中药三黄汤、小檗碱对E．coli生长抑制作用与庆大霉素的比较

中药三黄汤、小檗碱对E．coli生长抑制作用与庆大霉素的比较 中药三黄汤、小檗碱对E(coli生长抑制作 用与庆大霉素的比较 应用与环境生物2003,9(3):302306 ChinJApplEnvironBiol=1SSN1006-687X20o35 中药三黄汤,小檗碱对E.coli生长抑制作用 与庆大霉素的比较术 刘玉庆张玉忠刘胜贵金建玲高培基一 (山东大学微生物技术国家重点实验室济南250100) 摘要庆大霉素对E.coli的抑菌作用强,试管稀释法,琼脂稀释法和平板抑菌圈法抑菌试验得到一致的MIC(3—5 g/mL);三黄汤,小檗碱抑菌作用弱而稳定,试管稀释法测得的MIC分别为500ms/mL和2.5ms/mL,而用平板抑 菌圈法得不到明显的抑菌圈.在亚MIC药物液体分批培养时,庆大霉素抑菌曲线起初2h迅速下降,而后回升到初始 浓度,而三黄汤抑菌曲线平缓稳定,说明中药和抗生素的抑菌机制明显不同.庆大霉素与小檗碱混合使用时,与庆大 霉素单独使用相近,而与三黄混合使用时,则主要现三黄汤的抑菌作用.因此中西药结合时需要慎用.在接近MIC 药物培养基中连续传代20次后,庆大霉素MIC提高8倍多,而三黄汤和小檗碱MIC无显着变化,无抗药性产生,也不 产生对庆大霉素的交叉抗药性.研究结果还表明,在1/4MIC三黄汤 中连续传代20次,能消除Ecoli已形成的庆大霉 素抗性,这为解决抗生素抗药性提供了线索.图4参23 关键词三黄汤;小檗碱;庆大霉素;抑菌作用;抗药性 CLCR285.5 CoMPARATIVEINHmIToRYEFFECTSoFSANHUANG. BERBERINEANDGENTAMICINAGAINST.C伽 LIUYuqing,ZHANGYuzhong,LIUShenggui,JINJianling&GAOPeiji一 (StateKeyLaboratoryofMicrobialTechnology,ShandongUniversity,Jinan250100,China) AbstractLBdilutiontests,Agardilutiontests.Diskdiffusiontestsindicatedidenticallythatinhibitoryactivityofgentamicin toE.colwasstrongwithMICof3—5g/mL.ButChineseTraditionalMedicine sanhuangandberberineexertedweakanti. bacteria1.effectbyLBdilutiontests,inwhichMICwere500ms/mLand2.5ms/mL,respectively,andnoclearzonesof growthinhibitionwereobservedinDiskdiffusiontests.Intheliquidbatchculturefor12hinthepresenceof1ixS/mLgenta— micin,thekillingCurveofE.colidecreasedquicklyinthefirst2h,andlater,increasedtothebeginningconcentration, and whenexposedto250ms/mLsanhuangor1ms/mLberberine,killingcurveskeptflateonbeginningleve1.When1/2MIC gentamicinand1/2MICberberinecoexisted,thegrowthinhibitionofE.colibygentamicinwasnotaffected,otherwise,when 