物活性物质，苜蓿中含有优质食用蹑自、膳食纤维、 皂甙、多糖、异黄酮、以及天然色素等生物活性成分。 1(2(1膳食纤维 Fiber，筵称DF ，燕指臻些不被灭蒋游健疆彀蠡孽多糖类羰瘩纯会狻 疆套纤维 Dietary 与术质素的总称。由于分析上的方便，通常就将存在于膳食中的非淀粉类多糖与术质素部分 髂兔骧食纾维。耩食纤维豹纯学组纛主要包括纾缍素、誓纾维素、粟狡及鬃菠类糖矮帮本袋 索四个部分【17】。并不是所有的膳食纤维都具有生理活性，且能够被人们利用，不同的膳食纤维 箕生理功裁楚不强瓣，因戴磷究耩食纾缳，必绥霹 究合适纤维源熬选择与终维生理动能豹滔 10(70,隶溶性纤维、17，甜,半绥维素、36(22,终维素与9。24露本襞素，膨胀力与持承力分剐法 9mL,g 11800,t”l。酋蓿中高活性的膳食纤维可用在很多食品中并获得较高的附加经济效益，包 撼蛰掳食美t、嚣条与遵心嚣躺基、熄烤食基、肉割晶、麟淇懑、发酵孚L划黠等 191。营藿中腆 食纤维虽属非营养成分，但是它可降低血脂、m浆胆固醇，尤其是LDL胆嘲醇，适当提高HDL。 t簸熬重吸收。丁诗肇 1996 报道了鹱也可班降您胆汁酸，减少小肠封胆 食纡维糍结合糖 脏中的诱瘸物质，减少粪便停留时间。进而减少大肠粘膜与诱瘸物质的接触【柏l。目前，苜稽 纾维鲴另一重要捌谂是终为强健品健蚓，将茸蓿纤维粉终后压铡成药片戡终维腔囊，每天服 j j，可增加胃肠蠕幼，减少便秘，清理肠道口”。 ’(2(2蓄薅豺蛋白 Leaves 曹致中等 2001 报道苜糟叶蛋白 AlfalfaProtein，简称ALP 的禽量很高。现蕾期蘸 裙花磐|干秘质中含糕蛋自震20,,22,，千莘中,般含16,,17,跚。邓势等0997 辞蛋岛翻 2 西辩大学鞭士学位论文 第1章文献综述 品中蛋囱质禽50,,60,，18种氨基酸含鬣平衡，可增加饮食中的蛋白质含壤【翊。通过食用试 验，人营l瓣这秘薪蛋岛补充毒强?镬鲻产生了缀裹粒信羰，露度、芽买鸯拜帮燕嚣剩疆等冒蠲营耱 的食物试验表明，ALPC不仅释易消化，而且还可促进生长，同动物鬣白相比，其成本低廉， 在社会经济条件差的地区。ALPC是几童的理想食品f“。郑建仙 1996 将苜蓿叶蛋自应用剜 面条中，结巢表明ALPC的赖氨酸含蘩丰鬻，可菇弥 穰答类食赫在这方蟊瓣不是，羁瓣麓撬 襄嚣条款膳食纾维秘晶震，在添趣鼓不超过4,肘，不改变蕊团漉变学特性和口感;若薅加入 ,,3,的活性面筋粉时，即使ALPC的加入量达5,，也不会影响面条的l 加工性能吲。 Srivasiava 1988 研究发现，从新鲜苜帮汁液中提取的叶鬣自，属于真正的绿色食用产品。 其蛋白质结榴中的甄基酸组成平衡，被FAO FoodAgriculture Organization 诀为燕一释高质疆 食黠l刈。邓勇等 1992 在孛鞫农媲大学辑微粒萤蘩坤蛋鑫强饯艚食营莽学 试验迁甥，避食营 蓿时蛋向能明显提高大学生的舡红礅自含量，改善贫斑状况f27l。国内外许多试验。用苜糟 叶蛋白取代猪、家禽日粮中的部分乃至全部蛋囱质饲料，戏取代哺乳犊牛的部分全乳代用品 时，都能取得良好的饲养效果f28l。佟建明等 1998 在雏鸡日粮中添加2(5,，5(O,，10, 和15,的营蓿辞蛋南，当添热2，5,,5(0,嚣孪，瓣增蠡育良好效粜，蔼进量癸《效聚不碉最129l。 B,胡萝h素含量由33(即魄提高到47(印g，g，且蛋黄中叶黄索积累增多，色泽等级提高[30l。华 粉姝 1996 报道，糟Al_llc干?替饲嚷哺乳仔猪糟的脱脂乳，可镫仔猪进增踅提离10,馥上搿1。 1(2(3翁蓿毫甙 秦盏根等 1999 报遗了紫筏苜蒋不同部位，其憨皂甙禽鼙也有瞬驻不同laZl。期努I等0995， 掇遴，蔫蓿毫载显藩降低盘港艇固醇佟弱与冀键进革攘匪噬缨熬系绞功能鸯关。低密发1,嚣 白 蚀IL 在体内通过受体和非受体 单核臣噬细胞系统 两条途径降解。由LD潴赊的受体途镪 易受到细胞内胆固醇含簸的负反馈调节，即被抑制，而非爱体途径则无这种调节。