N-(6-嘌呤)-蛋氨酸探针测定生物样品中蛋白质含量

N-(6-嘌呤)-蛋氨酸探针测定生物样品中蛋白质含量 N-(6-嘌呤)-蛋氨酸探针测定生物样品中蛋白质含量 第卷 分析化学 研究简报 第期 年月 :./... . 一一嘌呤一蛋氨酸探针测定生物样品中蛋白质含量 崔凤灵。 邢卫卫 江晓莹 张晓丽.程姗 霍瑞娜 河南师范大学化学与环境科学学院,新乡 .中,三维荧光光谱显示核苷类药物嘌呤一蛋氨酸 摘要以为介质.在?缓冲液 与人血清白蛋白可以发生相互作用。结果明,的加入使得人血清白蛋白内源荧光猝灭, 且体系的同步荧光强度和溶液中人血清白蛋自的浓度呈良好的线性关系,基于此,建立了测定蛋白质的新方 法。在选定的最佳实验条件 。离子强度为. ,.下.同步荧光强度与人血清白蛋白在 .~ /范围内的线性相关系数为.。运用本方法测定人血清、唾液和尿液等生物样品中的蛋白质 含量并进行加标回收实验,回收率在.%~.%之间。本方法的检出限可达. /。本方法所得结果 与经典的考马斯亮蓝法一致。 关键词嘌呤一蛋氨酸;人血清白蛋白;司步荧光光谱;三维荧光 引 言 蛋白质是人体中一类重要的生物大分子。血清白蛋白是血浆中含量最丰富的蛋白质,是多种内源 和外源性化合物在体内运输和贮存的载体和靶分子。作为存储和转运蛋白,血清白蛋白的分析一直是 临床检验中诊断疾病和检查疗效的重要指标”,是所有蛋白质中研究最广泛的一种,因此血清白蛋白的分 析和测定对于临床医学、药学、食品等行业具有重要意义但】。目前,测定血清白蛋白的方法有凯氏定氮 法】、分光光度法、荧光光度法”、共振光散射法陬和电化学方法捧’等。同步荧光光谱法与常规荧光分析法 相比具有窄化谱带、简化光谱、减小光谱重叠及可减小散射光影响等优点。文献】采用同步荧光技术 分析了环境样品中的多环芳烃化合物,等【基于亚甲基蓝和的相互作用,应用同步荧 光法进行含量的测定。同时该项技术也成功应用于多组分的同时测定”,因此同步荧光法具有一 定的应用前景。本研究基于和的相互作用,以 / 为荧光探针,运用同步荧光方法测定蛋白质含量。 蛋氨酸义称甲硫氨酸,是构成蛋白质的基本单位之一,是 人体必需的种氨基酸中唯一含硫的氨基酸。蛋氨酸通过参 与机体的氧化还原反应,实现其抗氧化、抗毒作用。它参与体 内甲基的转移和磷的代谢以及肾上腺素、胆碱和肌酸的合成, 是合成蛋白质和谷胱甘肽的原料,在抗衰老和疾病防治方面 ‖\ 有广阔的应用前景”,嘌呤一蛋氨酸?一 图 卜嘌呤一蛋氨酸的结构式 ,是一类新型核 一一. 一?一 苷类药物中间体图,本实验以为荧光探针,测定 生物样品中蛋白质的含量。 实验部分 .仪器与试剂 一荧光分光光度计日本分光公司;?型电子天平北京赛多利斯天平有限公司; 一型酸度计北京赛多利斯仪器系统有限公司。 收稿;一接受 本文系冈家然科学基金.资助项目 ’?:. 万方数据 目《???? ?十?? ×,/血清萤白华生物股份有限公刮溶液,× 溶液。 / 所用试剂均为分析纯.寓验用水均为二次去离水。 缓冲液用于蛹节体系的值.. 用于阕帖体系的离子强度。 实喧方法 . . .. 及适量溶液. 将.缓冲液 依次加剑】存虽版中.“二扶占离子水定容.摇匀。荧光分光光度计的发射与 激发狭缝宽度均为 ??一?用 石英吸收池,以同步荧光信号埘激发谜匪测绘同步荧光光谱网。 . 三维荧光光谱 ?【 血清白蛋白分子中困含有包氨酸、酪氪磕,苯丙 『 氨酸等残基而能够发射较强的内源荧光。按宴验方 筐彩形;,?、滞. 和 法得到 体系的三维荧光光谱‘ 一缓彩笋乒?二、???罔图。由嘲 可见,。。 “一.是瑞利散 黧黧黧誊遗//////删////////... 。????量兰主:三婆?‘‘一 ????女??目啪? ?? 帅‘祧删?‘? 最佳反应条件的选择 .. 的选择龃值对木方蛙的灵敏度与选样性有直接影响。在一定条什下,考察了 出取不同 时.可以樽到目步荧光信号最强且半宽度最小的单峰同 值时体系的同步荧光光潜特征。、々甑一 步荧光光谱阿。本实验选择; 值的影响考察了值在 ~.范围内.对体系同步荧光强度的影响 万方数据分析化学 第卷 图。结果表明,.时,体系的稳定性较好、 灵敏度较高。选定值为.,固定其它试剂的用 量,分别取,.,.,.,.