1/2MICgentamicinand1/4MICsanhuangwasusedatthesametime,thegrowthinhibitionofE.colibygentamicindisap. peared.Therefore.themechanismsofgrowthinhibitiontoEcoliwereobviouslydifferentforgentamicinandChineseTradi. tionalMedicine,anditshouldbepaidmuchattentiontothecombinationalusingofChineseTraditionalMedicineandwesterrl medicine.After20timesserialpassagewithnighuponMICgentamicinand10%inocula,theMICofgentamicintoE.coli rosefrom4ixS/mLto25ixS/mLMIC,significantresistanceoccurred.When20timesserialpassagewasperformedwith1/4 MICsanhuangor1/2MICberberine,theMICsofsanhuang, berberineandgentamicinallhadnochange.Whatismorevalua. bleisthatresistanceofE.colitogentamicinwasreversedafter20timesserialpassagein125ms/mLsanhuang,whichprovid. edaapproachtosolvetheproblemofantibioticresistance.Fig4, Ref23 Keywordssanhuang;gentamicin;berberine;inhibition;antibioticresistance CLCR285.5 以抗生素为代表的现代化学治疗以病原菌为作用对象,抑 制机理清楚,抑菌作用明显.随着抗生素的广泛使用,现代集约 收稿日期:2oo31-20接受日期:2oo33.3l }山东省科技发展项目(No.012100104)SupportedbvScience andTechnologyDevelopmentProgramofShandongProvince(No. 0l2loolO4) }}通讯作者Correspondingauthor(Tel:86-531-8564326;Fax:86. 531-8564326;E—mail:gaopj@sdu.edu.cn) 化养殖业中烈性传染病得到了有效的遏制,感染对象由健康畜 群和未免疫畜群,转变为有基础疾病,诱发因素和免疫功能受 损者;病原菌由强毒株扩大到具有抗药性的条件致病菌甚至动 物正常菌群….因为普遍上升的细菌抗药性,单靶位作用的抗 生素的疗效显着下降,增加用药剂量,又增加了毒副作用和在 畜产品中的药残;而应用已两千多年的中药却未见导致明显的 抗药性. 3期刘玉庆等:中药三黄汤,小檗碱对E.coli生长抑制作用与庆大霉素的比较303 大肠杆菌是肠道正常菌,在正常的机体防御体系中,不会引 发疾病,但在集约化养殖中,因免疫损伤,免疫抑制,环境污浊, 其它疾病引起的粘膜损伤等原因,由大肠杆菌0.,0z,0s,0” 0,0.等菌株引起的鸡大肠杆菌病(Aviancolibacillosis)频繁发 生,造成严重损失.由于血清型较多,疫苗防治困难,抗生素治疗 也因细菌抗药性增强和肠道菌群紊乱屡有失败.