因此，机 体在负荷高脆固醇的情况下，非受体途径对? 峭除作用照得更为重餮。苜蓿皂甙能促进非受 钵途径瓣低密度瑟豢叁的清除作用，洚低盎清低密纛耱蛋自帮麓阉醇的客繁零l。粥雾 等 1999 认为，莓荣皂藏阻叛娌汁黢肠翳锤鞯，馒胆汁酸不缝在抟内重赣转变为娌潮醇，两只毙从体 内经肠道排出，从而促进了胆固醇妇体内的排出l”1。杨蔚等 1995 报道H 『苜耪皂甙具有镇 究发现营蓿毫甙遥能抑制人自血病细胞系K562的生长阑。Oteszek W等 1994耀邀了蓊蓿皂甙 还能与缩瑰麟作翔，使缎腿发生去投纯l”l。张勇等 2005 毳珏究了蘸蓿总默对两仔建生长性 O+l,。0。2, 照能、血脂及嬲体品质影响。结果表明:添加营稽总皂戴 著降低肉佟Igl清 3 匿南丈学颈:L学位论文 第l牵文献综述 IIIIII IIIIIIIII 令莓镂患戴添撩承乎之潮来冤鼹著差异 P a05 :添擞菖藜感藏显著踌低肉仔鸿腹黪率 P 0(05 ，并不同程度地提高肉仔鸡膈宰率、胸肌率和腿肌率I”1。 1 2(4苜旗多糖 天然植物多糖是一类重要的生物活性物质，其有多方面的生物活性和保健功能，可作为 各种药耪番l傈健赫抟存效藏分，霹予鞭防帮治疗瞧括戆疰在肉麴多静疾瘸都其寿匿太豹潜力。 所以关于多糖的结构性质、提取工艺和应用研究正越来越引起国内外学者的J、一泛关注，也取 得了很大的进展。 茁蓿多糖fAlialfa _承化合物构成，包括葡端糖、甘露糖、鼠李糖、半乳糖等。张东杰等 2003 报道苜蘅多糖 无毒性，经茚三酮法检镬，曹蓿多糖不含氆白质，毗半乳糖醛酸为标准，测 得多糖含量是 99(7,f握敬物中 ，该多糖与FeCl3爱凌呈阴性，醭试验晕棕色，爱尔兰试骏莹蓝魏，说明不禽 鞣痿羊|I淀粉、为酸性多糖‘”1。苜蓿多糖具有抗肿瘤、增强免疫作用、降血脂、降血糖、抗辐 射等药理活性忡1。多糖是一类被活跃研究的生物反应调节剂，苜蓿中含有的活性多糖有增强 免黢功能和抗感染静作蠲，遥有治疗高籍溉酵豹作瘸，篮可强纯蠢餐帮预防动辣硬纯、盘捡 痘、心肌授塞等。菖特多糖与香菇多糖、云芝多糖、获苓多糖和猪苓多糖,样是植物多糖， 是无毒性的，有着很显著的保健效粜，尤其具有免疫活性功能而更加受到重视，苜蓿多糖保 健食晶蒋瓶为新疆傈健食晶的重要一员””。营蓿多糖静作硝教栗主袋有:?促避免疫嚣害 l孽 发育婶j。?显差提裹T游巴细胞转化率，援赢血洒中鸡精城瘦抗体的滴度期巨噬细跑的器噬揩 数【”1。?增强疫苗的免疫效果1441。 1(2，5苜稽黄酮类 黄酮艇由2个苯环与中间的l眈喃连接而成，睡I这一基本结构衍生出几千种黄酮类能台物。 贺玉蔹蛰 2003 摄道黄酮类纯台物广泛分枣予天然撼物体内，包括黄羽 Flavone 、冥黄 沉积避免m液凝结成块，阻减少动脉硬化发生的机率郴l。曹蓿中富含异黄黼成分，其中最具 代表槛和特色瓣壤是甍辖素。Dombos 1990 蓠先扶营蓿中掰禽数黔醛酸翅矮内努寒蹬蓥嫠 素和4甲氧基苜蓿索。茁蓿素的最大作瑁程于有效清除人体内的自由基，抗氧化、降血脂，预 防心脑血臀疾病。试验发现，从苜稽中提墩的大豆异黄酮、酋蓿紊有抗氧化作用，可防止肾 雌幽酷和芹黄素瓶神撼物雌激素，并发现这些植物雌激素具裔降低低密度脂蛋自 LDL 浓度及 减少过氧化物的沉积的作用五。苜秸异黄酮类化合物与大豆异黄酮有相似的生物学功能，即 乍稍。 表糯为橙物雅澈索 (2(s天然色素 4 西南大学硕士学位论文 第1章文献综述 营藉中懿天然色素主要有旰绿素、许黄素、溺萝 素强类胡爹 素等。孵绿素毂食菇和 药品嫩产中有许多用途。叫绿繁是牧草叶绿体中最为重要的一类光含色素。大量研究表明， g 绿索其舂强翔静静潮突交、按变态作溺，促遴烧傻、溃疡等锈霜淹芽耨垒，翔速穆强痊愈， 并对降低胆圃醇、治愈湿疹也育,定功效。苜蓿叶蛋白饲料中的叶跺素可大大提高煎囱的鲜 美程发，更穗含A懿蟊昧。胡梦b素在蕊蜜营莽中豹薛矮?#常重要，是维生索A麴耋溪来源; WolfG 1982 研究发现B一胡萝h素能消除自由基，抑制过氧化物的形成，在防癌、抗癌方 蠢豹舞蠲裸靛幸笮耀，对释可羁楚?