和. 的?缓 冲溶液,测定体系的同步荧光值,结果见图。从图 可见,当缓冲溶液用量为. 时,同 步荧光值最大。 台?曲一. / ..离子强度的影响实验使用. 溶液考察了离子强度对体系同步荧光强度的影响。 结果表明:用量在.~. 范围时,离子强 度对体系的同步荧光强度有影响;当用量为 图不同的?值对荧光强度的影响 . ,即离子强度为. /时,体系灵敏度最? .高。因此,本实验选择离子强度为. /,即 猷 . . / 溶液作为离子强度缓冲液。 ? / .;. . ..加入顺序的影响 考察了多种加入顺序对 扫基??一‰ 扫荡;一?譬‘ 图 值及缓冲溶液用量对体系荧光强度的影响 ..×?/ :. ~/ . 体系同步荧光强度的影响。当加入顺序为????时,体系的同步荧光强度最 高、且稳定性最好。 .. 用量的影响考察了不同浓度的对体系的同步荧光强度的影响。结果表明, 的浓度越高,体系的荧光强度越低,导致灵敏度下降。而加入低浓度的虽然有 较高的 ~/。 灵敏度,但重现性变差。综合考虑,的浓度选定为 .共存物质的影响 考察了一些常见离子和有机物存在时,对蛋白质测定的影响。相对误差控制 在?%内,以下物质 共存倍不干扰测定:,,,一,:一,十,,一, 淀粉,葡萄糖,麦芽糖,柠檬酸,一鼠李糖。 .蛋白质的测定 在最佳实验条件下,以体系的同步荧光强度对浓度绘制标准工作曲线,体系的同步荧光强度 与在.~. /的浓度范围内呈良好的线性关系。其线性回归方程为..× 。,相关系数为一.。对份空白溶液进行平行测定,以倍标准偏差计算得检出 限为. /。 血清样品由河南师范大学校医院提供,唾液和尿样均采自人体,样品经稀释一定倍数后按照上述实 验方法进行测定,并做加标回收实验,测定结果见表,与经典的考马斯亮蓝法作对照,两者测定结果一 致。实验表明,本方法简便、快速、稳定、可靠,适用于现代生物科学研究、临床诊断、质量检验等工作中 万方数据第期 崔凤灵等:忖嘌呤一蛋氨酸探针测定生物样品中蛋白质含量 大批量样品的快速测定。 表血清、尿样、唾液样品的分析结果 , 。 , , , ..,....,: , ~, , , , ?, 崔风灵,王俊丽,崔延瑞,渠桂荣, 卢雁,樊静. 光谱学与光谱分析,,:~, , ?厉朝龙,陈枢青,刘子贻.浙江大学 生物化学与分子生物学实验技术,浙江: 出版社,:~?, 。 , , 宋桂兰,任嗥,贾素贞,顾艳春,田永福. ..蝴.分析化学,。:~, , 刘保生,高静,杨更亮. ...分析化学, .:, 冯宁川,龚国权.,...分析化学。,: ~, , , , 李燕。宋桂兰,卢燕,杨兴,魏琴.分析试验室,。:~? , , 邹永德。壬进,莫金垣,张润建. , 分析测试学报,,:~ ,,?, ,陈国珍,黄贤智,郑朱梓.许 金钩,王尊本. ,.荧光分析法,第二版.: 北京:科学出版社,: , 。 ..,,,:~ , .,,:~...,,:~ ,, 。 , , 唐波,杜呜.陈蓁蓁,张慧,沈含熙. 化学学报。,:~, 霍湘,王安利,杨建梅. 生物学通报,。 。 :~, , ?。 , 张华新,颜承农,童金强。梅平,李克 华. 化学与生物工程.,:~, , 张国文。王安萍。蒋婷.光谱学与光谱分析,,:~ 万方数据分析化学 第卷 一 一一 一 。。 , ? ?’。 ?。 , 。 。 ??. ? ? 一一一一, . . , . . . ./, / 卧 ,? .. /. , .%一.%. . . ? 一?一一一; ; ;? .量蚤圣圣.量.量一圣量圣.量圣一.量量卜量.圣量量圣量圣圣量.圣一童一圣?啼圣.圣圣量圣.量啼圣圣圣量扣量 《热分析与量热仪及其应用》第二版 该系统地介绍了各类热分析与量热仪的原理、基本结构、元件和单元;各类热分析与量热仪及标志仪器性能的各 项指标。表征实验数据质量的各项参数;影响实验结果的各种因素和各项标准实验方法;数据库的建立、维护与查询,以 及计算机病毒的一般性常识;并以聚合物、药物和矿物为例,列举了典型应用。以及微量量热技术在诸多方面的应用;仪 器的常见故障处理等。该书可供热分析与量热学科研与技术人员阅读,也可 供大专院校、科研单位、工厂等有关人员参 考。 该书 ???