复方木鸡颗粒检测方法研究

复方木鸡颗粒检测方法研究 药物分析杂志ChinJPharmAnal2007,27(8) 复方木鸡颗粒检测方法研究 黄海燕,鲁静 (1.桂林食品药品检验所,桂林541002;2.中国药品生物制品检定所,北京100050) 摘要目的:建立复方木鸡颗粒的鉴别和含量测定方法.方法:采用薄层色谱法对制 剂中的山豆根,核桃楸皮进行鉴别.用 高效液相色谱法对制剂中山豆根的苦参碱进行含量测定,色谱柱为KromasilC,柱 (250mm×4.6mm,5Ixm),乙腈一甲醇一 [磷酸盐缓冲液(pH6.8)一三乙胺(70:0.1)](16:16:68)为流动相,流速:1.0mL?min,, 检测波长为220am,柱温:30?. 结果:薄层色谱鉴别特征斑点明显;含量测定苦参碱在0.216,2.16Ixg范围内线性 关系良好,回归方程:Y=8.870×10X一 1.267×10,r=0.9995.平均回收率为102.4%(n=9).结论:本法准确可靠,可作为复方 木鸡颗粒的质量控制方法. 关键词:复方木鸡颗粒;TLC;HPLC;苦参碱 中图分类号:R917文献标识码:A文章编号:0254—1793(2007)08—1190—03 StudyonthequalitycontrolmethodofcompoundMujigranules HUANGHai—yan,LUJing (1.GuilinInstitueforFoodandDrugControl,Guilin541002,China; 2.NationalInstituteforPharmaceutical&BiologicalProducts,Beijing100050,China) Abstract0bjective:ToestablishaqualitycontrolmethodforcompoundMujigranules.Metho ds:RadixSophorae TonkinensisandCortexJuglandisinthedrugwereidentifiedbyTLC.Thecontentofmatrinei nRadixSophorae TonkinensisofthedrugweredeterminedbyHPLC,usingaKromasilC18(250mm× 4.6mm,5Ixm)column,and acetonitrile—methanol一[phosphatebuffer(pH6.8)一triethylamine(70:0.1)](16:16:68)asthemobilephase; theflowratewas1.0mL?min,:thedetectingwavelengthwas220nm.Results:TheTLCspot sdevelopedwere quiteclear.Thecalibrationcurveofmatrinewaslinearwithintherangeof0.216—2.16txg,theaveragerecovery was102.4%(n=9).Conclusion:Themethodcanbeusedforthequalitycontrolofcompound Mujigranules. Keywords:compoundMujigranules;TLC;HPLC;matrine 复方木鸡颗粒收载于部颁标准《中药成方制 剂》第十六册…,处方由云芝提取物,山豆根,菟丝 子和核桃楸皮组成,具有抑制甲胎蛋白升高的作用, 用于治疗肝炎,肝硬化,肝癌.现行标准无专属性的 鉴别和含量测定项.本文采用薄层色谱法对制剂中 山豆根和核桃楸皮进行鉴别,并建立了高效液相色 谱法测定山豆根所含苦参碱的含量,结果较为满意. 1仪器与试药 LC一2010A高效液相色谱系统及CLASS—VP色 谱工作站(日本岛津);苦参碱对照品(110805— 200306),山豆根对照药材(976—200202),没食子酸 对照品(110831—200302)均由中国药品生物制品检 定所提供;硅胶G板:烟台市化学工业研究所;甲醇, 乙腈为色谱纯,其余试剂均为分析纯,水为高纯水. 第一作者Tel:(0773)2852843—815;E—mail:hhyzjlzy@126.com 复方木鸡颗粒(规格:每袋装10g)由丹东药业 有限公司提供. 