一胡萝 素转纯凳虾经豢，挺裹瓣虾貔蘧晶绥燕四。辞黄 素是天然色索，叶黄索可使鸡的皮肤和JIi鲢显现黄色，蛋黄变为深黄色或红黄色而受到消费者 豹欢迎。时绿繁在食熬巍药品垒产孛舂诲多用途。提取营鞲静天然恕素替代 人工台威色素曼 是火势所趋ml。 1。3国内泠皂贰耢突进震 1，3(1皂甙研究概况 1(3(1(1皂甙在植物中的分布 避过世器各国丈爨的筛选，发现皂拣类他含钧主要分布于有藏槭物15科，其中单子p ’植 物9个科41个膈(双予叶植物6个科7个属，其中主簧集中谯百合目的薯预科、龙舌兰科、百合 科、延龄革科，石竹科、伞形科、五搬辩、豆科、七叶树辩、远志番; 、接梗辩、玄参幂; 等植 物中分布也穰普遍。,些常用中药如人参、三七、远志、柴胡、甘草、知母、酸枣仁、绞股 蓝、生艨、挞梗、术避、七叶一只花等都含大量妊体皂甙，在海洋动物中如海参、海星、海 盘车等中亦静皂甙的存在四。 1(3( (2皂贰的理化性质及鉴别 1(3(1(2(1麓甙的瑾化性质 皂甙 Saponins 又名皂瞽或者是皂索，是一类较复杂的化合物，由于铝的水溶液振摇时 产生大量持久性蜂窝状泡沫，与肥皂相似，敌称之为皂甙?“。皂甙多为白色无定形粉末，少 数为结晶。息甙是一类比较复杂的分子。从化学结构上看，皂甙热螺甾烷 Spirostane 及其 生源相似盼缁类纯合耪的寡糖苷以及三旗类纯食物的寡糖替所组成，置其裔苦而辛辣的味道， 其粉末对人体黏膜有强烈的刺激性，能引起打喷嚏。 (3，’(2(2麓甙鑫辱鍪澍 r1 泡沫黢别法:曦甙因水溶液经震端能产生大量持久性肥皂样泡沫而称为皂甙，所以可 敬之簏特征求鉴别皂贰。反应方法是取挺取耪lg，加承lOmL煮沸lOmin露过滤，将滤滚于试 管内强烈振播，如产擞持久性泡沫 15rain以上 即为阳性反应。 三萜皂甙反艨显色，在使用芳革醛为试剂的颜色反应中以香草醛最普遍(有香草醛,硫酸比 琶法和香草酲一赢氯黢毙色法。其显惫燹敏，霹灞予定鬣，试裁空鑫溶滚镶浅。番擎醛一硫 5 西南大学硕士学位论文 第1章文献综述 酸试潮眈色效莱不够好，试帮的空白吸收值较赢，对分褥样晶静测定干扰较大，而蒋苹醛一 高氯酸试剂，宅向对样品的测定几乎无干扰，操作较简便，显色灵敏度高，方法重现性好【”1。 3 溶血试验:一支试管翻入蒸馏承0(5mL，舅,支热熬求援取液0(5mL，在分剐翻,x(o(5mL 1(8,NaCI水溶液，振摇后加入lmL 2,觳血球悬浮液摇匀，观察溶J血现象is“541 1。3 (3辜载的缝或苇瓣分类 1(3(1(3(1皂甙的组成 皂最是由皂戚元 Sapogenins 帮耱、耱醛酸、也可髓逶宥其毽蠢辊酸掰缝成。缀裁皂戴鹣 糖常见的有葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、阿拉伯糖、术质糖以及其他戊糖类。常见的糖醛酸有 蘩镯耱醛酸、、 乇巍耱醛酸等等。这些耱试糖醛酸先结台成耱链?寡糖 戆形式，再舔秘蕺元相 连，少数情况是单糖的形式和憩甙元相连p”。 (3( (3。2壤戴懿分类 按照皂甙被水解后生成皂甙元的化学结构，将皂甙分为两大类:甾体皂甙 Steroidal Saponins 鞠三蕤皂贰 TriterpenoidatSaponins 。鍪体皂藏的皂藏嚣是甾体掰生物，除个别 外，都由27个碳原子组成，一般不含羧基，呈中性，故鼬体皂甙多为中性融甙。三萜皂甙的 皂贰元是三蕻类纯会貔，豫个剐羚，都楚430个碳琢予掰缒袋，多数酸性皂装属予jI :类醐。 1(3(1(4皂甙的药理作用 我国古代早就有瘦翊含皂贰豹中药滚痍的记载，弱代瘦娼含皂藏藏分的中药方粼更是不 胜枚举。已有的研究始示，甙冗的结构对皂甙的生物活性起决定性作用嗣。从化学结构上看， 三旗类皂贰始人参皂贰、柴胡毫贰、甘草皂式、捂梗皂贰、远恚皂羲、商姥皂贰贰、本通皂 甙、黄芪皂甙等具有降低胆圃醇、抗炎、抑制肿瘤、免疫、兴奋蛾抑制中枢神经、抑制胃液 分泌以及杀弼糖子与软体动物等作用【581。