一由化学工业出版社出版,刘振海、徐国华、张洪林编著,定价.元。 万方数据N-6-嘌呤-蛋氨酸探针测定生物样品中蛋白质含量 作者: 崔凤灵, 邢卫卫, 江晓莹, 张晓丽, 程姗, 霍瑞娜, CUI Feng-Ling, XING Wei-Wei , JIANG Xiao-Ying, ZHANG Xiao-Li, CHENG Shan, HUO Rui-Na 作者单位: 河南师范大学化学与环境科学学院,新乡,453007 刊名: 分析化学 英文刊名: CHINESE JOURNAL OF ANALYTICAL CHEMISTRY 年,卷期: 2011,395 参考文献16条 1.Cui F L.Kong X D.Qin L X.Zhang G S,Liu Q F,Lei B B,Yao X J Specific interaction of 4'-0-a-L- Cladinosyl daunorubicin with human serum albumin: The binding site II on HSA molecular using spectroscopy and modeling[外文期刊] 200903 2.崔风灵.王俊丽.崔延瑞.渠桂荣 卢雁 樊静 查看详情 200802 3.厉朝龙.陈枢青.刘子贻 生物化学与分于生物学实验技术 1999 4.宋桂兰.任?.贾素贞.顾艳春 田永福 酶催化分光光度法测定蛋白质[期刊 论文]-分析化学 200705 5.刘保生.高静.杨更亮 吖啶橙-罗丹明6G荧光共振能量转移及其罗丹明6G荧光猝灭法测定蛋白质[期刊论文]-分析 化学 200504 6.冯宁川.龚国权 查看详情 200404 7.李燕.宋桂兰.卢燕.杨兴,魏琴 荧光镓-SDS共振瑞利散射法测定蛋白质的研究[期刊论文]-分析试验室 200903 8.邹永德.王进.莫金垣.张润建 用碳糊修饰电极测定氨基酸的伏安法研究?.色氨酸和酪氨酸在聚酰胺修饰碳糊电 极上的电化学行为[期刊论文]-分析测试学报 199902 9.陈国珍.黄贤智.郑朱梓.许金钩,王尊本 荧光分析法 1990 10.Sharma H.Jain V K.Khan Z H 查看详情 200701 11.Patra D.Mishra A K 查看详情[外文期刊] 200101 12.Hu Z.Tong C Synchronous fluorescence determination of DNA based on the interaction between methylene blue and DNA[外文期刊] 200702 13.唐波.杜鸣.陈蓁蓁.张慧 沈含熙 三维同步偏振荧光光谱研究蛋白质溶液变性时氨基酸残基的发光行为[期刊论 文]-化学学报 200412 14.霍湘.王安利.杨建梅 含硫氨基酸的抗氧化作用[期刊论文]-生物学通报 200604 15.张华新.颜承农.童金强.梅平 李克华 三维荧光光谱法研究桑色素与蛋白质的耦合反应[期刊论文]-化学与生物 工程 200504 16.张国文.王安萍.蒋婷 查看详情 200805本文读者也读过5条 1. 何文英.张连华.陈光英.彭?.HE Wen-Ying.ZHANG Qiong-Mei.CHEN Guang-Ying.PENG Jing 光谱法研究文多灵 碱与牛血清白蛋白的键合[期刊论文]-光谱实验室2008,255 2. 王锐.白燕.梁志红.刘莺.黄莉莉.郑文杰.WANG Rui.BAI Yan.LIANG Zhi-Hong.LIU Ying.HUANG Li-Li.ZHENG Wen-Jie 硒代蛋氨酸与铜离子的相互作用[期刊论文]-物理化学学报 2010,2612 3. 卢艳梅.区志镔.刘海峰.乐学义.LU Yan-Mei.OU Zhi-Bin.LIU Hai-Feng.LE Xue-Yi 三元TBZ/HPB-铜?-L-蛋 氨酸配合物的合成、表征、抑菌活性及与DNA的作用[期刊论文]-无机化学 学报2011,274 4. 杨永兰.夏淑芳.刘骥.乐国伟.施用晖.YANG Yonglan.XIA Shufang.LIU Ji.LE Guowei.SHI Yonghui 蛋氨酸羟基