叶绿素测定方法叶绿素测定方法
一、 方法选择
1、分光光度计法>荧光光度法>SPAD速测法,浸提比色法>萃取比色法,常温浸提比色
测定>高温速浸提比色法,如果时间条件允许,建议选择常温浸提比色法。
2、药品的选择,常用有机浸提叶绿素的试剂由甲醇、乙醇、丙酮,乙醇对身体的伤害
最小,丙酮最厉害,如果通风条件不是太好,建议选择乙醇;有机试剂混合液提取具有
协同优势,乙醇与丙酮的混合液比甲醇与丙酮的混合液(甲醇乙醇混合很少)浸提的要
完全,而且稳定,乙醇、丙酮、水的浸提效果次之,差异不显著;综上,如果能买到丙
酮的话,乙醇、丙酮以1:3的比...
叶绿素测定方法
一、 方法选择
1、分光光度计法>荧光光度法>SPAD速测法,浸提比色法>萃取比色法,常温浸提比色
测定>高温速浸提比色法,如果时间条件允许,建议选择常温浸提比色法。
2、药品的选择,常用有机浸提叶绿素的试剂由甲醇、乙醇、丙酮,乙醇对身体的伤害
最小,丙酮最厉害,如果通风条件不是太好,建议选择乙醇;有机试剂混合液提取具有
协同优势,乙醇与丙酮的混合液比甲醇与丙酮的混合液(甲醇乙醇混合很少)浸提的要
完全,而且稳定,乙醇、丙酮、水的浸提效果次之,差异不显著;综上,如果能买到丙
酮的话,乙醇、丙酮以1:3的比例混合液提取最好,其次是乙醇、丙酮、水以4.5:4.5:1
的比例混合液,如果不想用丙酮,可以用95%的乙醇代替,但是与混合液比,提取效率
不高。
3、称样量,0.2g样品,选用20ml浸提液浸提,0.5g样品,选用50ml浸提液浸提。 二、 实验原理
分光光度法测定叶绿素(包括a\b\类胡萝卜素\总量) 含量的原理是,以有机溶剂在常温暗室直接提取样品中的叶绿素,测定其吸光度,根据叶绿素(包括a\b\类胡萝卜素\总量)在特定波长的吸收,用公式计算其含量。
三、 器材
棕色容量瓶、721型分光光度计(751型分光光度计更好,越精确越好) 四、 步骤
1、 将叶片洗净,选取中间部分,称0.200克左右,并剪成2mm左右碎条
2、 将样品放入容量瓶中,加入浸提液,定容,放在暗处26h左右
3、 比色,如果仅仅测定叶绿素A\B总量,测定波长在665nm、649nm、652nm处吸光
度即可,如果还测定类胡萝卜素含量,再测定处波长在470nm处的吸光度即可。目
前,不同的浸提液提取方法都是在这些波长下测定的。
4、 每个实验样品重复三次,空白两次重复即可(本实验中空白意义不大) 五、 计算
Ca=13.95*A665-6.88*A649
Cb= 24.96* A649-7.32* A665
C类胡萝卜素= (1000*A470-2.05* Ca -114.8* Cb)/245
C总= A652*50/(34.5*m)
Ca 为叶绿素a的浓度
M 为称样量
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