2薄层色谱鉴别 2.1山豆根的鉴别取样品1g,研细,加浓氨试液 1mL与三氯甲烷25mL,超声(功率250W,频率40 kHz)处理30min,滤过,滤液蒸干,残渣加三氯甲烷 1mL使溶解,作为供试品溶液;按处方比例自制缺 山豆根的阴性溶液;另取山豆根对照药材0.5g,同 法处理,制成对照药材溶液;再取苦参碱对照品,加 三氯甲烷制成每1mL含1mg的溶液,作为对照品 溶液.吸取上述溶液各5,分别点于同一硅胶G 薄层板上,以甲苯一乙酸乙酯一丙酮(10:20:15)为 展开剂,置浓氨试液蒸气预饱和的展开缸中,展开至 9cm,取出,晾干,喷以稀碘化铋钾试液.样品色谱 药物分析杂志ChinJPharmAnal2007,27(8) 中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的 主斑点;在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色 的斑点,阴性溶液则在与对照药材和对照品色谱相 应位置上无对应斑点.结果见图1. 45 图l山豆根的薄层色谱图 FiglTLCofRadixSophoraeTonkinensis l一3.样品(sample,LotNo.051202,060103,060203)4.苦参碱对照 品(matrinereferencesubstance)5.阴性样品(negativesamplewithout RadixSophoraeTonkinensis)6.山豆根对照药材(RadixSophorae Tonkinensisreferencemateria1) 2.2核桃楸皮的鉴别取样品2g,研细,加水20 mL和稀盐酸5mL,置80?热水中浸泡10min使溶 解,转移至分液漏斗中,用乙酸乙酯振摇提取2次, 每次20mL,分取乙酸乙酯液,蒸干,残渣加乙酸乙 酯1mL使溶解,作为供试品溶液;按处方比例自制 缺核桃楸皮的阴性溶液;另取没食子酸对照品,加无 水乙醇制成每1mL含1mg的溶液,作为对照品溶 液.吸取上述溶液各5,分别点于同一硅胶G薄 层板上,以三氯甲烷一乙酸乙酯一甲酸(6:4:1)为 展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%三氯化铁乙醇溶 液.样品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显 相同颜色的斑点,阴性溶液则在与对照品色谱相应 的位置上不显斑点.结果见图2. 誊 ; 叠 善善;墨 渗雾 |"i墓 囊 纛誊|l誊 囊毒毒 图2核桃楸皮的薄层色谱图 Fig2TLCofCortexJuglandis l一3.样品(sample,LotNo.051202,060103,060203)4.没食子酸对 照品(gallicacidreferencesubstance)5.阴性样品(negativesample withoutCotexJuglandis) 3含量测定 3.1色谱条件与系统适用性试验色谱柱:Kroma— silC】8(250mm×4.6mm,5m);流动相:乙腈一甲 醇一[磷酸盐缓冲液(pH6.8)J一三乙胺(70: 0.1)](16:16:68);检测波长:220nm;柱温:30 ?;流速:1.0mL?min,.该条件下以0.108mol? L的苦参碱对照品溶液连续进样5次,RSD为 0.41%(n=5),说明精密度良好,理论塔板数约为 6000. 3.2对照品溶液及供试品溶液的制备精密称取 苦参碱对照品适量,加甲醇溶解制成每1mL含0.1 mg的溶液,即得对照品溶液;取样品1袋,研细,取 约0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加浓氨试液1 mL与三氯甲烷25mL,超声(功率250W,频率40 kHz)处理30min,滤过,用三氯甲烷洗涤残渣,容器 及滤器,滤过,合并滤液,回收溶剂至于,残渣精密加 入甲醇5mL使溶解并摇匀,以0.45m微孔滤膜 滤过,滤液作为供试品溶液. 3.3方法学考察 3.3.1线性关系考察精密称取苦参碱对照品 10.80mg,置50mL量瓶中,加甲醇使溶解并稀释至 刻度,精密量取1,2.5,5,7.5,10mL,分别置10mL 量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀.进样l0L,测定. 