甾体毫姣翔沿除革皂贰、知母皂拭等列显示有抗肿 瘤、抗真菌年?细菌以及降低胆阉醇的作用。 1(3(1(4，1防止心血蟹疾病和降坦固醇作用 陈剑雄等 1997 报道人参皂甙Rgl在治疗动脉粥样硬化和血栓形成方面具有显著的疗效， 绞股蓝皂贰对氧自由基所致脑血管痉挛霄保护份用，对地塞米松所致小鼠肾上腺皮质改变有 拮抗作用，GYP对血小板聚集有抑制作用，可作为血小税功能抑制剂?雌。甘草皂甙通过对代 谢影响促进胆固醇的封#泄，丽健血清臌阎醇总水平F降，卵磷脂明显降低，中性脂肪、B一脂 棚巷疾病有治疗作用，它抑制了心肌与肝中脂鹰过氧化物的形成，并影响其中的酶的作用， 减少血液凝结，降低躯固醇与糖的永平，可激融免疫系统16l】。 1(3(14(2提高肌体免疫力 一些皂甙如人参皂甙能鹋显增强梳体的免痰机能，改善物质代谢，德进造盘杌隧，调节 人体的阴阳平衡、气I妞平衡和代谢平衡【。。CalisI(等 1997 据搬道，通过刺激离体人淋巴 纲飚的寅验证明了黄芪皂甙有调节免痰活动静作用 “。怿孳皂甙能破坏血管内静袋滋病感染 6 器南大学颟士学位论文 第1章文献鲸述 曼曼黑曼曼!量?I――„一―――――――――――――――――――――――――――――蔓I蜷皇 芭曼鼍麓囊??―?鼍墨―?量舅寡?? 细脆，对天静免疫缺陷病毒?lv 具寄撺翻增殖的效采l耱l 李英帮等，1995 。大豆毫贰其裔 藏,,雩#用，还能搀割爱滋瘸毒鳃感染刚。 1 3(1(4。3抗肿瘤作用 sagndersiae分离的皂甙OSw一1对正常细胞没有毒性，而对 从百合科植物Ornithogalgra 恶性肿瘸细胞共有强烈毒性，蕻抗癣活性眈目前临床用的抗癌药物如mitomyeine、 raddeana adriamyein、綮移酵、颞锫离100倍，有羹成为薪一代抗癌药椽嗍。金镶花翻HemoHe 中三菇息戚有姓著的消肿作用菇能抑制腹水性艇癌的生长。最i匠的研究格外令人碾羁，研究 证实，从中药人参中提取得到的人参皂甙有抗绱作用，人参茎叶皂甙可抑制肿瘤细胞的RNA 和DNAw穗'-成。人参皂甙还有增强机体的免疫调节功能，提高机体对癌变的抵抗能力删。 1(3，1(4(4抗菡涪炎作用 从出萘 Camelliajaponica IPI-r扣分裹熬三旗皂贰I和Ii已翔馋杀越舞，从云囊白药中提取 的皂甙对小鼠的实骏性炎症有抑制作用。青叶胆皂甙具抗肝炎作用，柴胡皂甙具清热解毒作 用(皂荚皂甙具镇啵消炎作用[6Sl。 1(3(1(4(5嚣它方荫的作带 豫上述幸#羯矫，大多数皂藏能后疑自缨燕球破壤_ 嚣产生溶囊雩#臻。 扶Smal“ madagastaliensis中分离褥到的心静寡耱皂娥和,静双糖皂贰具有杀软体动物的滔性、能防治舭 吸虫病， 岫alanites 牛膝0c^yranthes 譬糟 “。 1(3(1(5皂戴豹提取和麟割方法 1，31(5(1提取方法 皂甙易溶于水、甲醇、乙醇，难溶予丙酮、乙醚(在含水磁T醇中溶解度较犬(因此， 总皂甙的提敬主要利用奄甙的溶解麓。一般可l;盂先雨甲醇、乙醇或50,,80,静稀己酵为溶 剂提取，缛到总提凝糖，然基器l羽襄蒜在食本了’簿残茂醇中溶解疫较大，强又熊与永分残二 相的性嫫从水溶液中用丁醇或戊醇恕皂贰摹取出来，借以垮亲水性强的糖、蛋白质等楚质棚 分离。戚利用皂甙不溶于丙酮、乙醚提取或沉淀得到粗制总皂甙【6”。 1 正丁醇提取法 本方法椿憨撬敬物溶于永中，先蔫紊稽性有梳漆翔萃驭，一些亲l,性的杂震转溶予有壤 滚裁囊数除去，嚣耀正丁簿摹取。遮个方法是强藏提取皂戡的邋法16”。 2 水提取法 以水为溶剂提取中药中泉水性成分，在水提液中加入适景已醇，采用弹沉法除去部分不 溶于酵的组分。 3 溶裁沉淀法 往食有皂甙的醇溶液中加入丙酮或乙醚，出于皂贰在两酮、乙醚中潞解度小丽被沉淀析 7 莲南大学颈士掌僚论曼 第1章文献综述 出得到。 1(3(1(5 2精制方法 慧皂甙熬努离鞠鞲翎鼹方泫青攀敬法、透梧法、调节溶裁稷性沉淀法、铤溅淀法、分段 沉淀法、柱层析法等。 1 正。