中医温病 学总结了具有发热症状的传染病的临床治疗经验,与现代医学 的传染病大致相当,它从清热解毒,凉血人手,辨证施治,临床疗 效比较可靠.但主要以人和动物整体作为治疗对象,而未述及这 些方剂的抑菌机理.虽然已对部分中药主要成分的抑菌机制 进行了探讨,但难以认为它即代表中药方剂的抑菌机制.我们 从众多的抗生素和清热解毒中药中筛选出对人工急性感染鸡大 肠杆菌病有效的庆大霉素,三黄汤作为中西药的代表-o,系统 研究其抑菌机制,抗药性和联合使用特点,以期在理论和实践中 正确使用中药,提高对细菌感染的治疗效果. 1材料与方法 1.1菌种 E.coli0株(CVCC249),国家兽医微生物菌种管理保存 中心株.1O一1O个处于指数生长期E.coli的接种量 (0.1mL)作为一个标准接种单位(StandardInoculationUnit, SIU). 1.2药品 三黄汤,演自张仲景《金匮要略》泻心汤方剂J.黄连200 g,黄柏200g,大黄100g,均产于四川,传统方法煎煮2次,纱 布过滤,用手挤压药渣残液,合并浓缩至约125mL,10000r/ min,15min离心去沉淀,定容至250mL,每mL含2g生药, 其浓度为2000ms/mL. 盐酸小檗碱,黄连,黄柏的主效成分.原粉,批号010311, 纯度99.5%,四川什邡华安药物原料有限公司生产. 硫酸庆大霉素,批号0201082,安瓿装注射液8Omg(2mL), 济南永宁制药股份有限公司生产. 纸片:用101型新华快速定性滤纸,制成1cm直径单层圆 片,于空平板中灭菌,6o?烘干后,滴加药物,测定药物抑菌圈. 1.3培养基 液体LB培养基:蛋白胨2g,酵母粉1g,食盐1g,水200 mL,pH7.4;固体LB培养基加琼脂粉1.7%;半固体LB培养 基加琼脂粉1%,与固体培养基一起组成双层平板. 1.4三黄汤,小檗碱,庆大霉素的抑茵试验 1.4.1试管稀释法试管中用液体LB将三黄汤配制成 2000,1000,500,250,125,62.5,31.25,15.625ms/mL;庆大霉 素稀释成400,200,100,50,25,12.5,6.25,3.125,1.56,0.78, 0.39g/mL.每个浓度1mL,各三重复.每管加人一个标准 接种单位.充分振荡混匀后,37?培养12h,每管取0.1mL 涂布LB平板,倒置,37?培养24h,计数每个平板菌落数.取 上述每管培养液一滴,移到载玻片上,观察菌落,菌体形态. 1.4.2双层平板纸片扩散法.取一个标准接种单位加 人5mL的6o?水浴保温的1%琼脂LB,迅速振荡混匀,倾注 到凝固的底层15mL的1.7%琼脂LB,做成双层平板.用液体 LB将三黄汤稀释成2000,1000,500,250,125,62.5ms/mL;庆 大霉素稀释成400,200,100,50,25,12.5g/mL.每浓度取2O 滴加到1个纸片;另外分别于4纸片上,用2000ms/mL三 黄汤原液滴加纸片,在酒精灯火焰上方间歇温和烤干,反复1, 2,3,4次,使其浓度分别为2,4.6,8s/mL,37oC干燥12h.在凝 固的双层平板上贴上药物纸片,37?培养24h,用游标卡尺 测定抑菌圈. 1.4.3双层琼脂平板稀释法5mL的6o?水浴 保温的1%琼脂LB加有一个标准接种单位和相应的LB稀释 的药物,最终三黄汤稀释成2000,1000,400,200,100,50mS/ mL;庆大霉素稀释成2O,10,5,2.5,1.25,0.625S/mL.迅速 混匀倒人底层1.7%琼脂LB平板上,水平放置,37?培养12 h,计数每个平板菌落数.