以峰面积为纵坐标,进样量(Ixg)为横坐标,进行线 性回归,回归方程: y:8.870×10X一1.267×10r:0.9995 明苦参碱在0.216,2.16Ixg范围内线性关系良 好. 3.3.2重复性试验精密称取同一样品(批号为 051202)6份,每份约0.5g,按供试品溶液的制备方 法制得溶液,按色谱条件测定.结果平均含量为 1.705mg?g,.RSD为0.89%(n=6). 3.3.3回收率试验精密量取0.2142mg?mL 的苦参碱对照品甲醇溶液1,2,3mL各3份,分别置 三角烧瓶中,回收溶剂至于.精密称取已知含量的 样品(批号051202)约0.25g,共9份,分别置上述 三角烧瓶中,加浓氨试液1mL和三氯甲烷25mL, 按供试品溶液的制备方法制得溶液,按色谱条件测 定,外标法计算.测得低,中,高3个量的回收率(n = 3)分别为103.8%(RSD=1.7%),101.6%(RSD = 2.1%),101.9%(RSD=1.6%).平均回收率(n = 9)为102.4%. 3.3.4范围精密量取0.216mg?mL的苦参碱 ,同回收率试验方 对照品甲醇溶液1及3mL各3份 药物分析杂志ChinJPharmAnal2007,27(8) 法进行试验,测定结果与回收率试验项下的加入对 照品溶液1及3mL各6份的结果计算重复性,低浓 度的平均回收率为105.7%,RSD为2.4%(/Z=6); 高浓度的平均回收率为102.4%,RSD为1.2%(/Z= 6).表明本法在正常测定浓度50%一150%范围内 能够准确测定. 3.3.5空白试验按处方比例自制缺山豆根的阴 性样品,按供试品溶液的制备方法制得空白溶液,照 色谱条件测定,结果在与苦参碱对照品保留时间相 应的位置无色谱峰出现,表明处方中其他药味对测 定无干扰.见图3. 1.. 102030 ^ 1 0l(】 c 2o30t/i" 图3HPLC色谱图 Fig3HPLCchromatogTams A.苦参碱对照品(matrinereferencesubstance)B.样品(sample) C.阴性样品(negativesamplewithoutRadixSophoraeTonkinensis) 1.苦参碱(matrine) 3.3.6耐用性 3.3.6.1稳定性试验取同一份供试品溶液,自 配制后分别在0,1,4,8,12,24h测定峰面积值,结 果峰面积平均值为1441479,RSD为0.94%(/Z= 6),说明供试品溶液在配制后24h内稳定. 3.3.6.2不同色谱柱比较取同一样品,分别采用 3种型号的色谱柱:KromasilC18(250mm×4.6 mm),PhenomenexC18(250mm×4.6mm)和Ai— chromBond—AQC18(150mmx4.6mm)测定含量, 结果平均含量1.61mg?g..,RSD为1.6%(n=6). 3.4样品测定取3个批号的样品,分别按供试品 溶液的制备方法制得溶液,测定.按外标法计算. 结果见表1. 表13批样品含量测定结果(n=4) Tab1Assayofproducts 4讨论 4.1山豆根的薄层色谱鉴别中的展开剂是在文献 [4]基础上做了改进,用毒性比较小的甲苯代替苯, 四元展开剂中的浓氨试液改为用浓氨试液蒸气预饱 和展开缸,解决了因浓氨试液碱性不够造成苦参碱 斑点不圆整的问题. 4.2参考文献[5],核桃楸皮含胡桃醌及大量鞣 质.因此,薄层色谱鉴别采用酸溶液处理,鉴别没食 子酸成分. 4.3含量测定色谱条件和提取方法是在参考文献 [3]的基础上进行调整.在考察含量测定样品提取 方法时,发现加入的浓氨试液的量直接影响测定结 果,0.5g样品需加1mL浓氨试液才能提取完全. 参考文献 lDrugSpecificationsPromulgatedbytheMinistryofPublicHealth,PR China.Vol16(卫生部药品标准中药成分制剂第十六册). 1998.108 2ChP(中国药典).2005.V0lI(一部):Appedix(附录)XVD 3ChP(中国药典).2005.VolI(一部):498 4ChP(中国药典).2005.VolI(一部):558 5InstituteofMateriaMedica.ChineseAcademyofMedicalSciences(中 国医学科学院药物研究所).ReviewsofTraditionalChineseMedi— cine(中药志).Beijing(北京):People'SMedicalPublishingHouse (人民卫生出版社),1979.480 (本文于2007年1月20日修改回)