J‘醇萃取法 薅浸出渡浓缀戮小体积，然纛蠲正丁酵把滚滚中豹皂甙摹毅爨寒。将萃取波减莲蒸馏， 回收itj-醇得粗总毽甙。 2 透析法 羽东或穗乙醇没也所得的没出液含有大量无枫盐辩，在适姿浓缩或网收乙醇嚣，用透折 法或电逶辑法可除去无视盐，往没密液被净往。 3 调节皂甙溶液的极性沉淀法 先回收甲醇或己醇浓缩到小体积后将皂甙的水溶液减压浓缩、喷雾干燥得粗总皂甙溶于 热乙簿劳健达囊_i莛键帮派疫，冷帮辑塞部分憨毫斌，过滤得聱分慧皂斌。收豢忍酵滤滚囊其 中分次加入一定数趱的苯或轻汽油，调节溶液的极性使皂甙 芥池，过滤叉褥到了部分总皂贰。 合并符次所得皂甙，干燥得总皂甙。 4 镫沉淀法 将糖皂甙溶予少鲎乙醇中，龆入过量的镪和中性乙酸镇溶液，并搅拌，使骏性皂戴沉淀 完愈，滤取沉淀。 :fi二滤液中再加入饱和碱性乙酸铅溶液，中性壤甙又能沉淀出来，滤取沉淀。 然届将所得沉淀分别悬浮于乙醇巾进行脱铅处理，脱铅厉，将滤液减压浓缩，浓缩液加入乙 醚，毒蓐出沉淀磊静褥酸往帮中经赣襞两部分。 5 分段沉淀法 利川皂甙难溶于乙醚、丙酮辞溶剂的性质，将粗皂甙先溶予少量甲醇或乙醇中，然后逐 :1 的混合溶翔 船入乙醚量以能使皂贰漆加入乙醚、丙酮域己醚一丙酮fl 放酵溶渡中析出为 限 ，摇匀、皂贰即析出。开始桁滋的沉淀往往禽杂质较多，继续加入乙醚可褥刘纯度较商的 皂甙【69】。 6 柱层析法 近年来采强大?L糖《i或_夫i‘潍络辚l?程瑟凝浚稽至l懿褪总毽蕊，先臻承洗去耱、氮基酸 等强极性组分，然后甲醇、乙醇戚它们的水溶液洗脱得总皂甙【„。 1(3，2苜蓿皂甙的研究概况 晕在50年代，强鳋就开始疆究蕾蓿皂甙，圭婺在握取、努舞、结构签定上傲了狠多】(佟， 有茂这方面的报逆很多【71”。由于苜蓿皂甙的生物药理活性在隆药、保健上都有很好的应用， 因此也极大地推动了苜蓿皂甙的化学研究。 (3(2(t菖整皂蕊瓣缝捣 8 嚣毒丈学醭士学链论文 第1章文献综述 莛藿禽戴建纛巧三旗皂甙，是三菇类鞫系魏熬羟基和糖分子环状半缨醛?的羟基失水缠 合而成的。苜蓿皂甙水解时可得到三萜烯类皂甙配基、糖和糖醛酸。菖蓿皂甙糖类经鉴定为 甙作了结构测定，测得含有6种皂甙单体，蕻中有4种苜蓿甙酸、一种大豆甙元I、一种常春甙 LA 和未知组成物【77】。在苜蓿属植物的根部和叶鄢发现的甙元主要有大豆堪甙配艇醇A、B、 acids，2秘zanhic 释medicagenic acids，4静hederagenins，l转soyasapogenol A，2秘soyasapogcnol B，1种soyasapogenolE，和1种bayogeniaglycoside-但其中只肖10种息甙的结构利用质谱和核 磁共振技术被鉴定出来 结构如图1(1所示 I译l。 童 McdicagenicAcid 必 《c Hedcragenin d SoyasapogenolA 一洲 9 嚣赢夫学醢上学位谂文 第1章文菔综述 B C 《e Soyasapogcnol 国Soyasapogcnol D E g Soyasapogcnol h Soyasapogenol X姚 。l一 煽了一 嶙, p?矾 10 两南大学硕士学位论文 第1章嶷献综述 上部分为材料，用甲醇回流提取，经测定含3,的皂甙【7„。丛学滋等 1987 对紫花萌猪的生 长周麓中皂甙进行了测定，结聚为其曹耪总皂甙的相对备势食鼙，嫩芽赣最高，秸黄期最低; 以部位计，尊期根部明显偏高，地上部位随生长期的延长，有逐渐降低的趋势【8“。 1(3(2(4营蓿皂甙静生物活性 近年来的研究表明，苜蓿患甙具有微强的生物活性。苗蓿皂甙在降低血 液中的腮固醇、 抗韵躲粥样磴纯、抗蘸和抗虫、溶蛊、纯惑及撬营养方蔼燕有不露鹣生鹱终爝。 1(3(2(4(1降低血液中胆圃醇和抗动脉粥样硬化 鸯学者对菖蓿毫贰瓣耪露酵戆调节梳理进行过磺究。蒋蓿皂戢辫盎鬻熬税理主餮楚在嚣 肠部阻止外源性胆同醇在胃肠道中吸收，同时促进内源性胆固醇和胆汁的摊泄，使m清磷脂 浓度降强，筏鑫浆蛋自在髂肉分蒋正常纯。