小檗碱也按上述3种方法测定抑菌 作用. 1.5在亚MIC下分批培养时三黄汤,小檗碱,庆大霉 素对E.coli群体生长的抑制作用比较 用液体LB配制药物培养基:LB,SH(含三黄汤250mS/ mL),BB(含小檗碱1ms/mL),GM(含庆大霉素1s/mL),GS (含三黄汤250ms/mL,庆大霉素1Ixs/mL),GB(含小檗碱1 ms/mL,庆大霉素1s/mE).取各药物培养基50mL,均接人 1O处于指数生长期的E.coli菌种,置37oC,140r/min振荡 培养12h.每隔1h取样0.1mL,10倍稀释涂平板法计菌落 数,绘制抑菌曲线--. 1.6在不同药物浓度下连续传代E.coli对三黄汤, 小檗碱,庆大霉素敏感性的变化 将1O处于指数生长期的E.coli菌种分别接种于均为20 mL的含不同浓度庆大霉素的LB培养基(2,4,8s/mL),含不 同浓度的小檗碱LB培养基(2,4,8ms/mL)和三黄汤LB培养 基(125,250,500,1000ms/mE),置37?,140r/min振荡培养 12h.然后每隔12h取10%培养物转接相同的新培养基,连续 移种传代2O次,每次用1O倍稀释涂平板法测定菌数.并于第 2O次测定其庆大霉素MIC.将在三黄汤,小檗碱,庆大霉素不 同培养基中转接2O次后的Ecoli按上述方法均在125ms/mL 三黄汤LB培养基中再分别转接2O次,用试管稀释法测定第 2O次传代各菌株对庆大霉素MIC. 1.7微茵落培养法连续观察庆大霉素,三黄汤对E. coli的抑制和微茵落的形成?J 每个平板中放置1个洁净的载玻片,下垫短玻棒使其倾 斜,2个盖玻片,灭菌.取6O的1%琼脂的LB培养基沿斜坡 倾倒,使其自然流下,完全覆盖载玻片下3/4,室温放置2d使 水分蒸发.用其中1个盖玻片切下周围培养基,留下略小于盖 玻片的培养基,1个标准接种单位稀释1O倍取0.1mL涂布其 上,贴上100Ixs/mL庆大霉素,1000ms/mL三黄汤半圆纸片, 纸片直边与培养基一边对齐,盖上盖玻片,周围用香柏油封住. 37?下置显微镜下连续观察庆大霉素,三黄汤对E.coli的抑 制和微菌落的形成过程. 2结果与分析 2.1三黄汤,小檗碱,庆大霉素的抑菌试验 2.1.1试管稀释法庆大霉素培养基中目测和平板涂布3 Ixs/mL以上均无生长,故MIC为3IXS/mL.三黄汤培养基中目 应用与环境生物ChinJApplEnvironBiol9卷 测难以确切判断细菌生长状况,l000,2000mg/mL管培养液 很粘滞,有移动缓慢的小球和小杆状颗粒,无活动性;500me,/ mL管中有移动缓慢的小球和小杆状颗粒,活动性增强,见部分 颗粒聚团;250mg/mL以下管有游动的细小规则颗粒,随浓度 降低渐见短杆状,到15.625ms/mL管以长杆状菌体为主,有 少量的短小杆状菌体.移种平板涂布培养,500ms/mL管以上 仅有零星生长,故三黄汤MIC为500ms/mL.小檗碱MIC为 2.5ms/mL,此时已具饱和结晶.按三黄汤含小檗碱5%计算, 三黄汤MIC时500mg/mL当含小檗碱25mg/mL,远高于小檗 碱的MIC,所以三黄汤的营养作用和理化性质部分地抵消了小 檗碱的抑菌作用. 镜检显示了三黄汤培养液中菌体形态和数量的变化,随着 三黄汤浓度提高,LB培养基颜色变深,粘稠性增强,菌体变小 变形,聚团,活动性减弱和消失. 巨 矗 磊 舀 ?N 埘 匿 粗 最 28 10 10100 p(Oentarnicin)/~tgmE 图1庆大霉素的浓度(P)和抑菌圈直径(d) Fig1p/gmLandd/ramofzonesof growthinhibitionofgentamicin 2.1.2双层平板纸片扩散法庆大霉素的抑菌圈清晰圆 整,较大,符合抗生素抑菌圈特点(图1),回归直线斜率为4.4 mm/ug.菌落清洁均匀,菌体呈杆状.三黄汤无庆大霉素样的明 显抑菌圈,而且纸片近缘有肉眼可见的大菌落.这些黄染的大 菌落提示三黄汤的营养作用或促进作用. 2.1.3双层琼脂平板稀释法在大于5S/mL庆大霉素 的平板中无菌落生长,MIC测定值接近试管稀释法结果. 2000,1000mg/mL三黄汤板未凝固,粘稠液状,有黑色片状大 颗粒,无菌落出现;其余都有菌落生长.对2000,l000ms/mL 板未凝固的粘稠液体移种到另外的LB平板上,来自l000ms/ mL板的接种物仍有大量大菌落长出.推测三黄汤MIC为l000 — 2000ms/mL. 2.2在亚MIC下分批培养时三黄汤,小檗碱,庆大霉 素对E.coli群体生长的抑制作用比较 由图2可见,在1IXS/mL庆大霉素存在时,Eco如的生长 受到显着的抑制,培养4h的菌落数降到最低,但随即迅速持 续增长,12h达到接种时水平.通常把这类现象归之为已存在 于原培养中抗药菌株的增殖所致. 小檗碱和三黄汤都表现出一定的抑菌作用,在12h振荡 培养下,与无药LB对照相比较,E.coli未表现显着增殖.但三 黄汤在8h以后菌落数呈缓慢上升趋势. 均为亚MIC的三黄汤与庆大霉素联合应用时,菌落数的 增殖,与单独应用三黄汤相近,庆大霉素显着的抑菌作用未表 现出来;而小檗碱与庆大霉素联合应用的结果则与庆大霉素单 独使用相近,且菌落数始终保持在较低水平,未见回升. . 州盘一 f 厶 图2不同药物中E.coli生长抑制曲线 Fig2KillingcurvesofE.coliinvariousdrugs LB(?),,J,檗碱Berberine(×), 三黄汤Sanhuang(口),庆大霉素Gentamicin(?) 8 6 目 \ , ,?, bo4 图3不同药物组合中Ecoli生长抑制曲线 Fig3KillingcurvesofEcoliinvariousdrugscombination LB(?),庆大霉素+三黄汤Gentamicin+Sanhuang(×), 庆大霉素+小檗碱Gemamicin+Berberine(?) 2.3在不同药物浓度下连续传代E.coli对药物敏感 性的变化 从图4可见,在亚MIC(2v#mL)庆大霉素下,以10%接 种量连续培养传代时,Ecoli菌数与无药正常培养时无显着 差异.但在高于MIC的4g/mL或8g/mL条件下连续培养 传代时,虽然最初l,2代菌数特别低(多数E.coli已被庆大霉 素杀死),但此后菌数迅速上升,至l0代以后,其每批次培养可 达到的菌数(在4S/mL到8g/mL庆大霉素仍然存在时), 已与对照情况相近.再继续培养菌数未见变化,且三种浓 度庆大霉素培养物MIC在经20次连续培养传代后都增加到 25S/mL,较出发菌株增加8倍之多,这与临床上常见的长期 服用一种抗生素所出现的抗药性情况很相近. 该抗药性菌株再于125ms/mL三黄汤中连续20次传代培 养,其对庆大霉素的MIC又回复到1.56IXS/mL. 在小檗碱中连续培养传代时,Ecoli菌数的变化趋势与 庆大霉素相似,但检测20次传代后其对庆大霉素,小檗碱的 MIC未见明显变化. 三黄汤仅在低于250ms/mL药物浓度下始可连续传代培 3期刘玉庆等:中药三黄汤,小檗碱对E.coli生长抑制作用与庆大霉素的比较 养,高于此浓度时,E.coli菌数很少,无法连续传代.多次传代 后Ecoli对三黄汤的MIC无变化,而且对庆大霉素的MIC也 无变化. 该试验说明三黄汤,小檗碱与庆大霉素无交叉抗药性,且 可以阻止和消除E.coli对庆大霉素抗药性. 