Malinow等 1981 羯蘩蓿逮上帮分豹葱毫戴对短 尾猕猴胆固醇与胆汁酸平衡的影响进行了研究，结果是茵糟皂甙能降低血液中的胆固醇而不 改变薅密瘦瓣蟹自串耱凿醇数承乎;羁辩还麓洚鬣瑟内对耱簦酵豹骏牧，璞鸯霎了内澈鞫步 源 中性类圃醇和胆汁酸谯粪便中的排除87“”。William 1980 报道皂甙在哺乳动物正常的消化 道孛不被吸救。能与瓣圈醇结食生戒不溶于承熬簸台魏，增热耪霾簿懿 瀵，减少麟涸醇在 肠邋的吸收，因而具莉降低血浆中胆固醇含量的作用1891。MalinowM(R(等 1983 报道苜稽 皂贰不坦熊黪止实验秘物熬裹艟鞠醇蠹疲和动辣粥撵硬纯形成，蘧擅也能黪低实验动镑靛褰 胆圃醇血症并使动脉粥样硬化斑块的消退陋”。丛学滋等人 1988 也对蓠蓿皂甙的降血腿 强酵及减轻燮验性裁赫褒撵硬纯终珥皴了实验，溅明了斑用营菇地上部分零《戏总皂贰粗制刘 对防治免、撒等实验动物的高胆固醇觑症和动脉粥样硬化有良好效果M。 1(3。2。4，2抗莲和挠擞牲 W 苜蓿皂甙具有抗菌和抗虫的活性。国外的一些学者在这方面做了一些研 究。Oleszek acid 1990 报遴了从营耱报皂贰中分离出的meAicagcnic3-o-垂 ucopyranoside具有缀嵩的抗 Tichoderma acid viride活性四。据报道从苜稽根皂甙分离出的medicagenic 具露握著的抗楗物璃暇体和人的座默真越活性，其抗隐球酵母菌的媛低有效 浓度为 4rag,mL黟州。营蓿皂甙的抗荫机理是:皂甙能增大细胞膜渗透性，使细 胞膜内的离子渗透捌 细胞膜外;嫩贰能与细胞膜上的麦角固簿结合生成稳定复合物，馒细胞膜上 的麦角瑚醇消失。 且糨皂甙抑制炭疽菌的最低浓发为289flg,mLt9”。皂贰成分是植物揽虫害进化一种特殊的代谢 防御机制。ManalM(等 2000 研究发联曹蓿根患甙作为瑟虫的驱散帮及抗生现象方面具有特 研究表明苜稽根租皂诫对小鹤f蛛和蚜虫的毒性眈永解后委强阳。 1。3。2(4(3溶血作用 皂甙溶搬作用一般认为是宅和红细胞里的鹅闭醇相甄作用而gl起的。阐时能和麟糙甾醇、 ll 两南大学硕士学位论文 第1章文献综述 蛋白质平?磷脂结合而形成稳定性不同的产物。Griminger等 1958 报道，皂甙可和胆固醇形 成稳定的络合物【9„。Price 1987 报道了苜蓿皂甙具有溶血的活性。菖蓿皂甙的溶血活性与 苜蓿酸有密切关系。己经证明苜蓿根的提取物比苜蓿茎的提取物有更强的表面活性和更高的 溶血作片|。TavaA(等 1998 根的提取物之所以比茎、叶的溶向作用强是因为根中苜蓿酸含 量高，以及提取物中甙元和糖的比率较高所致【“1。OleszekW 1990 用两种方法测定了苜蓿 根皂甙的溶血活性，结果表明单糖链皂甙的溶血活性比烈糖链皂甙高:溶血活性最强的皂甙 acid 3-0一glucoside，其次是单糖链hederagenin。 拦单糖链medicagenic 1(3(2(4(4化感作用 BirkettM(A等 2001 研究表明苜蓿的化感作用主要归因于皂苷，特别是苜蓿皂苷 fmedicagenic 现，每个品种平均含有14个不同的皂营分子，普遍存在苜蓿酸火豆皂苷B soyasapogenol B 和常春藤苷 hederageninglycoside ，浓度变化不大，而其他10余种皂苷分子含量和 glycoside 种类存在极显著差异;其浓度越高，化感抑制性越强。皂苷具有表面活性效应，能破坏动植 物的膜结构(可以作为除草刘和杀螺剂f””。朱晓红等 2004 对苜蓿的化感作用进行了研究， 结果表明:紫花苜蓿全草的水;ffl95,乙醇浸提液对玉米和小麦种子萌发均有显著的抑制作用， 进一步用Gc，Ms技术，初步推测苜蓿的化感物质是酚和皂甙两类化合物【1041。李志华等 2002 通过大量的研究已经证实，莒蓿能产生和释放化感物质抑制自身和其他作物的萌发和生长【”’ 1061，而且苜蓿的这种自毒和化感抑制作用与其品种显著相关【”】。 1(3(2(4(5抗营养作用 由于皂甙具有降低水溶液表面张力的作用，当反刍动物大量采食新鲜苜蓿时，可在瘤胃 中利水形成大量的持久性泡沫，夹杂在瘤胃内容物中。当泡沫不断增多，阻贲门时，嗳气受 阻，致使形成瘤胃臌气。预防措施为放牧营蓿前先喂一些干草或粗饲料，露水未干前暂缓放 牧，以及和禾本科牧草混种或混合饲喂等【””。Majak等 1980 利用瘘管牛进行反复研究 分 别用含1(94,和0(82,的苜蓿品种饲喂牛 才发现对牛瘤镩臌胀病没有显著差别。基于此及其 制单胃动物生长，主要由于苜蓿皂甙的苦涩味及对口腔和消化道的刺激作用，降低适口性及 acid 采食量所致【lloJ。OleszekW 1992 研究表明从苜蓿地上部分皂甙分离出的zahnic K【??，”。Heywang等 1959 报道了苜蓿皂甙能降低肉仔鸡的生长速度和产蛋鸡的产蛋率【“”。 Klita等 1996 研究表明在绵羊的日粮中添加5,的苜蓿根皂甙能减少瘤胃中原虫的数量，降 低总氮的表观消化率‘“”。有人认为把皂甙作为一种因素来限制配合饲料中苜蓿的用量。因此， 要选育低皂甙含量苜蓿以增加利用这种作物作为单胃动物蛋白质米源的可 能性，培育低皂甙 卣蓿。铺种具有重要意义。 西蔼大学硕士学健沦变 第1章文献综述 1(3(2(5苜蓿皂甙的提取纯化和禽燃测定 1(3(2(5(1苴蓿皂诫的提取纯化方法 蛰疆皂甙的撵墩缝亿一觳采掰遴法。透法鄄弼邋当浓瘦弱甲簿或己簿提取，经乙醚或蠢 油醚脱脂后再以水饱和的止丁醇谶行液――液两相萃取，得到患洙总量。但通法生产过程太 长，有机溶媒用量多而危险大，且操作繁复、成牖杂质多、糖和色素等杂质去除不完全等缺 点。遨辨提取方法亳实际生产中都存在许多不理怒之楚，拓泵在遮静黄统提毂王艺上进孬磅 究和激进，在实际生产中是很酊行的。近年来，穰声波提取法、超临界C02萃取法以及人孔吸 附树脂分离技术以其提取时间短，提取成分纯度较商等优点被广泛使用来萃取天然有机化合 物，所以可以应用这些新技求来提取和纯化皂甙。王松伯 2005 熠超声波掇敷法对曹蓿皂 贰鹃撬取进章于了辫究。瓣途群等 2004 研究探讨了应用超簸嚣e氇萃取营蓿察懿扮方法11“l。 acid、 hederagenin tlsoyasapogenol[117】。 1(3(2(5(2蓥蘩毫姣含量弱测定方法 皂甙含量的分析测定方法常用的有薄层法、比色法和重量法和商效液胡色谱法等。TLC 法怒将薄层上展开聪的样品在常光下、或喷雾显色 需加热 后、城在紫外灯、荧光灯下呈现 一定灏色的斑点，这样具有颜色的斑点或谱带，拣为薄层色谱。其分离疆l理悬物理分离方法， 裁弼混合耪中备缀分的物理健学后壤豹羞襄，在袋开舞l静带动下，淤不弱的速壤移动。旗孬 达到分离，多用于化学物质的定性和定量分析。用样品移动比 流动相展开距离与样品展开 距离之比，即Rf值 作为样品定性分析的衡量德。由于样品的展歼距离不同，样品斑点的扩 毂魄攀氆不葙同，一般只瑁予定能分离签定，缀灌爱予穗确的定整势辑。慧靛采浚，宅是一 种擞作简单、方便、迅速的色谱方法，并且不怕污染，具有简便实用、费用低廉的优势，可 应用于药物及制剂的鉴别、杂质枪黄以及中药成分分析。根据礴甙类化合物 能与芳香醛一 高氯簸显色反疫i““，分光光疫法较需用，一般谯最大吸收波长545nm娃测定吸光毽，按 专十舞如苜蓿皂甙的擞取率。篮晓客等 1991 嗣魄色法测定苔稽皂蕺的含量 “”。重量法瓣定 皂贰含量的原理:用飙氧化钡或氧化镁将皂甙沉淀出后干燥称戴谶用乙醚或丙酮将皂甙沉淀 出感干燥称重。Nowacka等 1994 翊HPLC法测定了曹蓿根部和地上部分皂贰的含量。 1(3。2，6蓥蓿皂戴鹣拜发瘟蠲蘸袋 随着苜蓿皂甙的生物活性愈求愈受到人们的菔视，其应用也越来越广泛，对它的开发已 逐渐深入到食品、保健、医药和网用化工等多个领域，应用前景非常广阔。利用苜蓿皂甙的 援然凌能，哥发挠襄老、残驱等慧葵晶;剥鬟藿赣皂戴豹药理滔瞧，翔翔刳腿鞫醇在瑟递的 吸收、防治心脑癜管疾病、降压、抗菌、消炎、撼燕、镇痛、强壮等方面的功效。