10 8 6 d 2 一 10 { 8 —- 专 8 6 0 Z4 0l234S678910l1l213l41Sl617l8l9202 传代次数Passagetimes 图4不同药物连续传代对E.coli生长抑制曲线比较 Fig4KillingCUITeSofvari0usdrugstoEcolifor20 timesserialpassage 3讨论 本研究工作是仅从药物对Ecoli生长及MIC的影响进行 的试验,但已显示出中药制剂和抗生素等药物对Ecoli生长 抑制机制的不同和抗药性的显着差异. 3.1三黄汤抑菌机制 综合比较以上3种常用的抑菌试验方法的结果,可以看出 三黄汤类中药制剂对大肠杆菌的抑制作用机理与庆大霉素等 抗生素存在显着差异. 庆大霉素抑菌作用机制主要是干扰原核细胞中70S核糖 体的解离及fMet—tRNA解离,抑制蛋白质的合成起始和肽链 的延长.细菌对庆大霉素抗药性机制主要是产生质粒编码 的相应的钝化酶(AAC,ANT,APH),使其失活;也有16SrRNA 和S16核蛋白突变,降低与氨基糖苷类抗生素结合的机制. 庆大霉素具有特异性的抑菌能力和清楚的抗药性机制,因此用 试管稀释法和纸片抑菌圈法可以得到准确一致的MIC. 中草药是植物水煎提取物,是很复杂的混合物,与各组成 药材的产地,批次有关.在表现抑菌成分活性的同时,毫无疑问 会增加培养基的营养成分,尤其是糖类.随着浓度的提高,粘 性,渗透压,pH等理化性质变化愈加明显,正负两种因素都会 影响细菌的生长和分裂.三黄汤及其主效成分小檗碱对Ecoli 的生长为非特异性的抑制作用,在药物平板上不表现为清晰透 明的抑菌圈,也很难准确地测出其MIC,但镜检不同药物浓度 下生长的Ecoli细胞,其形态变化还是明显的.在高浓度三黄 汤中,由于制剂同时含有大量的糖类,蛋白等,在纸片边缘无抑 菌圈,并且还会出现生长旺盛的大菌落.以在双层平板上菌落 生长有无为据,可近似地推断出三黄汤和小檗碱的MIC,但在 药物浓度增大时会有琼脂难以凝固等技术问题. 在亚MIC下进行摇瓶培养,由菌落数表征生长时,庆大霉 素和三黄汤,小檗碱对E.coli生长的影响则清楚可见.庆大霉 素的抑菌,杀菌及长期培养时抗性突变株的出现都可由菌数变 化清楚表现出来.而与对照LB相比较,三黄汤,小檗碱在远较 试管稀释法和纸片法的MIC为低的浓度下的抑菌作用也很清 楚(图2,4). 小檗碱由于溶解度低,会随着小檗碱被细菌的消耗而逐步 释出,持续抑菌.小檗碱对痢疾杆菌,金黄色葡萄球菌抑菌作用 最强,对大肠杆菌,伤寒杆菌等较弱’J.荧光光谱分析认为其 抑菌机制可能是小檗碱的异喹啉端插入到DNA双螺旋的沟槽 中,抑制DNA的复制与转录.小檗胺,黄柏碱,大黄酸,大黄 素等其它微量成分也具有抑菌作用J. 三黄汤中小檗碱物质等的抑菌作用和其它复杂成分的理 化作用构成三黄汤的综合抑菌机制,是全面,持续的生理性抑 制,完全不同于庆大霉素等抗生素的单靶位抑制和杀灭作用, 也不能用单纯的小檗碱抑菌作用解释.另外,在体内作用时,三 黄汤还可能通过免疫系统抑制细菌J. 3.2三黄汤无抗药性的原因 长期使用一种抗生素会导致抗药性菌株的出现,虽然关于 它的始发机制在遗传学上仍存在争论,但它在医疗实践中已成 为共认的难题.由于三黄汤上述集抑菌物质,物理化学作用于 一 体的综合抑制机制,所以在近于MIC浓度液体培养条件下, 三黄汤抑菌曲线平缓,始终呈微弱的抑制细菌增殖的作用;连 续传代,其MIC也无变化,也不影响对庆大霉素的MIC,说明 这种机制很难导致抗药性菌株产生,这可能是中药使用数千年 来未见产生抗药性的原因.中药的汤,丸,膏,散都是提高浓度, 加强局部高浓度下的抑菌作用.三O二医院总结24年所治疗 的8376例急性痢疾,磺胺类,抗生素类,痢特灵等的疗效逐年 下降,唯有小檗碱疗效一直稳定,而实验室药敏试验因为其 MIC过高总认为”耐药或不敏感”J. 特别应予注意的是在庆大霉素与三黄汤或小檗碱联合应 用时,庆大霉素单独应用时由于抗药性菌株优势生长造成的菌 数再增殖现象未出现(图3).且三黄汤能使已形成的庆大霉素 抗性很快回复,重新敏感.这在解决庆大霉素抗药性,减少其残 留,保证其长久敏感抑菌的研究中有重要意义. 本试验表明,E.coli对庆大霉素的敏感性与其生理状态 有关,而三黄汤的应用在一定浓度下改变了细菌的生理状态. 从而间接导致其对庆大霉素抗性的变化.对抗庆大霉素的抗性 菌株的出现则表现出更为复杂的情况,它要结合抗性菌株发生 频率分布的变化和菌株基因序列分析始可作出判断,本文中仅 应用与环境生物ChinJApplEnvironBiol9卷 有MIC变化的检测尚不能由此作确切性的分析. 一 些初步的试验更进一步显示,恰当联合用药则可望解决 抗生素抗药性这一难题”. 3.3中药抑菌试验的方法学 抑菌试验的基本原理是在不连续的药物系列稀释的液体 或固体培养基中,或者在由药物纸片,牛津小杯,孔沟中扩散形 成的连续稀释的固体培养基上,通过检查有无肉眼可见菌落和 细菌浊度,找出最低的抑菌和杀菌浓度. 传统的药物敏感性试验主要针对抗生素等简单的单纯化合 物,它们对培养基的营养成分和理化性质基本都无影响,因此用 LB或MH培养基可以标准化测定抗生素的抑菌力,各种方法测 定的结果比较一致;鉴于大多数的中药颜色深,浊度高的理化性 质,根据菌液浊度目测或分光比色无法判断细菌的生长;固体琼 脂稀释的药物浓度太低,达不到中药的抑菌浓度;由于琼脂去掉 了中药的液体性质,抑菌圈也不易得到.试管稀释后平板涂布检 验的试管稀释法被大多数试验采用,它更近似地模拟了中药的 原初状态和体内作用形式.微菌落检验法进一步减少了样品量 和检验时间,提高了菌落的检出率和对菌落变化细节的了 解.微量量热法通过对细菌生长过程热效应的灵敏检测判断 药物对细菌生长的影响,更适合研究天然中药的抗菌作用J. 三黄汤的MIC高于庆大霉素5—10万倍,但应注意三黄汤 等中药浓度的规定方法是每mL药液中含的生药量,而非纯抑 菌成分,与庆大霉素的MIC有明显的不同.本研究工作是一些 探索性的试验,但它提示无论是MIC的检测方法,还是中药制 剂的抑菌结果的判断都不能盲从于惯用的抗生素的检测方法. 3.4三黄汤抑菌作用的配合作用 常规的微生物培养是在液体,凝固或半凝固的琼脂中进行, 而且经典的微生物分类鉴定恰是依据在标准或者常用培养方法 下细菌的形态,生理,生化和遗传行为划分的,而中药培养基表 现出异乎常规的性质,必然影响细菌的生存方式,更广泛的情况 是动物体腔表面粘膜分泌丰富的粘液,那么粘膜表面的细菌行 为肯定不同于体外培养方式.三黄汤的抑菌更接近于粘膜表面 的抑菌行为:三黄汤通过小檗碱等持续缓释和物理化学作用,抑 制细菌的繁殖,大黄有显着的泻下作用,这样可以使抑制住的异 常菌群及毒素迅速排出肠道,大黄的鞣质调节泻下程度,并在泻 后促进肠道功能恢复和粘液正常分泌,蛋白质,多糖,寡糖促进 正常菌群重新形成,对饮食较差的病鸡也起到营养作用.小檗碱 还有很强的解热作用,可以迅速缓解内毒素引起的发热.而 庆大霉素等抗生素选择性抑制和杀死病原菌,也特异性地选择 了抗药性菌株,包括正常菌群,反复使用易导致菌群失调和二次 感染.杀死的菌体释放内毒素增加了对机体的损伤. 中药和抗生素的免疫作用也各不相同,抗生素以免疫抑制 居多,而中药适当配伍及其植物天然的多糖,寡糖,寡肽多对免 疫系统有促进作用.三黄汤的免疫机理需要另作研究. 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