将所提取 的肖效物质制成胶糍、片剂的保健品，既服用简便又用药体积小;而且还可以作为食品的天 然甜喙剂、保护剂、发泡刹、增眯制和抗氧化刹等。苜蓿皂贰毒性低、可开发成有羽的降血 脂及治疗冠心痛酌药物。Colodny磐 2001 牵j嗣瞽蓿释子串的蓉蓿皂甙在舔藤上降低太蠡液 13 西南大学硕士学位论义 第1章义献综述 II II II 中的舱固醇和“ 钳由三酯(苜蓿窝甙还能通过葭善澈状血管的血液循环而减轻冠心病人的心绞 痛【120】。 1(4本研究的目的和内容 。4， 磅究熬鏊豹嚣意义 为强科苜蓿属植物，垒属有60多个种 L( 【„】。紫花菌蓿在世 紫花苜蓿 Medicagos“tiva 孬蕊溺淹劳京r+泛，怒瞧孬公认静离产优质牧孳，被誉为“牧草之王”。避年来疆羲我国套 牧业的发展，对优质畿白质的需求不断扩大，为解决蛋白质饲料的问题，垒国包括南方地区 麓紫花蕾蓿静挺嚣积程邈逮增热，孺营蓿中静次生霞瀣狻矮皂羲禽量过裹， 对蜜鑫不拳l，它 抑制单胃动物的生K，使反刍动物发生瘤胃臌气。也有研究报道莒稽皂甙谯降低m液中胆同 簿释拨动球粥榉硬纯方藿 具存蕊嗣嚣蛙。还可敬放营覆中涎褒蓖嚣毽式终为秘耪耨爨键辩添 加剂。国外必于苜蓿皂甙的研究报道，多数都集中在对其提取和gE化、结构、定量定性分析 器 生壤活性瓣磷究上。嗣蠹对莛蓿皂戴豹舔究掇遴较少，嚣关 蕊蓿皂贰逡传力的掰究还拳 见报道。综，匕所述，材必要对茵蓿皂甙的遗传力进行研究，搞清翁蓿皂甙i敷传规律，从而制 定寅秘强蠡拳l方法，最终弯藏鳃皂戢秘凑皂甙窘壁静苕蘩龆耱潢鬣强会靛瓣要。因越本研究 无论是在理论研究还怒生产实践上都有道要意义。 (4，2研究豹主要内窑 】(4(2(1建立分光光皮法测定苜蓿总皂甙的含量 1(4(2(2通避止交实验设计确定超声波法对菖藕皂甙肫最健提取工蕊条孛 1(4(2(3苜蓿不同刈割期、不同生育期和植株不间部位总鼹甙含量的变化 l。4，2(4营蓿精种闻和豁种内毫甙含量的变异及冀遗传力的研究 14 西南大学碗i学位论文 第l章文献综述 1(4。3研究的技术路线: 西南太学碗七攀挺论文 第2章蘑菇慧皂戴害曩期#定方法懿建壹 兰愚,,,L(I I， II?皇笪笪蔓曼黑 第2章蓄蒲总皂贰含量测定方法的建立 墨霄文献搬邋茁耱总皂蕊的窥性宠量分析方法豢重繁濂 Gravimetricmethod 、紫多 分光 光魔法j UV--visiblespectrophotometef 、薄瑶色谱法 ThinLayer Performance 液捆色谱法m魄h Uquiid C甏逶瑁予经过蓊步分离靛定桎， 定鼙定性分橱弱饶点在 努裹速藏快，逶稻范蠢 “+餐TI 对 定餐其商嚏鹃靥隈洼。慕测HPLC法，默营蓿皂贰麴襞,零馋成分捧为标准菇簌定蘑 蓿皂甙含鬣的方法【匕较复杂。因为谯国内莒蓿皂甙的单体成分不易获得，加之菌蓿中所含的 皂甙结构中无双键，需在HPLC潦检侧前进行衍生化反应使皂甙结构中含有积键基团。此过 程摆兰l繁琰，霹照耀爨一秘操终簿馁、快速营蓑蕙毫贰禽h燮靛捡测方法。 藿蘩毫贰怒,静骞墩莱烷裂豹嚣垮三蘸黪蘩戴托台物。零蹙没畜紫? 疆敷，戮筵。蠢摹 醛一冰醋酸鼹饶爱疲被j。泛逾废弼予三三萜皂甙鬟成势静含攮测露，龆大壹毫械、黄蓰皂贰等 f”j。王松泊 2005 耀齐墩果酸佟为标准品，采用紫外分光光艘法测定曹蓿惑媳甙含量(IS01。 零文※用蓄辩常襻藤窀甙俸为掭嘏鹣，将紫癸分毙光度淀鞭予 |l||定营藿慧毫戴瓣禽鬟，瓠建 立一种简便、快摅测定苜蓿总皂斌禽避的方法。 2， 誊葶糕与方法 2， ( 供试材料 从话南人学农场采取初花期的紫钝苜蓿经电热鼓风干燥辅柱65?烘干至憾激尉，用小烈 的撼物样本粉静机粉碎，过40爨臻，救在干燥器中，备弼。 2( (2主要饔黢试粼 葭蓿常舂藤毫贰 标准晶 蕨波兰麓买 番草醛 分析她 成都科龙诧:L试刹厂 舔油醚 分辑缝 乾索藤海佬 l 厂 甲醇 分析纯 重庆北碚精细化工_r 戤己酸 分辑纯 萼 嚣医药集弱上海纯学试裁公司 疯簸酸 努褥纯 戒罄弦学菠铡厂 寓验用水为蒸馏水。 2(1(3主要实验仪器 砉鑫秘试撵徽型辨簿魏